新城疫病毒LaSotaC5株感染性克隆的构建及病毒拯救

将本实验室保存的一株LaSota病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代5次后筛选到1株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为LaSotaC5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异。参照LaSotaC5株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT转录载体中,成功构建含有病毒全长eDNA的转录载体TVT．LaSotaC5。将TVT-LaSotaC5与辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI—L共转染BSR—T7／5细胞,成功拯救出了具有感染性的LaSota株新城疫病毒。病毒的成功拯救为后续基因功能和疫苗载体开发等方面的研究提供了平台。     

HeLa细胞中泛素蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响

本文主要对细胞的泛素-蛋白酶体系统是否参与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的复制过程进行了研究。用NDV感染HeLa细胞,对细胞样品进行Western blot实验,并检测细胞26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性变化。同时使用多种泛素-蛋白酶体系统相关的抑制剂处理细胞并做NDV感染,测定细胞上清中病毒TCID50值,比较药物处理与DMSO处理对病毒增殖的影响。结果表明,HeLa细胞在感染NDV后,细胞内泛素化蛋白水平降低,而26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性都显著升高;使用泛素-蛋白酶体系统抑制剂后NDV的增殖受到了明显的抑制,证明NDV在HeLa细胞内的增殖与细胞自身的泛素-蛋白酶体系统关系密切。     

鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的克隆表达及其表达产物活性研究

根据GenBank中鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)MS53株的乳酸脱氢酶序列设计一对特异性上下游引物,通过PCR扩增获得MS WVU1853菌株的乳酸脱氢酶基因并将其克隆至pGEM-T Easy载体,测序正确并成功完成点突变后连接表达菌pET-28a(+),将重组表达质粒pET-28a-ldh转化表达菌BL21(DE3)。经IPTG诱导成功表达蛋白rMSLDH并测定其酶促活性。结果显示,重组表达的rMSLDH具有较强酶活性;最适反应温度40℃,最适pH7.5;Al2+和Ba2+可增加酶活性;Cr3+作为该酶的辅因子,在一定浓度内能有效的促进酶促反应进行;Cu2+作用下酶几乎失活,Fe3+、Mn2+、Ni2+、Zn2+对酶产生不同程度的抑制作用;其米氏常数(Km)为0.365 mmol/L,最大反应速率(Vm)为0.98μmol(L●min)。本研究结果为更好地研究鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的生物学功能提供了参考。     

工作过程导向课程《动物疾病防治基本技术》的开发探索

我院兽医专业近几年根据专业工作过程,结合兽医行业特有工种的职业资格标准,进行课程的开发和设计,打破原有课程的内外产传寄学科体系,构建和开发诊治防控检的工作过程导向课程体系。探索开发基于兽医专业工作过程的课程体系,使自然形成的认知心理顺序与自然形成的工作     

自拟中药组方对奶牛临床型乳腺炎疗效研究

为了研究中药对奶牛临床型乳腺炎的治疗效果,试验选取自然发病的临床型乳腺炎患牛并分成4组,其中Ⅰ组和Ⅱ组采用经乳导管注射抗生素的方法给药,Ⅲ组和Ⅳ组采用灌服自拟中药复方制剂的方法给药,给药1～2个疗程后观察治疗效果。结果表明：自拟中药复方制剂1对临床型乳腺炎有较好的疗效,与抗生素疗效相当。     

高职院校《动物药理》教材开发的几点做法

自1996年<中华人民共和国职业教育法>确立高等职业教育在我国的法律地位以来,高等职业教育有了长足的发展,但是高职教育的课程设置及课程结构仍是参照本科的学科体系,教材也是在此基础上根据结构庞大而逻辑严密的学科顺序编排的,学生的自然的心理顺序与人为构建的非自然的学科顺序是不一致的,致使其不能很好地适应职业工作.     

RNA病毒感染对应激颗粒的调控作用

哺乳动物细胞受到热休克、氧化应激、营养缺乏或者病毒感染等环境压力时,能够迅速启动细胞的压力应答机制,终止细胞内的蛋白翻译,在这个过程中,往往会形成应激颗粒。应激颗粒作为胞浆中终止活动的翻译起始复合物的聚集产物,在细胞的基因表达和内平衡中发挥着重要的作用。尤其是当病毒感染细胞时,应激颗粒的形成可以使细胞的蛋白翻译水平大大降低,从而抑制病毒的复制。然而在病毒的长期进化过程中,也衍生出了对抗细胞压力应答的相应机制,有些病毒甚至可以利用应激颗粒中包裹的沉默的转录本促进自身的复制。本文将着重就RNA病毒对应激颗粒的调控以及最近提出的压力应激与先天性免疫之间的关系做一综述。     

专业理论与专业技能同步教学法在《动物寄生虫病》教学中的应用及效果

专业理论与专业技能同步教学法是打破理论课、试验课和实训课的界限,将课程的理论教学、实践教学融于一体,教学环节相对集中,由同一教师主讲,教学场所直接安排在实验室或实训基地,来完成某个教学目标和教学任务。该教学法在专业课教学中加以运用,可以打破传统"学科型"教学体系中理论教学与实践教学相脱节的弊端,将理论教学与实践操作溶于一体,激发学生的求知欲望,转变学生被动学习的状况,提高学习效率。     

奶牛皱胃变位手术方法及应用研究

奶牛皱胃变位是指皱胃的正常解剖学位置发生改变,变位分为左方变位与右方扭转。前者指皱胃通过瘤胃下方移到左侧腹腔,置于瘤胃和左腹壁之间,后者又分逆时针扭转和顺时针扭转,皱胃向前方扭转置于网胃和膈肌之间,称为右方逆时针扭转,向后方扭转置于肝脏和右腹壁之间,称为右方顺时针扭转。     

稳定表达TIGAR基因的BHK-21细胞系的构建及其对新城疫病毒增殖效果的评价

TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子(TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR)是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和抗细胞凋亡功能.由于新城疫病毒(NDV)引起细胞死亡是通过诱导凋亡产生,所以提高宿主细胞的抗凋亡水平,有助于延长细胞存活时间进而提高子...