高速逆流色谱分离黄连生物碱及其抑菌活性初探

为了研究黄连生物碱的抑菌活性,采用高速逆流色谱(HSCCC)法分离黄连生物碱,K-B法检测其抑菌活性,测其对敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示：从黄连中分离出黄连碱、掌叶防己碱、小檗碱、表小檗碱,提取率分别为44.41%、36.72%、68.54%、18.33%;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为10.00、29.50、21.00和12.50 mm;对无乳链球菌分别为11.40、27.50、14.00和15.50 mm;对粪肠球菌、大肠杆菌O157等均无效;黄连碱、表小檗碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为136.36、272.73μg/mL;小檗碱对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为62.18、136.36μg/mL,对无乳链球菌的MIC和MBC分别为136.36、272.73μg/mL;掌叶防己碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为62.18、136.36μg/mL。结果表明：用HSCCC制备生物碱,省时、方便,4种生物碱对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌作用明显,对其余试验菌无效。     

红嘴鸥TLR7蛋白多克隆抗体制备及在DF-1细胞中的表达特征分析

【目的】制备红嘴鸥Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)蛋白多克隆抗体,分析红嘴鸥TLR7蛋白在DF-1细胞中的表达特征,为深入了解红嘴鸥TLR7蛋白功能及作用机制提供材料。【方法】设计引物扩增红嘴鸥TLR7基因CDS区,并构建其原核表达载体与真核表达载体。将重组原核表达质粒pET32a-TLR7转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞进行重组蛋白体外诱导表达,并对其诱导温度、诱导时间和IPTG浓度进行优化筛选。选用新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测血清抗体价效,利用Western blotting鉴定抗体特异性。将真核表达质粒pcDNA3.1-TLR7转染至DF-1细胞中过表达,利用间接免疫荧光技术检测红嘴鸥TLR7蛋白在转染DF-1细胞后不同时间点的表达特征。【结果】红嘴鸥TLR7基因CDS区长约1 182 bp,双酶切结果显示出2组大小不同的2条片段,分别为5 900、1 182 bp(原核表达载体)和5 428和1 182 bp(真核表达载体),测序后表明原核表达载体与真核表达载体构建成功。体外诱导温度为30℃、IPT...     

茶文化理念下近现代西方哲学中道德观的透视

经济社会快速发展背景下,人们信息沟通、交流更加方便、密切,特别是在互联网快速发展背景下,令全球之间的信息传播速度加快.我国在改革开放以后,吸引了大量的资本涌入国内,同时,许多外来文化、思想渗透到社会发展中,并对不同阶段的人们产生一定影响.各国之间经济、政治文化交流逐渐密切,且不同国家文化观念也在不断融合,实现文化的交流...     

金鱼人工雌核发育的研究

采用从新加坡引进的皮球珍珠金鱼雌鱼,让其自然产卵后用灭活的鲤鱼精子激活,人工诱导皮球珍珠金鱼的雌核发育,进行品种纯化.结果表明:雌核发育过程中,二倍体皮球珍珠金鱼的诱导率为(13.54±1.98)%,品种特征纯正的子一代鱼的比例为(68.79±3.57)%.应用人工雌核发育技术诱导皮球珍珠金鱼雌核发育获得成功,构建了皮球珍珠金鱼人工雌核发育的模型.     

非洲猪瘟的研究进展

非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触传染性疾病。其感染率高, 多种传播途径,死亡率可达100％,现还无有效的疫苗及治疗措施。非洲猪瘟在临床上与猪瘟相似，虽这2种疾病的病原体完全不同，但在诊断时极易误诊，为了进一步了解该病,作者综述了该病的病原、流行病学、临床症状、鉴别诊断及我国现状，从而为诊断该病提供了依据。     

鸭肠炎病毒UL18基因的转录、表达特征及原核表达蛋白的初步应用

为了探讨鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)UL18基因的特性和功能,本研究运用生物信息学软件对DEV UL18基因及其编码蛋白进行了分析。构建原核表达质粒pET32a-UL18,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得了大小约为55 000的pET32a/DEV-UL18重组蛋白。将该重组蛋白纯化后免疫家兔,获得了兔抗pET32a/DEV-UL18重组蛋白高免血清。采用荧光定量RT-PCR和Western blot对DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后UL18基因的转录和表达情况进行检测,采用间接免疫荧光对DEV感染鸭的肠道和食道进行检测。生物信息学分析结果表明,DEV UL18基因大小969bp,编码1条由322个氨基酸残基组成的多肽,含15个潜在的磷酸化位点和2个N-糖基化位点,含15个潜在的B细胞表位;系统进化树分析表明,DEV UL18属于ɑ-疱疹病毒的1个成员,与MeHV-1亲缘关系最近;密码子偏爱性分析结果表明,若对DEV UL18基因进行外源表达,真核表达系统可能更容易,若选择原核表达系统,则需对宿主表达菌进行选择和条件优化。荧光定量RT-PCR和Western blot结果表明,DEV感染DEF后2h,UL18基因开始转录,感染后12h开始表达,感染24h后转录和表达产物急剧上升,到36和48h后转录和表达产物分别达最大值,之后逐渐下降。间接免疫荧光结果表明,被DEV感染鸭肠道、食道等组织能检测到明显的阳性信号,表明制备的DEV UL18原核表达蛋白及其兔抗多克隆抗体可用于DEV的诊断试剂材料。     

红嘴鸥TLR7基因克隆与生物信息学分析

【目的】克隆野生鸟类红嘴鸥Toll样受体7(TLR7)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,为后期TLR7蛋白的抗病毒活性研究做准备。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)扩增红嘴鸥TLR7基因全序列,通过生物信息学软件分析TLR7基因序列、稀有密码子、相似性及其编码蛋白的理化性质、跨膜区域、信号肽、N-糖基化位点、磷酸化位点和亚细胞定位,分别利用SOPMA和SWISS-MODEL软件预测TLR7蛋白的二级结构和三级结构。【结果】试验成功克隆红嘴鸥TLR7基因(GenBank登录号:MZ668652),全长1 720 bp,开放阅读框(ORF)大小为1 182 bp,存在39个稀有密码子,其中含8个连续稀有密码子,编码393个氨基酸;红嘴鸥TLR7基因与GenBank中原鸡、红腹角雉、鹌鹑、绿头鸭、黑天鹅、山雀、白鹭、帝企鹅、红喉潜鸟和巴布亚企鹅的TLR7基因相似性分别为85.7%、84.9%、85.4%、87.0%、87.8%、86.8%、91.0%、93.1%、93.1%和93.1%。系统进化树结果显示...     

红嘴鸥产酸克雷伯菌的生物学特性

采集红嘴鸥的粪便并进行细菌分离培养,首次分离到产酸克雷伯菌。红嘴鸥产酸克雷伯菌在普通琼脂、麦康凯、伊红美蓝（EMB）、营养肉汤及SS琼脂培养基上均可生长,多数为单个存在或两两相连,少数依傍聚堆成锯齿状排列。本菌为无鞭毛、无芽孢的革兰氏阴性杆菌,能利用葡萄糖（产酸产气）、可发酵乳糖、甘露醇、麦芽糖及蔗糖;靛基质试验为阳性,MR阴性,VP试验阳性,不产生H2S,可利用尿素及西蒙氏柠檬酸盐,但半固体琼脂（动力）试验为阴性;本菌对氧氟沙星最为敏感;小白鼠对本菌易感,且腹腔接种易感性高。     

"十五"期间组织农民教育培训的措施与启示

提高农民的整体素质，是党的十六届五中全会提出的重要任务，也是建设社会主义新农村的必然要求。加强农民教育，培养有文化、懂技术、会管理的新型农民，提高农民的整体素质是建设社会主义新农村的重要任务。本文结合当前开展的天津市农村劳动力“351”培训工程中的绿色证书工程，着重谈了在组织大规模农民教育培训中的一些措施与启示。     

蔬菜种子使用年限与生产年月的关系

许多农民朋友和部分蔬菜种子经销者误以为种子质量与生产年月直接相关.其实不然,因为通常所说的种子质量指品种纯度、种子净度、发芽率和水分.<农作物种子标签管理办法>第四条规定,农作物种子标签应标注生产年月等内容,第十条又规定,生产年月是指种子收获的时间.