金定鸭不同组织和血液中TLR1、TLR2、TLR4、TLR5的表达差异分析

试验旨在研究不同Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）在鸭不同组织中的表达情况,选取300日龄雄性金定鸭10只,解剖后采集其血液及脾脏、肝脏、睾丸、肺脏、下丘脑、垂体、皮肤、腿肌、心脏、肾脏、胸肌、盲肠、小肠、胸腺,采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物,并用实时荧光定量PCR法检测TLR1、TLR2、TLR4、TLR5在不同组织中的相对表达情况。结果显示,各基因扩增产物的熔解曲线均有一特异性的单峰,无其他杂峰,说明引物的特异性较强,可以准确定量。4种目的基因与内参基因的扩增效率在101.4%~105.0%之间,均接近100%,相关系数（R²）为0.98~1.000。TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 4种TLRs在金定鸭不同组织和血液中均有表达,但每种TLR受体在各组织中表达水平略有差异,其中TLR1在下丘脑中表达量最低,在胸肌中最高;TLR2在小肠中的表达量最低,在肺脏中最高;TLR4、TLR5在睾丸中的表达量最低,在皮肤中最高。以上结果说明,鸭TLRs在多种组织中能够广泛表达,本试验结果可为TLRs在鸭源感染过程中的作用机理研究提供科学依据。     

基于Red同源重组和高效自杀性载体系统构建肠炎沙门氏菌突变株方法的比较

Red同源重组系统和高效自杀性载体系统都能对革兰氏阴性茵染色体直接进行修饰,本试验利用上述2种系统敲除不同来源肠炎沙门氏茵菌株SEF14茵毛操纵子亚单位sefD或sefA基因,并对构建肠炎沙门氏茵突变株方法进行比较.本研究成功构建了国际、国内标准株,鸡源和人源国内分离株sefD和sefA缺失株各4株.Red同源重组系统中能将PCR产物一步法直接转化肠炎沙门氏茵,通过同源重组序列发生同源重组交换.但对PCR产物和感受态细胞的质量要求很高,一次重组效率很低,而二次重组过程则相对简单、高效.自杀性载体系统若将构建好的合同源DNA片段的重组质粒转化宿主茵,其一次重组效率高,二次重组也只需蔗糖筛选传代丢失抗性质粒.Red同源重组系统将在染色体中残留FRT位点;而自杀性栽体系统在染色体中可不留任何痕迹.所以2个系统都能对不同源肠炎沙门氏茵染色体进行直接修饰,而且易删除抗性选择标志,与传统的高效自杀性载体系统比较,Red同源重组系统更方便快捷,省时省力.     

鹅对11种非常规饲料代谢能和纤维利用率的研究

本研究旨在探索鹅对不同非常规饲料的利用率。试验以30只成年太湖鹅公鹅为研究对象,随机分为5组,每组6个重复,每个重复1只鹅,其中1组为内源排泄物对照组。空腹24h后,每组强饲1种饲料,各组内每只鹅强饲量相同,内源排泄物对照组不强饲。采用平板收粪法收集24h排泄物。2次试验间恢复期12d。测定生产中常见的11种非常规饲料代谢能(ME)和中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、半纤维素(HC)利用率。结果表明:鹅对啤酒糟、白酒糟、瘪稻、黑麦草粉、稻壳、玉米秸、稻草、麦秸、麦糠、平菇菌糠、花生藤的真代谢能(TME)分别为9.29、8.67、8.97、5.89、3.85、3.10、3.32、3.02、5.29、2.48、3.15M J/kg。用TME法测得的11种非常规饲料的NDF利用率为6.14%~45.01%,ADF利用率为4.52%~32.57%,HC利用率为18.45%~61.59%。TME最佳一元预测方程为TM E=12.205-0.232CF(R2=0.817)。研究结果显示鹅对非常规饲料有较高的利用率,能量利用率和粗纤维(CF)的含量呈极显著的负相关。试验所测ME值可为非常规饲料合理利用,准确计算与调整鹅饲料配方提供参考依据。     

日粮添加益生菌对肉鸡免疫功能及其生长性能的影响研究

为了解益生菌在肉鸡饲养中的应用效果,探究其对肉鸡免疫功能与生长性能的影响。试验选择体重和健康状况相近的肉鸡540只(均为雄性),随机分成3组,每组有6个重复、各重复有30只鸡,分组情况:处理1仅饲喂基础日粮,处理2在基础日粮中添加0.5%乳双歧杆菌,处理3在基础日粮中添加0.5%嗜酸乳杆菌,试验持续42d。试验结果表明:肉鸡在1~21日龄、22~42日龄时,处理2、处理3平均日增重显著高于处理1(P<0.01),同时料重比显著低于处理1(P<0.01);对于平均日采食量,1~21日龄各组之间差异不显著,但在22~42日龄时,处理2、处理3平均日采食量显著高于处理1(P<0.01)。在免疫器官指数上,处理2、处理3胸腺指数、脾脏指数以及法氏囊指数均显著高于处理1(P<0.01),在血清免疫球蛋白上,处理2、处理3肉鸡血清IgM显著高于处理1(P<0.05),且处理2肉鸡血清IgM显著高于处理3(P<0.05),但IgG和IgA各组之间差异不显著(P>0.05)。因此,日粮中添加益生菌能够显著提高肉鸡免疫功能与生长性能,且与嗜酸乳杆菌相比,使用乳双歧杆菌的效果较好。     

鸭昼夜节律相关基因RORB与蛋重的相关性分析

为探讨鸭昼夜节律相关基因RORB(视黄醇相关孤儿受体B)与鸭蛋重性状的相关性,采用Illumina测序的方法对90只金定鸭RORB基因序列进行测序,以分析RORB基因上3个SNP位点在不同蛋重鸭个体的差异,并与300日龄和450日龄蛋重进行相关性分析;荧光定量PCR的方法检测RORB及相关基因CLOCK、BMAL1和PER2 mRNA在不同蛋重鸭卵巢组中的表达差异。结果表明,RORB基因上Z-35251072和Z-35256947位点的SNP突变与鸭450日龄的蛋重呈显著负相关,Z-35278196位点的SNP突变与鸭300日龄和450日龄蛋重呈显著负相关;RORB和PER2在低蛋重组中的表达显著高于在中蛋重和高蛋重组的表达(P<0.05),而CLOCK和BMAL1在高蛋重组中的表达显著高于中蛋重和低蛋重组的表达(P<0.05)。结果提示,RORB在鸭的蛋重性能中可能发挥重要作用,且可能与昼夜节律相关基因间的相互调节有关,该结果为研究鸭的蛋重性能调控奠定理论基础。     

高邮鸭和金定鸭发育早期骨骼肌MyoG和Myf6基因的表达分析

【目的】研究生肌调节因子肌细胞生成素(MyoG)和生肌决定因子(Myf 6)基因表达对鸭胚胎期及初生早期骨骼肌发育的影响。【方法】采用Real-time PCR方法研究MyoG、Myf6基因在不同鸭品种(高邮鸭和金定鸭)胚胎期(13,17,21,25,27胚龄)及初生早期(出雏后7日龄)骨骼肌发育中的表达差异,并分析其表达变化与胸、腿肌发育的相关性。【结果】MyoG和Myf6基因在2个品种鸭胸肌、腿肌组织发育早期均有表达,但不同组织存在不同的表达模式。MyoG在鸭胚胸肌、腿肌组织中均呈现"前高后低"的表达模式,21胚龄以前表达量相对较高,随后表达量下降,并维持相对较低水平;而Myf6基因在胸肌组织中在21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,但仍维持相对较高的表达水平;在腿肌组织中在13胚龄时表达量较高,在17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)以及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。二元变量相关性分析结果表明,2个品种鸭胸肌、腿肌MyoG mRNA表达与胸肌、腿肌发育呈强负相关;胸肌中Myf6mRNA的表达与胸肌发育无显著相关性,腿肌中Myf6mRNA的表达与腿肌发育呈强负相关。【结论】骨骼肌中MyoG和Myf6基因表达具有显著的时空性,性别差异不显著,骨骼肌中MyoG和Myf6基因表达与鸭发育早期骨骼肌质量变化呈现负的线性相关。     

鸭蛋质量相关遗传变异及功能基因筛选与鉴定

本研究根据金定鸭个体蛋质量情况,选择2种极端表型,分为高蛋质量组(WH)和低蛋质量组(WL)。基于混池全基因组重测序和选择清除分析技术筛选组间差异显著基因组区域内的单核苷酸多态性(SNP)位点及相关功能基因,并通过单个样本重测序对筛选的蛋质量相关SNP进行验证,分析各SNP位点不同基因型之间的蛋质量大小差异。研究发现,在低蛋质量组和高蛋质量组获得的高质量reads数量分别为194 115 424和228 089 084,共定位到SNP差异显著区间178个,共富集到受选择候选基因40个,而且这些区间和基因均位于Z号染色体。鉴定出候选基因ARSB上Z-22908831、Z-22966695突变位点显著影响300 d、450 d蛋质量,RORB上Z-35251072、Z-35256947突变位点显著影响450 d蛋质量,RORB上Z-35278196突变位点显著影响300 d、450 d蛋质量,RASEF上Z-39588570突变位点显著影响450 d蛋质量。本研究结果为通过分子育种技术提高蛋鸭产蛋性能选育提供了依据,加快了选育进程。     

扣蟹培育技术要点

正大规格优质扣蟹是高产高效养殖河蟹的重要基础。扣蟹培育应选择水质良好、水源充足、注排水方便、不漏水不渗水、淤泥少的池塘,面积1~5亩,水深不超过1.2米。在放蟹苗前15~20天每亩用75~100千克生石灰泼洒消毒,待药性消失后,用80目的滤网进水,培育基础饵料,移植经过严格消毒的水草,并设立必要的防逃设施。一、栽种水生植物在扣蟹培育池水边四周以及深沟种植水蕹菜。水蕹菜4月中、下旬在陆上利用种子在育苗田块内散播,待苗     

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛研究进展

1 SEF14菌毛的发现 Feutrier等1986年首次在临床分离的一株人源肠炎沙门氏菌中发现一种菌毛(后来被称为SEF14菌毛),具有甘露糖敏感血凝反应(MSHA),形态上与肠杆菌科细菌的Ⅰ型菌毛难以分辨,蛋白质亚单位为14.4 kD,比伤寒沙门氏菌Ⅰ型菌毛亚单位(22.1 kD)小,N-末端18个氨基酸残基与大肠杆菌和伤寒沙门氏菌Ⅰ型菌毛同源[1].Müller等在同一株人源肠炎沙门氏菌分离株上鉴定了甘露糖敏感且形态和生化特性上不同于之前报道的SEF14的典型Ⅰ型菌毛[2].1990年Tahorns等通过单克隆抗体(MAb)介导方法在肠炎沙门氏菌表面鉴定出这一菌毛样结构,蛋白质亚单位为14.3 kD,直径小于5 nm,没有凝集红细胞能力[3].     

肠炎沙门氏菌SEFA基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立

为了给临床检测肠炎沙门氏菌的感染和血清学调查提供一种切实可行的方法,本研究根据肠炎沙门氏菌SEF14菌毛操纵子亚单位sefA基因序列设计一对引物,利用PCR技术从国内标准株CMCC(B)50336中扩增sefA基因,并按预定的阅读框插入表达载体pET22b+中,获得重组质粒pET-sefA,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列大小为498bp,与已发表的sefA结构编码序列完全一致。重组质粒pETsefA转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并能获得高效诱导表达,通过对菌体裂解上清液SDS-PAGE和western blot分析鉴定,该重组菌可以表达大小为15.2ku的可溶性重组蛋白rSEFA。纯化的rSEFA免疫小鼠所得高免血清以及标准株CMCC(B)50336感染小鼠后所获阳性血清,均能识别标准株肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白以及纯化的重组蛋白rSEFA,结果表明明体外表达的rSEFA蛋白有较好的免疫原性和反应原性。而基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,对肠炎沙门氏菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。