抑制素基因免疫的免疫反应性

通过应用抑制素真核表达质粒pcINH和抑制素融合表达质粒pCIS分别经肌肉注射免疫大鼠的2个系列试验，检测了免疫鼠抑制素抗体水平及抗体阳性鼠的比例。结果，抑制素质粒pcINH经脂质体介导免疫大鼠，50％（13／26）的个体产生了抑制素阳性抗体。40μg组产生的抗体水平最高；抑制素融合表达质粒pCIS免疫经盐酸普鲁卡因处理的大鼠，2次免疫获得了38.9％（23／54）的抗体阳性率。3次免疫获得55．6％（20／36）的抗体阳性率，100μg组产生的抗体水平最高；加强免疫可提高抗体的水平。但免疫剂量的增加并不一定能增加抗体阳性鼠的比例。     

豚鼠发情周期不同时期的子宫LHR mRNA差异表达研究

 【目的】克隆豚鼠子宫黄体生成素受体(LHR)基因片段并分析其进化关系,研究豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期不同时期的表达特性。【方法】以豚鼠子宫总RNA为模板,根据小鼠、大鼠、猪LHR保守区设计引物,RT-PCR扩增LHR基因片段。筛选阳性克隆测序,采用DNAMAN软件分析比对同源性。以?-actin为分子内参,采用优化的半定量RT-PCR技术,测定豚鼠发情周期不同时期的子宫组织LHR mRNA表达量。【结果】测序得到686 bp的剪接变异体1和缺失75 bp 4号外显子的剪接变异体2。686 bp序列与人类LHR mRNA序列同源性为83.8%,与牛、猪及绵羊LHR mRNA序列同源性分别为84.6%、84.2%及83.6%,而与大鼠和小鼠LHR mRNA序列同源性则分别高达93.7%和99.4%。LHR mRNA在豚鼠整个发情周期的子宫中都有表达,发情周期第0天的表达水平为0.635 ± 0.0194,第4天为0.617 ± 0.099,均显著低于第8天的表达水平(P＜0.05),随之在第12天升至1.218 ± 0.049。【结论】克隆的片段为豚鼠LHR基因的部分序列,其mRNA存在着剪接变异体。豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期第0、4天表达水平较低,第12天升至最高,即发情周期不同时期的LHR mRNA表达呈现明显的规律性,该结果为探究哺乳动物非性腺组织中LHR的功能及生殖内分泌调控机制提供了理论依据。     

猪肺泡巨噬细胞的分离、纯化和冷冻保存研究

通过冷PBS气管灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),优化了PAM的纯化和冷冻保存方法,并进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测.结果表明:RPMI-1640培养液比DMEM培养液更适于PAM的培养和冷冻保存;巨噬细胞抗体MAC387免疫荧光检测表明,贴壁2h后更换培养液获得的PAM纯度最高(P＜0.05);用70％ RPMI-1640+20％新生牛血清+10％ DMSO的体系冷冻保存细胞密度为1×107个/mL的PAM可获得高达98.09％的存活率,冻存前后PAM的墨汁吞噬率无显著差异(P＞0.05).     

湖羊NR5A1基因全序列克隆和表达特征分析

以江苏特色绵羊品种——湖羊为研究对象,克隆湖羊NR5A1基因全序列,分析其序列特征,并对湖羊组织和大、小卵泡中NR5A1表达特征进行研究。结果表明,湖羊NR5A1基因全长19 016 bp,含6个外显子和5个内含子;编码区全长1 386 bp,编码461个氨基酸残基,包含经典的DNA结合区(DBD)和配体结合区(LBD)。RT-PCR结果显示NR5A1基因在湖羊组织中广泛表达,其中在卵巢中高表达,脾脏次之; qRT-PCR和Western blot结果显示在湖羊大卵泡中NR5A1 mRNA和蛋白质水平均显著高于小卵泡,表明NR5A1基因参与调控湖羊卵泡发育,并与繁殖性能有关。     

湖羊羔羊早期断乳（7日龄）后代乳粉饲喂效果研究

选择早期断乳(7日龄)湖羊双羔,随机分成试验组A和B,分别饲喂高蛋白、高脂肪含量的代乳粉A和高蛋白、中等脂肪含量的代乳粉B。通过38 d羔羊代乳粉集中饲喂试验,结果显示,试验组A羔羊1~45 d平均日增重与对照组A1间差异不显著(P0.05),其中,30~40日龄日增重显著(P0.05)高于对照组A1;试验组B羔羊1~45 d平均日增重显著低于对照组B1(P0.05);在体尺指标中,两个组别的试验组羔羊体高与对照组间无显著差异(P0.05),体长、胸围和管围在20日龄时,试验组B羔羊显著低于对照组B1(P0.05),30日龄时,试验组A和B羔羊胸围分别显著(P0.05)低于对照组A1和B1;试验组A羔羊体尺生长速度快于试验组B,但生长速度回升转折点落后于试验组B。表明早期断乳(7日龄)湖羊羔羊选用高脂肪含量的代乳粉A的饲喂效果好于中等脂肪含量的代乳粉B。     

生长抑素DNA疫苗介绍

DNA疫苗被称为“第三代”疫苗,是20世纪90年代发展起来的免疫学新技术产品,使用免疫效果维持时间长,疫苗稳定性好,易保存。华中农业大学杨利国教授课题组研制的多种生长抑素DNA疫苗(包括单拷贝生长抑素DNA疫苗、双拷贝生长抑素DNA疫苗、以沙门氏杆菌为传递载体的生长抑素DNA疫苗),     

基于微卫星标记的湖羊资源保护效果的评价

为了比较江苏省湖羊资源保护区和苏州市种羊场2个湖羊保种群体的保种效果,了解湖羊遗传多样性的现状,为探索科学有效的保种方法提供理论依据,采用微卫星DNA标记技术,从全基因组水平对保护区和种羊场2个群体进行了遗传多样性和遗传分化分析。结果显示:2个湖羊群体的遗传多样性丰富,保护区稍高于种羊场,多态信息含量(PIC)分别为0.821和0.798,期望杂合度(He)分别为0.849 6和0.836 9;两群体间存在着较大的基因交流基因流[基因流(Nm)=16.793 0],群体间遗传分化水平低[群体分化系数(Fst)=0.014 7],保护区的近交程度[近交系数(Fis)=0.451 0]稍高于种羊场(Fis=0.394 5)。2个群体均较好地维持了湖羊丰富的遗传多样性,保种效果差异不大,但应尽量避免近交。     

热应激通过钙信号调控湖羊卵巢颗粒细胞凋亡和雌激素合成

热应激严重影响动物的繁殖性能,但热应激是如何通过调控绵羊卵巢颗粒细胞功能进而调控绵羊繁殖的相关研究较少。本研究以湖羊卵巢颗粒细胞为研究对象,利用Real-time PCR、流式细胞技术、Western blot、ELISA等方法探讨热应激对湖羊卵巢颗粒细胞钙信号通路、细胞凋亡和雌激素合成的影响。结果表明,热应激后,湖羊卵巢颗粒细胞中钙离子浓度显著上升(P<0.05),钙离子信号通路中相关基因CACNA1B、CACNA1C、RYR1、CAMK2表达量显著升高,线粒体分裂蛋白FIS1表达量显著上升,促凋亡蛋白家族代表基因BAX和抗凋亡蛋白代表基因BCL2 mRNA表达量比值(BAX/BCL2)显著上升,细胞凋亡率增加;雌二醇合成关键酶CYP19A1表达量显著下调,雌二醇含量显著下降(P<0.05)。热应激卵巢颗粒细胞中加入钙离子螯合剂(BAPTA-AM)明显降低钙离子浓度,同时减少细胞凋亡,缓解热应激造成的卵巢颗粒细胞雌二醇含量下调。综上表明,热应激打开了湖羊卵巢颗粒细胞膜电压门控钙离子通道和内质网膜上钙离子释放通道,导致细胞质中钙离子浓度上升,促进卵巢颗粒细胞凋亡,引起雌二醇...     

补饲胆固醇对高温环境下湖羊母羊繁殖性能和血清生化指标的影响

【目的】研究饲粮中添加胆固醇对中国南方夏季湖羊发情率、受胎率和血清生化指标的影响。【方法】选择108只体重相近(33.60 kg±1.86 kg)的健康湖羊母羊，其中30只湖羊在非高温季节(4月份，平均最高温度20.9℃±3.2℃)饲粮添加不同剂量胆固醇(0.1%和0.5%),ELISA方法检测血清中胆固醇含量的动态变化，筛选合适的胆固醇添加量；另外78只湖羊随机分成2组(对照组和试验组),试验期63 d(从同期发情处理第1天到自然发情后配种的第30天),在夏季高温季节(7-9月份，平均最高温度31.3℃±2.6℃),对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂添加0.1%胆固醇的基础饲粮，ELISA方法检测血清中雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)水平，研究饲粮添加胆固醇对湖羊发情率、受胎率和血清生化指标的影响。【结果】非高温季节湖羊基础饲粮中分别添加0.1%和0.5%胆固醇，48 h后两组湖羊血清中胆固醇含量趋于一致，据此选择0.1%作为高温季节补饲胆固醇的添加剂量。夏季高温季节在补饲0.1%胆固醇的第3、30和63天均能显著提高湖羊血清中胆固醇含量(P<...