副猪嗜血杆菌外膜蛋白 P5的分段表达及免疫学性质分析

为获得副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的分段表达产物,并对各片段的免疫学性质进行鉴定。采用生物信息学软件分析Omp P5全长基因,设计3对分段引物,PCR分别从HPS汕头分离株（H0801）Omp P5中扩增出P5F1、P5F2和P5F3基因片段,构建于pET-32a（＋）原核表达载体上,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE分析蛋白表达情况。将蛋白纯化后,利用ELISA及Western Blot分别鉴定其免疫原性及抗原性。结果表明,扩增得到的Omp P5的3个基因片段与预期大小相符合,基因测序结果与GenBank 公布的序列一致,经SDS-PAGE分析,3个蛋白表达相对分子质量大小都与预期相符。 ELISA和Western Blot分析显示,表达的3个蛋白表现出良好的抗原性和免疫原性。 HPS Omp P5的分段表达为进一步研究HPS保护性表位及疫苗鉴定奠定了新的基础。     

重叠片断PCR方法构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ C突变载体pBSCA(-)

通过PCR克隆得到了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型完整的apxⅡC基因和部分apxⅡA基因约2 000 bp,通过重叠片段PCR方法使apxⅡC基因缺失,并将该DNA片段克隆到PBS-T载体中构建了apxⅡC基因失活的转移载体pBSCA(-),为构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型apxⅡC缺失菌株打下基础。     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应,同时可以用于特异性的血清学诊断,本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1(1²04aa),P5F2(170204aa),P5F2(170²96aa)及P5F3(280296aa)及P5F3(280³71aa)3个片段,PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a(+)中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段(280-371aa)是Omp P5的免疫优势决定区。为了进一步对该免疫优势决定区进行抗原表位鉴定,设计了一套11个部分重叠的短肽,这些短肽覆盖全部280371aa)3个片段,PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a(+)中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段(280-371aa)是Omp P5的免疫优势决定区。为了进一步对该免疫优势决定区进行抗原表位鉴定,设计了一套11个部分重叠的短肽,这些短肽覆盖全部280³71aa片段。每一个短肽合成1对寡核苷酸链,退火后插入表达载体pGEX-6p-1,与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描,鉴定出其表位位于336 TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPS Omp P5上的一个抗原表位,为建立一种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础,同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制,以及研究病原菌感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。     

添加菌剂制作堆肥的肥效及菌群多样性分析

为了加速低温地区农牧废弃物转化为有机肥以用于培肥地力,筛选一组能够在14天内转化稻杆重量36%的菌剂。利用气质联用检测挥发性产物,发现其中含有L-乳酸、甲酸、乙酸和丙酸等多种能够培肥地力的有机质。在东北低温条件下,添加该菌剂制作堆肥与不添加菌剂的堆肥相比,添加菌剂堆温最高可达63.0℃,55.0℃以上的高温期为7天,比未添加菌剂的堆肥腐熟时间缩短17天。发酵57天后发现添加菌剂与不添加菌剂堆肥样品中可溶性糖含量分别为11.80和8.92 mg/L,C/N分别为12.65和13.69。添加菌剂培育的番茄种子和番茄幼苗长势也明显优于不添加菌剂的对照组。454高通量技术检测原菌剂与添加该菌剂制作的堆肥样品的菌群多样性,发现Bacteroides sp.、Firmicutes sp.和Clostridium sp.在2个菌群中都属于优势种,但添加菌剂制作的堆肥,其菌群多样性更加丰富。试验证明,添加菌剂制作堆肥不仅可缩短有机肥堆置时间还可以增加肥效。     

金荞麦提取物体外抗菌活性研究

金荞麦（Fagopyrum dibotrys）又名野荞麦、苦荞麦等,系双子叶植物纲蓼科（Polygonaceae）荞麦属（Fagopyrum）,在西北、东北、华北、西南一带的高寒地区分布广泛。据《本草纲目》记载,     

普乐健防治大脑杆菌病试验

普乐健的化学名称为氟苯尼考(Florrenicol)是国家级二类兽药，是一种新型的氯霉素类药物，它区别于氯霉素、甲砜霉素，并将引起再生障碍性贫血的NO2和耐药性的OH被CH3SO2，根和F原子所代替，其抗菌效果增加了许多倍，并对耐氯霉素和甲砜霉素的菌株均有活性作用，且其吸收快，体内分布广，易渗透到体内各组织中，有更高的生物利用率，经检测有效血药浓度达24小时以上。     

具有万古霉素高产能的东方拟无枝酸菌诱变株的选育研究

为提高万古霉素(Vancomycin)发酵生产水平,选育出其发酵生产的优良菌株,以东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis oriertalsis)菌株V1806作为原始菌株,利用EMS(甲基磺酸乙酯)、UV(紫外诱变)和ARTP(常压室温等离子体诱变)等单一诱变、复合诱变的方法,选育出1株遗传稳定性好、且对万古霉素耐受性强的菌株Vua-15,其中试发酵效价达到7863 mg/L,比原始菌株提高了74.3%。研究结果表明,复合诱变对东方拟无枝酸菌菌种选育的效果优于单一诱变,更易选育出符合预期的优良菌株。研究不仅对万古霉素工业化发酵生产具有重要意义,而且为其他产品发酵菌种的选育提供了一定借鉴。     

茄子新品种‘海丰长茄2 号’

 ‘海丰长茄2 号’茄子新品种是以‘11-15’?‘11-2’配制而成的一代杂种。植株生长势强, 半开张,平均始花节位7.0 节。果实平均纵径23.2 cm,横径4.6 cm,果皮紫黑色,有光泽,平均单果质 量231.5 g。货架期长,周年栽培产量达225 000 kg · hm-2 以上,适宜北京、河北、辽宁和山东地区保护地 栽培。     

猪增生性肠炎的诊治

广东省某规模化养猪场部分圈舍猪群发生腹泻、拉血便症状,病理解剖显示肠道组织肿大出血,死亡猪只粪便呈黑色煤焦油状。本文采集了病死猪只的粪便进行PCR检测和鉴定,结合发病症状,确定发病原因是由于胞内劳森菌引起的猪增生性肠炎。用药物泰妙菌素进行临床治疗,结合其他药物辅助治疗,猪群健康状况逐渐趋于稳定。