水产品中地西泮残留来源和应对措施

<正>近年来,我国不同地区、多种淡水水产品如鲢、鳙、鲤等均有检出地西泮残留的报道。虽然检出量较低,但《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(GB 31650-2019)规定,地西泮属“可用作治疗、不得在动物性食品中检出”。地西泮残留检出后将直接判定该批水产品不合格,因此地西泮残留品种、残留量以及潜在的危害引起了社会广泛关注,也使水产业蒙受了巨大经济损失。     

一株亚硝酸盐降解菌的分离鉴定

为寻找对亚硝酸盐具有高效降解能力、稳定和安全的优良菌株,采用亚硝酸盐氧化细菌(Nitrite-oxidizing bacteria,NOB)富集、分离技术从湖州某水域淤泥中分离得到一株纯培养菌株N3。提取细菌的总DNA,利用细菌16S rDNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析,用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank等数据库中进行同源性检索。结果表明,N3的DNA扩增产物片断大小为1441bp,测序结果经检索证实N3与标准菌株Cellulosimicrobium cellulans(AY665978.1)16S rDNA保守性片段有100%的同源性,可以判定所分离得到的N3菌株为纤维单胞菌属的纤维化纤维单胞菌(Cellulosimicrobium cellulans)。     

罗非鱼无乳链球菌溶血素的产生条件及特性

不同的培养条件影响罗非鱼无乳链球菌分离株L4产生β 溶血素的溶血价。最佳培养条件为将种子液按1∶20的比例接种于THB肉汤培养基中,28 ℃静置培养120 h。该溶血素对热非常敏感,在-20 ℃保存较稳定,在4,28,37 ℃保存均易失活。人O型血红细胞对该溶血素最敏感,其次为小鼠和罗非鱼的红细胞,再次为黄颡鱼、鲫鱼、人的A、B、AB型血红细胞,草鱼红细胞对其最不敏感。     

鳙鱼Aristichthys nobilis吻端细胞系BHS的建立及特性观察

以鳙鱼吻端组织为材料，建立了鳙鱼吻端细胞系，定命为ＢＨＳ。７个月期间细胞已传２５代，选用培养基为ＴＣ－１９９加２０％或１０％小牛血清。该细胞生长温度范围为１４℃－３５℃，最适温度２８℃－３０℃，形态主要为纤维样细胞，染色体数从５５－８２（２ｎ－４８）为异倍体细胞，克隆形成率较代为４．４％。     

硫酸阿米卡星在鳗鲡体内的药动学和残留研究

[目的]研究硫酸阿米卡星在鳗鲡体内的药物代谢动力学及其在组织中的残留。[方法]利用高氯酸提取、固相萃取净化组织,2,4,6-三硝基苯磺酸、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三氟乙酸柱前衍生后,采用高效液相紫外检测法测定硫酸阿米卡星在鳗鲡体内药代动力学和残留。[结果]利用衍生法所得药物在0.05~50μg/ml浓度范围内线性关系良好(R=0.999 5),最低检测限为0.05μg/ml。血液和肌肉中的平均回收率分别为75.9%和76.9%。鳗鲡在(26±1)℃以50 mg/kg单剂量肌肉注射给药物后,鳗鲡血液中的药-时曲线符合一级吸收二室模型。达峰时间为0.597 h,分布半衰期为3.52 h,表明硫酸阿米卡星在鳗鲡体内吸收分布迅速。峰浓度为22.229μg/ml,消除半衰期为46.945 h,推测该药物可能残留时间较长。鳗鲡在(26±1)℃下50 mg/kg单剂量肌肉注射硫酸阿米卡星后,5 d后在肌肉组织中未检出,19 d后血液中未检出。[结论]鳗鲡肌肉注射阿米卡星后,停药期为475~513 d。     

枯草芽孢杆菌B115株的毒性研究

本文初步报道了枯草芽孢杆菌(Baclllus subtllls)B115株对鲫鱼、淡水青虾的急性毒性及对小白鼠的30天喂养试验,枯草芽孢杆菌B115株对鲫鱼的96hLD_(50)＞4000ppm,对淡水青虾的96hLD_(50)为1350ppm；以5×10~(10)、1×10~(10)和0．5×10~(10)分别口灌和拌饵投喂小白鼠30天,小白鼠的体表外观、运动能力及内脏器官与对照组无差异,血液学和血液生化指标与对照组无差异。结果表明枯草芽孢杆菌B115株对小白鼠无毒性。     

两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。     

硫酸阿米卡星在鳗鲡体内的药动学和残留研究

[目的]研究硫酸阿米卡星在鳗鲡体内的药物代谢动力学及其在组织中的残留.[方法]利用高氯酸提取、固相萃取净化组织,2,4,6-三硝基苯磺酸、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三氟乙酸柱前衍生后,采用高效液相紫外检测法测定硫酸阿米卡星在鳗鲡体内药代动力学和残留.[结果]利用衍生法所得药物在0.05 ～50 μg/ml浓度范围内线性关系良好（R=0.9995）,最低检测限为0.05 μg/ml.血液和肌肉中的平均回收率分别为75.9％和76.9％.鳗鲡在（26±1）℃以50 mg/kg单剂量肌肉注射给药物后,鳗鲡血液中的药-时曲线符合一级吸收二室模型.达峰时间为0.597.h,分布半衰期为3.52 h,表明硫酸阿米卡星在鳗鲡体内吸收分布迅速.峰浓度为22.229μg/ml,消除半衰期为46.945 h,推测该药物可能残留时间较长.鳗鲡在（26±1）℃下50 mg/kg单剂量肌肉注射硫酸阿米卡星后,5d后在肌肉组织中未检出,19 d后血液中未检出.[结论]鳗鲡肌肉注射阿米卡星后,停药期为475 ～ 513 d.     

抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定

以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9.该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1:1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应.用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F 9识别LPS的类脂A抗原.用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量.     

中华鳖爱德华菌病病原菌的分离鉴定及致病因子研究

采用API 20E系列生化鉴定及16S rDNA和gyrB基因序列同源性分析方法,对从患病中华鳖(Trionyx sinen-sis)肝脏中分离到的一株细菌TL5m进行了鉴定,并通过人工感染试验,对该菌株进行了毒力检测;此外分别提取该TL5m株的主要致病因子外膜蛋白、脂多糖和胞外产物,对中华鳖进行毒力和免疫保护率试验。结果显示:菌株TL5m的API 20E鉴定编码为4544000,99.9%为迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda);其16SrDNA序列和gyrB基因序列(GenBank登录号分别:EF121756和GU563803)与迟钝爱德华氏菌的同源性最高(分别为94%和98%);菌株TL5m对中华鳖的半数致死量LD50为2.45×106 CFU/ind。药敏感结果显示菌株对磷霉素、菌必治、头孢孟多、头孢噻吩、壮观霉素高度敏感。外膜蛋白攻毒剂量60μg/ind和脂多糖攻毒剂量400μg/ind时,对中华鳖的致死率都为33.3%,胞外产物对中华鳖的LD50为31.73μg/ind;全菌灭活苗、胞外产物、外膜蛋白和脂多糖的免疫保护率分别为75%、62.5%、25%和87.5%。结果表明,发病中华鳖的病原菌为迟钝爱德华氏菌,其分泌的胞外产物对中华鳖具有较高毒力;提取的脂多糖对中华鳖遭受迟钝爱德华氏菌攻击具有较高免疫保护率。