草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/O细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5.抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为K链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应.选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000;IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子.本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础.     

剑尾鱼脑细胞系的建立及细胞色素P4501A的诱导表达

为了构建剑尾鱼脑细胞系并探讨其细胞色素P4501 a(CYP1A)基因的诱导效应,实验通过胰蛋白酶消化法对剑尾鱼脑组织进行体外培养,经连续继代培养,建立了可稳定传代的脑细胞系,命名为SFB.SFB最适培养液为含有15％胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12和L-15等比混合培养液,培养条件为27℃,5％ CO2.生长特性研究表明,第65代细胞的群体倍增时间为43.048h,显示出旺盛的生长和分裂能力.染色体分析发现,培养细胞的染色体众数为48条,SFB核型公式为2n =2st +46t,臂指数(NF) =48,与剑尾鱼一致.诱导实验表明,SFB在10-8～ 10-5 mol/L的苯并(a)芘诱导下,CYP1A mRNA表达量显著提升,且表现出良好的剂量效应关系.脑细胞系的建立为剑尾鱼的毒理学评价研究提供了便利,也为其系统的生态毒理学应用打下基础.     

草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10编码蛋白多克隆抗体制备及其特性分析

为研究草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S10基因节段编码蛋白的可能功能,采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10基因节段,并把该基因节段克隆至表达载体pET-32a(+),获得的重组表达载体pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE分析鉴定后,再通过变性、过Ni柱纯化、透析复性纯化获得目的蛋白。然后用纯化的重组蛋白免疫昆明小白鼠,制得多克隆抗体,用间接ELISA方法测定抗体效价,用Western blot和IFA(间接免疫荧光试验)鉴定抗体特异性。结果表明,SDS-PAGE分析表达的重组蛋白约为53 ku,大小与预期相符,目的蛋白主要存在于包涵体中;过Ni柱纯化、透析复性纯化后的重组蛋白纯度可达97.4%;间接ELISA测得制备的多克隆抗体效价约为1∶106,Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能识别HZ08毒株,表明S10编码蛋白为GCRV-HZ08株的结构蛋白。     

免疫学和分子生物学技术在水产动物疾病诊断中的应用

目前,各种免疫学和分子生物学技术的发展和在水产养殖病原微生物检测和诊断中的广泛应用,对水产养殖病害的有效防控起到了巨大的促进作用。论文回顾了主要免疫学技术(单克隆抗体、酶免疫、凝集反应、荧光抗体、胶体金)和分子生物学技术(核酸杂交、基于PCR的分子生物学检测技术、限制性内切酶分析、16 S rRNA、基因芯片)的特点以及其在水产动物疾病诊断中的研究及应用情况,并分析了今后水产动物疾病诊断技术的发展方向。     

美洲大蠊水提物对吉富罗非鱼生长性能、血清和肝脏生化指标的影响北大核心

试验旨在探究美洲大蠊水提取物对吉富罗非鱼生长性能、血清和肝脏生化指标的影响。选取平均体重为(22.18±0.03) g吉富罗非鱼450尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别在基础饵料中添加0 (对照组)、0.10%(Ⅰ组)、0.15%(Ⅱ组)、0.20%(Ⅲ组)、0.25%(Ⅳ组)的美洲大蠊水提物。试验期45 d。结果显示,各试验组鱼的内脏指数均显著低于对照组(P<0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组罗非鱼血清总胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)。各试验组罗非鱼肝脏甘油三酯含量显著低于对照组(P<0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组罗非鱼血清过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力显著高于对照组(P<0.05)。各试验组罗非鱼肝脏过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,吉富罗非鱼饵料中添加0.15%美洲大蠊水提物较为适宜。