上海地区禽与马血清中西尼罗病毒抗体的调查

西尼罗病毒病是一种以鸟类为中间宿主、以马为终末宿主的人兽共患病,给全球公共卫生带来严重威胁。本文用ELISA方法对上海地区禽和马中西尼罗病毒的血清学进行了调查,结果显示,在所调查的2005年到2009年14类95份禽血清和7个区341份马血清中,禽和马的抗体阳性率分别为5.26%和0%。结果表明,该病在上海已通过禽类开始广泛传播,虽尚未发现终末宿主感染,但已存在一定隐患。因此,应进一步监测该病的流行与传播情况。     

shRNA表达质粒体外防治猪传染性胃肠炎病毒感染

猪传染性胃肠炎病毒是引起猪胃肠道感染的主要病原之一,新生仔猪感染后死亡率很高,给养猪业带来重大经济损失.为了探索运用RNA干扰技术防治猪传染性胃肠炎病毒感染的可能性,我们构建了两个靶向病毒基因组的小发卡RNA(shRNA)表达质粒pEGFP-U6/P1和pEGFP-U6/P2,并分别转染猪睾丸(ST)细胞.通过细胞增殖试验(MTS)和定量RT-PCR检测试验表明,这两个质粒均可高效特异地抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制.研究结果表明,RNA干扰(RNAi)技术可以用来有效防治猪传染性胃肠炎.     

应用体外法检测缓释尿素蛋白精料的缓释效果

尿素是最常用的NPN,但由于尿素在瘤胃中分解很快,往往易发生氨中毒,因此人们一直在探求尿素缓释技术。本试验选用聚乙烯醇( PVA) 作尿素包被剂,制备包膜尿素( PVACoating Urea,以下简称 PCU) 。以 PCU为主要氮源压制缓释尿素蛋白精料( Slow- releasingurea protein concentration,以下简称 SUC) ,并检测其缓释效果。     

复合卵黄抗体在早期断奶仔猪中的应用研究

选用21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪160头，按窝别、性别和体重分为2组，即对照组为基础日粮，试验组为基础日粮＋0．1％复合卵黄抗体粉剂。试验表明，21～35日龄阶段，试验组比对照组平均日增重高15g（P〈0．05），采食量高2．4g·d^-1（差异不显著），料重比下降，腹泻率下降9．9％（P〈0．05）。35-70日龄阶段，试验组比对照组平均日增重高6．5g（差异不显著），采食量下降15g·d^-1，料重比低，腹泻率下降1．5％（P〈0．01）。     

戊型肝炎病毒ORF3蛋白的原核表达和纯化

戊型肝炎病毒(HEV)是一种无包膜、单股正链RNA病毒,其基因组长约7.2kb,包含3个开放阅读框(ORF)。ORF3位于ORF1和ORF2之间,编码含有123个氨基酸的磷酸化蛋白。本文通过PCR扩增HEV ORF3基因,将扩增产物双酶切后,插入具有相同多克隆位点的pET28a(+)、pGEX-4T-1和pET-43.1a(+)载体中,构建pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3原核表达载体。将重组质粒转入E.coli DH5α,菌液PCR筛选阳性结果。序列测定正确后,将其转化E.coli BL21(DE3),加入IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析目的蛋白表达后,进一步利用亲和层析法纯化目的蛋白。结果表明,成功构建了原核表达载体pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3,所构建的载体均可在宿主菌E.coli BL21(DE3)中表达ORF3蛋白。通过Ni-TNA和GSH-Sepharose层析纯化分别分析3种融合蛋白,发现pET43a-ORF3最适合获得纯化蛋白的ORF3蛋白,这为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。     

IV型戊型肝炎病毒ORF3蛋白在人肝细胞中相互作用蛋白的筛选与鉴定

戊型肝炎病毒编码3个开放性阅读框:ORF1,ORF2和ORF3,其中ORF3蛋白的功能目前尚不明确。为了进一步了解其功能,研究构建了ORF3哺乳动物表达载体pcDNA3.1Flag-ORF3,利用免疫共沉淀和LC/MS的方法筛选并鉴定肝细胞中可以和ORF3蛋白相互作用的蛋白。结果显示,成功构建了Ⅳ型戊型肝炎ORF3的重组表达载体,并利用免疫印迹检测其可以在哺乳动物细胞中正常表达ORF3蛋白,在肝癌细胞株HepG2中筛选并鉴定到了7个可能和ORF3相互用的蛋白,并推测其中RPS18的可能性较大,进而推测HEV可能通过ORF3与核糖体直接相互作用,从而影响其所感染的细胞中蛋白的正常翻译过程。本研究为进一步认识戊型肝炎病毒ORF3的功能提供了线索,进而有利于揭示戊型肝炎病毒的致病机理。     

猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆和分析

根据已发表的猪IgG H链序列,设计了1对通用引物,从猪外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IgG H链基因CH2-CH3序列,并克隆入pMD18-T Simple载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经SalI和XbaI双酶切鉴定,筛选出阳性克隆。核酸序列测定分析表明,IgG H链基因CH2-CH3序列全长为669 bp,编码CH2-CH3的221个氨基酸和J区的1个脯氨酸。利用DNASTAR软件将其与猪IgG H链各CH2-CH3序列进行比较,发现其与U03778-1、U03779-2a、U03780-2b、U03781-3、U03782-4的核苷酸序列同源率分别为92.1%、98.4%、98.5%、93.0%和97.2%,推导的氨基酸序列同源率分别为86.5%、96.4%、96.5%、87.0%和94.2%。经进化树分析提示,该序列可能为一个新的亚型。     

“三维”诱食剂对断奶仔猪增重效果的研究

日粮中添加诱食剂的同时，添加适量的生长促进剂，可有效地改善饲料利用率。大蒜素为大蒜中的有效成分，是硫醇的衍生物，有特殊的香味，具有广谱抗菌性。大蒜素作为一种抑菌促生长剂，可增强机体免疫力，提高成活率，改善饲料风味，增强适口性，提高饲料消化利率。本试验旨在验证三维诱食剂对断奶仔猪生长的影响。     

腹泻仔猪肠道病毒组学分析

为了解上海周边地区腹泻仔猪肠道病毒组学特征,特别是冠状病毒流行情况,采用病毒宏基因组学方法对6个猪场的90份疑似病毒感染导致腹泻粪样进行检测,并通过Geneious和MEGA7.0等生物信息学软件对获得的完整的α冠状病毒属中的PEDV ORF3基因序列进行遗传进化分析。数据显示,腹泻仔猪肠道病毒群落组成主要由小RNA病毒科(Picornaviridae)(63.67%)、星状病毒科(Astroviridae)(12.68%)、杯状病毒科(Caliciviridae)(4.07%)、细小病毒科(Parvoviridae)(2.51%)等组成。在唯一一个检测出PEDV阳性的猪场中,腹泻仔猪PEDV阳性率高达43.33%(13/30)。基因序列遗传进化分析显示,在本研究获得的3个PEDV ORF3基因序列中,有1个属于G2基因型,与其他参考PEDV病毒株相似性较高(96.44%～99.70%);另外2个ORF3基因序列属于G1基因型,相似性相对较低(95.11%～99.41%)。与PEDV传统株CV777蛋白序列比较分析发现,除piglet91株产生F2S突变以外,三株PEDV存在一致性突变,分别如下:V21A、I70M、V79I、F80V、L85I、L92F,这一特性,有可能是PEDV传统株与流行株基因型的鉴别依据。上海周边地区腹泻仔猪肠道病毒组成丰富,在不同猪群中,不同病原感染的情况有所差异,除了PEDV外,星状病毒和杯状病毒也是仔猪腹泻的主要病原。PEDV的ORF3基因与传统分离株相比具有独特的分子特征,新检测到的毒株突变位点与病毒毒力的关系有待于进一步研究。研究结果有助于了解腹泻仔猪肠道的病毒谱,并为仔猪病毒病防控提供一定的基础数据。