大肠杆菌ESBLs基因克隆表达载体的构建与鉴定

大肠杆菌是一种最常见的革兰氏阴性菌,是一种常见的条件性致病菌。由于在治疗大肠杆菌时抗生素的大量使用,使大肠杆菌产生了很多耐药基因,其中超广谱β-内酰胺酶对许多β-内酰胺类抗生素具有耐药性,且以其中的CTX-M型为主,为了更好地研究产超广谱β-内酰胺酶,本次实验通过设计并扩增产超广谱β-内酰胺酶的CTX-M-3基因,并通过Nde I、Xho I两种限制性内切酶酶切并连接,预计构建p ET-42b-ESBLs的原核表达载体,并送往上海生工公司进行测序,并对测序结果的遗传相似性及遗传进化进行分析,由于引物的特异性或模板的特殊性,测序结果显示扩增结果为DH5α染色体基因组并构建的载体是DH5α染色体基因的原核表达载体。     

山羊痘病毒晚转录因子VLTF-1的原核表达及生物信息分析

试验旨在研究山羊痘病毒晚转录因子VLTF-1的特性。研究以山羊痘病毒SS基因组株为模板,采用PCR方法扩增晚转录因子VLTF-1基因,采用基因克隆常规方法与pET-42b表达载体相连接构建原核表达载体,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定,阳性克隆转化大肠杆菌BL21,以0.1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳和Western Blot检测表达情况;同时对VLTF-1基因及其蛋白特性进行生物信息学分析。结果显示,PCR扩增的目的基因全长783 bp,与参考株Pellor同源性为100%,推测其编码261个氨基酸。遗传进化树分析表明,羊痘病毒属的3个种各分成一个分支,目的基因与山羊痘毒株位于同一分支。测序结果显示,目的基因表达载体构建正确,SDS-PAGE检测表达了27 kDa的蛋白,Western Blot鉴定表明目的蛋白得到表达。生物信息学分析结果显示,SS株的VLTF-1基因与山羊痘病毒聚于一支,该蛋白是一个跨膜亲水蛋白,具有26个磷酸化位点,二级结构是其结构连接5个α-螺旋。研究表明,试验成功克隆晚转录因子VLTF-1基因,并诱导表达蛋白,预测该蛋白的生物学信息...     

山羊痘病毒毒力因子KLP1互作蛋白的筛选与初步鉴定

为进一步研究山羊痘病毒毒力因子KLP1,了解其生物学功能,本试验构建了羊皮肤组织酵母eDNA文库及GTPV KLP1蛋白基因的诱饵质粒,并做了质粒的自激活检测.采用酵母双杂交方法,从羊皮肤组织酵母eDNA文库中筛选出与KLP1蛋白相互作用的蛋白,结果成功构建了羊皮肤组织eDNA文库,容量为1.05×107 CFU,成功...     

兽医硕士专业学位研究生开展重大动物疫情防控应急处置模拟演练的探索与体会

为适应当前重大动物疫情防控工作需要，探索应用型、复合型兽医硕士专业学位研究生人才培养方式，更好适应快速发展的畜牧业对重大动物疫情防控提出的新要求。2021年，对全日制兽医硕士专业学位研究生开展了重大动物疫情防控应急处置模拟演练。以假定校实验教学基地养猪场发生非洲猪瘟为案例，研究生根据各自承担的角色，模拟实景场地开展重大动物疫情防控应急处置模拟演练。通过模拟场景实地演练，研究生掌握了重大动物疫情处置基本流程，提高了重大动物疫情应急处置能力，模拟演练取得满意效果。本文为全日制兽医硕士专业学位研究生实践能力培养提供了参考。