结球甘蓝CML家族基因及其在授粉后柱头中的表达

利用NCBI和甘蓝基因组数据库筛选获得了76个结球甘蓝CML家族基因,其随机分布在甘蓝的9条染色体上,染色体上最多的有12个基因,最少有1个基因。分析发现该基因家族编码蛋白氨基酸残基长度在109 ~ 365个之间,分子量大多在20 kD左右,为小分子蛋白,且均含有2 ~ 4个保守的EF-hand结构域。甘蓝的76个CML基因依据与拟南芥的CML家族的进化关系及序列相似性分为Ⅰ~ Ⅷ个亚家族,每个亚家族基因有较高的同源性,进化关系较近。经亚细胞预测分析发现大部分蛋白在质膜和胞外表达,少量在质膜、细胞核内和叶绿体等部位表达。数字表达谱分析发现在76个基因中,有25个基因在自花和异花授粉后差异表达,其中BoCML12、BoCML42、BoCML44、BoCML45、BoCML60、BoCML70、BoCML71 和BoCML74等8个基因在自花和异花授粉后表达趋势有较大差异,表明这8个基因以不同的方式参与调控甘蓝自花和异花授粉后的反应过程,有可能与甘蓝的自交不亲和性相关。     

一株犬种布鲁氏菌的鉴定及毒力测定

对分离到的一株疑似犬种布鲁氏菌进行生物特性和基因型鉴定,并用宿主实验动物(比格犬)测定了最小感染量和脾含菌量。通过形态与染色特性、培养特性、血清学特性、生化特性鉴定,及Multi-PCR、16S rRNA测序,表明该分离株为犬种布鲁氏菌,其对比格犬的最小感染剂量为10₅?CFU/ mL,对应的脾含菌量为4×10₅-3×10₆?CFU/g。     

小南川水库弧形工作钢闸门安全检测与评估

水工钢闸门安全检测是判断水库钢闸门运行安全度的重要手段,对于运行几十年的钢闸门更应进行安全检测。以小南川水库为例,对其进行外观、门体材料及尺寸、腐蚀、焊缝、应力与启闭机性能检测。运用有限元软件ANSYS对弧形工作钢闸门的受力状态进行模拟计算,并对校核洪水位下弧形工作钢闸门进行应力分析。根据结构应变实测结果与模拟计算结果,对弧形工作钢闸门的安全状况进行分析,提出检测结论和维修方案建议,为类似工程提供参考。     

GFP 标记杧果露水斑病病原菌及其侵染部位的确定

由枝状枝孢霉（Cladosporium cladosporioides）侵染引起的杧果露水斑病是近年杧果上新发生的病害,主要为 害果实。明确该菌能否穿透果皮侵入果肉,可为防治该病害选择合适的药剂提供依据。本 研 究 将 绿色荧光蛋白基因 gfp 和潮霉素抗性基因 hygB 表达盒插入了经定点突变后 Cl. cladosporioides 的 ITS 序列中,成功构建了 pITGH 重组载 体,将其用 PEG 介导方法转化杧果露水斑病菌原生质体,获得了在菌丝、分生孢子、萌发的分生孢子中稳定发出绿色 荧光的 GFP 标记菌株,该标记菌株与野生菌的菌落形态、颜色及致病力无明显差异,生长速度明显慢于野生菌。用该 标记菌株观察侵染过程,发现杧果露水斑病菌可以在杧果果皮上侵染和扩展,但不能扩展至果肉中。该结果为选择农 药类型提供了依据,也为进一步研究该病菌在活体杧果上的生物学、预测病害和通过观察定殖情况确定杧果品种的抗 病性等奠定了良好的材料基础。     

BHV-1感染牛巨噬细胞对CD300a转录的影响

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用，分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株，并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法，检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组CD300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参，使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组CD300a基因各时间段的相对表达量，分析CD300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示，BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应，测得其病毒滴度为10^7.23 TCID₅₀/mL。本研究建立的CD300a基因荧光定量PCR检测方法，CD300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系，溶解曲线均为特异单峰，最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性，可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的CD300a基因表达量。经计算，攻毒组CD300a表达量均高于对照组，其中，6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h...     

番茄优良自交系部分品质性状杂种优势及配合力分析

按照Griffing Ⅳ不完全双列杂交设计，利用11个相关农艺性状优良亲本筛选出55个杂交组合。所有F₁代杂交组合及其亲本采用随机区组重复3次的方法，对番茄品质性状进行杂种优势研究与配合力分析，筛选出强优势与高配合力组合。结果表明，果形指数主要由加性效应组成，果肉厚度主要由显性效应组成，每个亲本不同性状的一般配合力(GCA)效应值均存在区别；硬度特殊配合力效应值最大组合为18P24×18696(70.23)，果形指数特殊配合力效应值最高组合为18920×18P24(0.88)，果肉厚度特殊配合力效应值最大杂交组合为18954×18943(1.05)；综合3种品质性状最优越组合有：18920×18P24、18P24×18696、18954×18943；番茄各性状遗传力依次为果肉厚>硬度>果形指数。     

不同烤烟品种在黔江烟区的适应性研究

以湘烟7号、渝金香1号、GZ36等6个烤烟品种为研究对象，从烤烟农艺性状、常规化学成分、致香成分含量、评吸质量以及经济效益等方面进行系统分析和评价，旨在明确生态环境与烤烟品种的互作效应，筛选出适宜黔江高海拔多雨生态烟区种植的烤烟品种。结果表明：在生长发育方面，GZ36的大田生育期最短，渝金香1号的大田生育期最长，2个品种之间相差4 d；在叶绿素含量变化上，GZ36的叶绿素含量含量较低，而湘烟7号和渝金香1号的叶绿素含量较高；在烟叶形状上，渝金香1号和LY1306的主脉较粗，而GZ36的主脉较细；在烤后烟叶化学成分上，湘烟7号与LY1306常规化学成分协调性最好，GZ36的致香成分含量最高，湘烟7号的致香成分含量最低，其余品种的致香成分含量差别不大；在烤后烟叶外观质量方面，GZ36表现最差，湘烟7号、渝金香1号和LY1306的烤后烟叶外观质量与云烟87整体一致；在经济性状方面，渝金香1号、湘烟7号、K326、LY1306的产质量均略优于对照品种云烟87。综合来看，GZ36和LY1306在外观质量、化学成分和产质量上各有优缺点，而湘烟7号、渝金香1号和K326的整体表现略优于当地对照品种云...     

兔多杀性巴氏杆菌和兔出血症病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

为建立兔多杀性巴氏杆菌(Pm)和兔出血症病毒(RHDV)的双重PCR检测方法，本研究根据Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域，设计2对特异性引物，经PCR分别扩增Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域，构建重组质粒p MD-Pm和p MD-RHDV，并经菌液PCR和测序鉴定后作为重组质粒标准品。经各反应条件优化后初步建立了检测Pm和RHDV的双重PCR方法。反应条件优化结果显示，该方法的最适退火温度为59℃，扩增kmt1和VP60基因的最优引物浓度均为0.5μL (10μmol/L)。对Pm和RHDV及其他病原包括兔源支气管败血波氏杆菌、产气荚膜梭菌等20种相关病原的特异性试验结果显示，除Pm和RHDV有特异性扩增条带外，其余相关病原均无扩增条带，特异性较强。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释并等体积混合后作为模板，经该双重PCR方法扩增。结果显示，该方法对p MD-Pm的检测限为17.9拷贝/μL，对p MD-RHDV的检测限为1 260拷贝/μL，敏感性较高；对两种病原的DNA和cDNA混合物的批内和批间重复性试验结果均一致，重复性较好。对100份临床...     

烤烟新品系HN2146在黔江烟区施氮量的研究

为探究烤烟新品系HN2146在黔江烟区种植的适宜施氮量，通过设置高施氮量(96.375 kg/hm²)、中施氮量(88.875 kg/hm²)和低施氮量(81.375 kg/hm²)3个施肥水平的处理，开展对烟株大田生育期、农艺性状及烤后烟叶的化学成分和产质量影响的试验。结果表明，在试验范围内，烤烟新品系HN2146的大田生育期，随施氮量的增加呈延长的趋势；在高施氮量处理下烤烟新品系HN2146的农艺性状，在叶长、叶宽以及最大叶面积等关键经济指标更具有优势；随着施氮量的增加，烤后烟叶的烟碱含量、中上等烟比例、产量和产值等均具有增加的趋势。从品质、产量及其所构成的性价比角度考虑，烤烟新品系HN2146在黔江烟区种植的适宜施氮量为96.375 kg/hm²。     

牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV)是国内近几年发现的引起犊牛腹泻的新病原，为了建立快速、准确且能定量分析BNeV的检测方法，本试验根据GenBank上发布的BNeV聚合酶基因(RdRp)序列设计合成了1对特异性引物和1条探针，并通过优化反应体系，成功建立了BNeV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法并对临床样品进行检测。结果表示，该方法最佳上下游引物浓度均为500 nmol/L,探针浓度为400 nmol/L,在1×10⁸～1×10¹拷贝/μL之间呈现良好的线性关系，线性相关系数R²=0.996,扩增效率为105.9%;该方法特异性较强，在多个犊牛腹泻相关病原中，只检测出BNeV;敏感性较高，对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×10¹拷贝/μL,而普通PCR对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×10³拷贝/μL;重复性较好，组内变异系数和组间变异系数均小于3%;对2021年3-5月采自内蒙古地区牧场的37份犊牛粪样中BNeV的检出率为35.1%,...