新鱼腥草素钠对雏鸡免疫应答的影响

试验Ⅰ：将180羽11日龄非免疫健康三黄鸡随机分为5组。第Ⅰ～Ⅲ组分别注射高、中、低剂量（4、2、1mg·kg^-1）的新鱼腥草素钠（sodium new houtluyfonate，SNH）注射液；Ⅳ组和Ⅴ组分别为白细胞介素2（IL-2）和生理盐水对照。所有动物于14日龄以新城疫病毒（NDV）LaSota株弱毒活疫苗滴鼻进行第1次免疫，2周后加强免疫1次。于第1次免疫后的7、14、21、28、35和42d测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体水平以及外周血CD4＋／CD8＋淋巴细胞比值。结果表明，SNH能显著提高鸡体抗NDV抗体水平和外周血CD4＋／CD8＋淋巴细胞比值（P〈0．05），并以中等剂量（2mg·kg^-1）效果最为明显。试验Ⅱ：将72羽7日龄非免疫健康三黄鸡随机分成3组，第1组口服氟苯尼考（Florfenicol，1．2g·kg^-1）并配合肌肉注射SNH（2mg·kg^-1）；同时设氟苯尼考（Ⅱ组）和生理盐水（Ⅲ组）对照。各组于14日龄以NDV LaSota株弱毒活疫苗进行第1次免疫，2周后进行第2次免疫；于首免后7、14、21和28d测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体水平。结果表明，中剂量的SNH对氟苯尼考引起的雏鸡免疫抑制具有一定的拮抗作用。结论：SNH注射液对雏鸡体液免疫和细胞免疫具有明显的增强功能，并能拮抗某些药物引致的免疫抑制作用。     

猪尿和猪肝中克伦特罗ELISA方法的建立及初步应用

以自制的单克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA条件,建立标准曲线y=- 24.778.306x+53.744,r2=0.993 4,线性范围为0.1 ～27 μg/L,IC50为1.8 μg/L(n=25),最低检测限(LOD)为0.1μg/L.尿液经叔丁基甲醚提取,回收率为68.24％～100.73％;肝脏用盐酸水解,加KH2PO4缓冲液(pH值3.0)提取,过C18柱净化,回收率为80.45％～98.45％;变异系数均小于20％,尿液和肝脏中的LOD为0.3μg/L、0.3 μg/kg.用该方法检测喂药动物尿液和肝脏中的克伦特罗残留,特异性良好,适用于猪尿和肝脏中克伦特罗残留筛选.     

嗜水气单胞菌Aer毒素和胞外蛋白酶卵黄抗体的制备

为克服嗜水气单胞菌不同血清型对卵黄抗体免疫保护效果的影响,从嗜水气单胞菌中提取其主要致病因子Aer毒素和胞外蛋白酶(ECPase),验证其生物学活性,分别免疫蛋鸡。用辛酸-硫酸铵法粗提卵黄抗体,用间接ELISA法测其效价、鉴定抗体与不同来源嗜水气单胞菌主要致病因子的交叉反应。结果表明,抗Aer毒素和抗ECPase卵黄抗体效价最高分别可达1∶213和1∶212,与其他来源嗜水气单胞菌交叉反应性强。     

CpG-ODN增强表达犬瘟热病毒H蛋白重组质粒免疫效果的分析

为提高犬瘟热病毒（caninedistempervirus,CDV）重组质粒的免疫应答水平,合成4条CpG-寡脱氧核苷酸（CpG—oligodeoxynueleotides,CpG-ODN）;通过体外淋巴细胞增殖试验确定1条刺激活性最显著的CpG-ODN,序列为5＇-TCGTcGTTTTGTCGTTTTGTcGTT-3’。将30只缝康毕格犬随机均分为2大组,每大组再分为5小组,分别以不同的剂量肌肉注射CDV附着蛋白（H）重组质粒pcDNA—H和选定的CpG-ODN。在免疫后的第2、4、6周分别测定各组动物的抗CDV中和抗体和γ-干扰素水平。结果表明选定的CpG-ODN对提高抗CDV中和抗体效价和干扰素水平具有一定作用,且与对照组差异显著（P〈0．05）;但不同剂量的质粒pcDNA—H和CpG-ODN的效果不同,其中以30μg／只的CpG-ODN和50ug／只的pcDNA—H的剂量组合效果最佳。以选定剂量的CpG-ODN和pcDNA—H免疫5只健康毕格犬,同时以质粒pcDNA—H与生理盐水作为对照;4周后所有动物均接种CDV组织匀浆毒。结果发现试验组动物均未出现犬瘟热临床症状,且攻毒后第3周CDV检测为阴性,而peDNA—H对照组和生理盐水对照组动物的CDV检测阳性率为2／5和5／5;这表明CpG能够明显促进重组质粒pcDNA—H的免疫保护作用。     

鸭瘟病毒UL6基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为制备鼠抗鸭瘟病毒(DPV)UL6基因的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出UL6基因,连接原核表达载体p ET-32a(+),构建表达质粒p ET-UL6,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃经1.0 mmol/L的IPTG诱导4 h,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达情况,将目的蛋白免疫Balb/c小鼠,利用ELISA方法检测特异性抗体效价。结果显示,构建的原核表达质粒经IPTG诱导能正确表达,且表达的重组蛋白能与DPV阳性血清反应,制备的多克隆抗体效价可达1∶16 000。表明,制备的多克隆抗体具有良好的免疫原性,可以用于UL6基因的表达检测。     

纳米氧化锌绿色合成及其体外抗PRRSV效果

本研究评估了水花生植物提取物绿色合成纳米氧化锌的可行性并评价了其对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的体外抗病毒效果。采用紫外-可见光谱、扫描电镜观察以及能谱扫描仪分析等多种方法交互验证纳米氧化锌颗粒的形成,并采用MTT比色法在预防、阻断、直接灭活三种药物作用方式下对其体外抗PRRSV的活性进行评估。结果表明纳米氧化锌颗粒在反应液中呈胶体状态,最大吸收峰在波长260 nm处;晶体颗粒呈六棱柱形,其粒径为34.8～314.2 nm,平均尺寸为43.8 nm。纳米氧化锌药物细胞安全质量浓度为0.125 mg/mL。纳米氧化锌针对PRRSV在预防、阻断以及直接杀灭三种作用方式下对细胞的最高平均保护率分别为35.1%、63.7%、73.9%。结果提示,纳米氧化锌在开发作为抗PRRSV的消毒剂以及阻断剂方面很有应用前景。该研究说明利用水花生植物提取液可以合成纳米氧化锌颗粒,而且显示了良好的体外抗病毒效果,这也为今后新兽药研发以及入侵植物资源化利用提供了借鉴。     

N-氨甲酰谷氨酸和精氨酸对京海黄鸡肉仔鸡生长性能和血液指标的影响

本试验旨在探讨N-氨甲酰谷氨酸(N-carbamylglutamate,NCG)和精氨酸(Arg)对京海黄鸡肉仔鸡生长性能、血清生化参数及游离氨基酸含量的影响。选用1日龄体重相近的京海黄鸡肉仔鸡600只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复20只。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲喂在基础日粮中分别添加0.05%、0.10%、0.15% NCG及0.10% Arg的试验日粮。试验期28 d。结果表明,与对照组相比,添加0.05%、0.10%、0.15% NCG及0.10% Arg组平均日增重(ADG)升高,添加0.10% NCG组料重比(F/G)显著降低(P<0.05);添加0.10% NCG组血清中血氨(AMM)、尿酸(UA)和低密度脂蛋白(LDL)含量相对于其他各组显著降低(P<0.05),添加0.15% NCG组血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)和碱性磷酸酶(ALP)含量显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,添加0.10%、0.15% NCG组和添加0.10% Arg组血清中Arg含量显著升高(P<0.05)。综上所述,日粮中添加NCG有助于提高京海黄鸡肉仔鸡血清中Arg和脯氨酸(Pro)的含量,改善血液指标,提高肉仔鸡的生长性能,其中NCG添加水平为0.10%时效果较好。     

鸭源新城疫病毒F基因在昆虫细胞中的表达和鉴定

为在昆虫细胞中表达鸭源新城疫病毒(NDV) F蛋白,本试验首先根据鸭源NDV F基因序列设计引物,PCR扩增出F基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转座载体pFastBac-F,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-F,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-F。Western blotting、间接免疫荧光试验结果均显示表达的重组蛋白能与鸭抗NDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。结果表明鸭源NDV F蛋白在昆虫细胞中获得了成功表达,为鸭新城疫的预防控制奠定了基础。     

鸽副黏病毒经鸡胚传代引起毒力和F基因序列变化的研究

为研究鸽副黏病毒ND167在SPF鸡胚传代中毒力和F基因序列变化,运用有限稀释法将ND167连续传代扩繁,每代次均选择病毒稀释度最高且血凝价最高的尿囊液进行传代,共传10代次,测定第1、5和10代次的最小致死量致死鸡胚的平均时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和F基因序列。结果表明,ND167在鸡胚传代过程中F蛋白裂解位点氨基酸虽未突变,但是毒力却在逐渐增强,从中等毒力株演变为强毒力株。说明对于PPMV毒力判定需要根据动物实验进行,需警惕PPMV在鸡群中反复传代引起毒力增强。     

1型鸭甲型肝炎病毒3D基因的原核表达与多抗制备

根据血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)SH株3D基因序列设计并合成1对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增3D基因,将其克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导培养下重组蛋白获得了成功表达。SDS-PAGE显示重组蛋白的分子量约为68 k D,Western blot分析显示该重组蛋白能与多聚组氨酸标签单抗发生特异性反应。将切胶后纯化的目的蛋白免疫ICR小鼠,制备针对重组蛋白的多抗血清,Western blot结果显示制备的抗血清能够与DHAV-1感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,3D基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的多抗血清可以用于3D蛋白的检测,为3D蛋白的功能研究奠定了基础。