米氏硫胺素芽孢杆菌的分离及鉴定

[目的]分离、纯化土壤中的细菌,通过鉴定得到米氏硫胺素芽孢杆菌.[方法]通过生化鉴定、提取细菌基因组并进行细菌16 s rDNA测序等方法鉴定.[结果]此细菌生化鉴定结果符合《常见细菌鉴定手册》中的关于米氏硫胺素芽孢杆菌的生化鉴定,将细菌的16 s rDNA测序结果在NCBI上进行比对,表明该细菌为米氏硫胺素芽孢杆菌.[结论]分离、纯化得到的细菌经测序对比后确定是米氏硫胺素芽孢杆菌.     

新疆南疆绵羊牛无浆体病的流行病学调查

为了调查新疆南疆地区绵羊牛无浆体病的流行情况,试验从南疆喀什、和田、阿克苏和巴州四个地区21个县市采集绵羊血液样品共637份。以巢式PCR扩增绵羊血液样品中牛无浆体的16S rRNA特异性片段。PCR扩增片段为551 bp的样品为阳性样品,表示感染了牛无浆体。结果表明:新疆南疆绵羊牛无浆体的总体感染率为52. 9%,其中喀什、和田、阿克苏、巴州地区的感染率分别为55. 3%、53. 3%、51. 3%、43. 3%。说明新疆南疆绵羊牛无浆体的感染率较高,为绵羊牛无浆体病的诊断和防控提供流行病学资料。     

高致病性蓝耳病毒与低致病性蓝耳病毒RT-PCR检测方法

将高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病病毒接种于Marc145细胞培养并观察细胞病变情况,将有细胞病变的病毒进行连续传代培养。根据高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病在NSP2基因上有87 bp连续缺失,从NCBI上下载7对高致病性蓝耳病保守序列设计一对引物。通过RT-PCR方法进行检测证明实验室所保存的这两株毒株分别为高致病性蓝耳病和低致病性蓝耳病,并且建立了高致病性蓝耳病与低致病性蓝耳病的检测方法。     

多浪羊IFN-γ基因克隆及核苷酸序列分析

为了分析新疆多浪羊的IFN-γ基因,根据GenBank中NM_001009803的mRNA序列设计引物,以新疆多浪羊淋巴细胞的总RNA为模板,用RT-PCR扩增多浪羊IFN-γ基因序列。测序结果表明I,FN-γ基因序列包含了一个582 bp的开放阅读框,通过GenBank中的Blastn序列比较分析,多浪羊的IFN-γ基因与普通绵羊的同源性高达99.82%,为多浪羊IFN-γ的功能研究及多浪羊免疫应答基因的筛选奠定基础。     

叶尔羌高原鳅血液生理生化指标的测定

以雌、雄叶尔羌高原鳅[Triplophysa(Hedinichthys)yarkandensis]各26尾为研究对象,比较其血液生理生化指标的差异.结果显示,雌鳅血清中谷草转氨酶活性显著低于雄鳅(P＜0.05),碱性磷酸酶活性极显著低于雄鳅(P＜0.01),而尿酸、肌酐、钙含量显著高于雄鳅(P＜0.05),其它各血液指标雌雄鳅虽有所不同,但差异均不显著(P＞0.05).该研究为叶尔羌高原鳅的疾病防治、人工养殖及遗传育种提供了参考资料.     

MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响

通过MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响,确定棉酚对多浪羊淋巴细胞产生影响的最短作用时间和最低浓度,用于指导生产实践.从新疆多浪羊外周血分离淋巴细胞,将其加入10 mL的RPMI-1640中,均匀加入96孔细胞培养板中,于CO2培养箱中37℃培养12h后,分别以不同浓度(5、10、15、20、25、30、35 μmol/L)的棉酚进行作用,作用时间分别为1、2、3、4、5、6h,加入MTT培养4h,加入DMSO溶液终止反应,用酶联免疫检测仪于490 nm处检测各孔的吸光值.结果表明,随着棉酚作用浓度及作用时间的递增,多浪羊淋巴细胞活性在逐渐下降,说明棉酚对多浪羊的淋巴细胞活性有明显的抑制作用.     

旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选

以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫 3日龄成虫 c DNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序 ,用分子生物学软件对所得 c DNA序列进行序列分析。结果从 4× 10 5个重组噬菌体中共获得 33个阳性克隆。序列分析结果显示 :共发现新 c DNA序列 16个 ,已知 c DNA序列 4个。其中阳性克隆 Zh8,9,10 ,12 ,13,14 ,2 0 ,2 6 ,2 8,2 9,36 ,5 4 ,6 8,70编码丝氨酸蛋白酶。通过免疫学筛选直接获得了具有免疫反应原性的阳性 c DNA克隆 ,为旋毛虫病诊断抗原及保护性抗原的筛选奠定了基础     

阿克苏地区某规模化猪场猪流行性腹泻的诊断和疫苗效果评价

2021年1月阿克苏地区某规模化猪场腹泻病爆发，采用猪腹泻胶体金试剂盒检测发病仔猪腹泻物，结果显示猪流行性腹泻病毒（PEDV)阳性率为100%。为探究其原因，于2021年1—12月采集该猪场6 567份猪肛拭子，通过实时荧光定量法检测不同月份PEDV的感染情况，为防控猪流行性腹泻（PED），选用TGE-PED二联弱毒苗和灭活苗对妊娠85 d和105 d母猪进行联合免疫，应用间接ELISA法监测妊娠母猪的IgG、IgA抗体水平，并对该场PEDV疫苗免疫效果进行评价。结果显示PEDV的检出率在1月、2月、11月、12月较高，其余月份较低；妊娠母猪PEDV的抗体IgG和IgA抗体阳性率在产前15 d和分娩当天均达到了100%，离散度小于40%，免疫效果较好；产前1 d各批次PEDV的IgG抗体阳性率仍达到100%，但IgA抗体阳性率有不同程度下降，且离散度有不同程度升高，推测母猪可能存在排毒情况。本研究为该猪场PED防控提供了理论依据。     

新疆卡拉库尔羊Fas基因原核表达载体的构建及表达

根据GenBank的羊Fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物，将EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端，同时加上保护性碱基。利用RT-PCR技术，从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段。将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接，利用双酶切反应与菌液PCR对阳性重组克隆进行鉴定筛选，然后进行序列测定。使用原核表达载体pET28a来完成Fas的定向克隆，成功构建重组融合表达质粒pET-28a-Fas，然后将质粒转化至E.coli BL21感受态，设置不同IPTG浓度和诱导温度，选择最佳的表达条件，然后初步纯化重组融合蛋白。结果表明，在pET28a表达载体中，Fas基因的插入方向和读码框均正确；同时Fas基因也完成在E.coli BL21融合表达的目的，融合蛋白分子质量为39.7 ku。     

鸡源人葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性分析

为确定新疆阿克苏地区某鸡场鸡精神不振、采食量减少和死亡的原因，试验对采集自该鸡场病死鸡内脏器官进行病原的分离鉴定，并进行动物致病性试验和药物敏感性试验，分析其致病力和耐药性。结果显示，从发病鸡内脏器官中分离到一株革兰氏阳性球菌，分离菌对复方新诺明、麦迪霉素、红霉素、诺氟沙星、环丙沙星、阿莫西林、青霉素、克林霉素、氨苄西林等药物表现为耐药，对部分头孢类、四环素类、氨基糖苷类、氯霉素类和多肽类药物表现为不同程度敏感；通过对分离菌进行形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序和同源性分析，确定该分离菌为人葡萄球菌。该分离菌可引起小鼠和雏鸡死亡，死亡雏鸡以肝脏肿大出血、胃黏膜出血等内脏器官出血为主要病理变化，与自然发病一致。研究首次在鸡上分离出人葡萄球菌，为鸡的人葡萄球菌病防治和合理用药提供依据。