中国明对虾FcβGBP-HDL基因和启动子的克隆及序列特征分析

FcβGBP-HDL是中国明对虾免疫应答中的一种模式识别受体,在白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)侵染后其表达显著上调.为了探讨FcβGBP-HDL在免疫应答中的转录调节机制,实验以FcβGBP-HDL cDNA为基础设计引物,采用染色体步移技术对其基因组DNA和启动子进行克隆,构建一系列缺失表达载体进行启动子活性分析.结果显示,FcβGBP-HDL基因全长6 713 bp,无内含子;启动子区域长1 507 bp,除了1个启动子核心序列、2个SRF、2个TBP、1个CTF和1个CRE等典型的启动子特征外,还有2个GATA-1、3个AP-1、1个c-Ets-1和7个Sp1等参与其它节肢动物免疫基因转录调节的结合位点;同源比对分析表明,FcβGBP-HDL启动子与FcCTL启动子相似度最高(41.4％);不同长度的启动子片段具有不同的启动荧光素酶报告基因表达的活性,其中去除5 '端2个AP-1后的启动子片段具有最高的启动活性,去除启动子核心序列的启动子片段启动活性最低.研究表明,FcβGBP-HDL启动子可能在免疫反应中受到调节.     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育种核心群体在连续排污养殖模式下的生长和存活性能分析

利用配置连续排污系统的室外水泥池养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)2012级育种核心群家系,监测、分析3个生长阶段养殖环境的水质变化、育种群体的生长和存活性能,为建立安全、高效的育种核心群体养殖模式提供基础数据。结果显示,在较高养殖密度(180 ind/m2)条件下,氨氮含量在7 d内从0达到1.80 mg/L的高峰值,在随后的养殖过程中呈波浪式变化,波动范围为0.50-1.80 mg/L;亚硝酸盐含量维持在低于0.60 mg/L的水平;pH值在7.2-8.2之间;溶藻弧菌、副溶血弧菌和哈维氏弧菌的含量分别为500-6200、0-400和0-10 CFU/ml;凡纳滨对虾的平均生长速率为0.199 g/d,养殖成活率达到89.7%;凡纳滨对虾体质量的生长符合Boltzmann和Logistic模型,体质量观测值与模型拟合值的决定系数(R2)分别为0.978和0.980,预测体质量规格为10-12 g时,为其体质量增长拐点。     

对虾一种杆状病毒多角体蛋白基因的PCR扩增

根据已发表的几种杆状病毒的多角体基因的序列比较与分析，设计并合成两对ＰＣＲ简并引物Ｐ—６０／Ｐ７４０和Ｐ１６４／Ｐ６４０，从纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒提取ＤＮＡ并进行ＰＣＲ扩增，Ｐ—６０／Ｐ７４０的扩增片段较为复杂，基中１条的长度为８００ｂｐ的主带与设计的ＤＮＡ片段长度相近。Ｐ１６４／Ｐ６４０经优化ＰＣＲ的反应条件后，成功地扩增出与设计相同的约４８０ｂｐＤＮＡ片段。进一步的实验表明，Ｐ—６０／Ｐ７４０扩增的分子量为８００ｂｐ的片段可被Ｐ１６４／Ｐ６４０引物对扩增，分子量与预期的相同，初步研究结果显示，Ｐ—６０／Ｐ７４０可用于杆状病毒多角体蛋白全基因的克隆，Ｐ１６４／Ｐ６４０对于对虾杆状病毒的调查和研究有实际应用价值。     

凡纳滨对虾SNP标记开发与家系亲缘关系验证分析

本研究基于转录组序列开发了37个SNP标记,并对22个凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)家系进行了遗传多样性、家系聚类和亲子鉴定分析,探讨SNP标记在对虾家系选择育种中的应用途径。结果显示,37个SNP位点在凡纳滨对虾22个家系中的平均期望杂合度(He)和平均观测杂合度(Ho)分别为0.38和0.34;平均多态信息含量(PIC)为0.30,属于中度多态性(0.25相似文献   

中国明对虾caspase2基因克隆及其在抗白斑综合征病毒中的表达分析

采用RACE技术克隆获得中国明对虾caspase2基因cDNA序列全长,并对该序列进行分析。结果显示,中国明对虾caspase2基因全长为1517 bp,开放阅读框长924 bp,5'非编码区长78 bp,3'非编码区长515 bp,命名为FcCasp2。推测该基因编码307个氨基酸,预测分子量为34.21 ku,理论等电点为7.62。同源性和系统进化分析发现,FcCasp2基因与凡纳滨对虾caspase2和斑节对虾caspase的相似性分别为88%和80%,与其他节肢动物caspase家族基因聚为一类。荧光定量RT-PCR结果显示,FcCasp2基因在肝胰腺中的相对表达量最高,在肌肉中表达量最低。WSSV感染后该基因在中国明对虾肌肉、肝胰腺和鳃丝中的表达量有不同的时空表达趋势,表明FcCasp2基因可能参与中国明对虾生物胁迫的应答反应。     

白斑综合症病毒（WSSV）对中国对虾卵及各期幼体人工感染的试验研究

用感染白斑综合症毒病的中国对虾头胸甲，对健康的仔虾进行了人工投喂感染实验，同时从病虾中分离出病毒悬液作为毒种，无节幼体，蚤体 幼体和糠虾体进行不同温度条件下的人工浸浴实验，结果表明，卵和无节幼体，蚤状幼体，糠虾幼对病毒悬液不敏感,闰理切片观察未见病毒粒子，光镜病理切片可观空到鳃上皮，前肠上皮有包涵体样病变，同时在肝胰组织中发现了肝胰腺细小病毒（HPV）包涵体。     

1993～1994年山东省中国对虾育苗期病毒感染的流行病学调查

１９９３年和１９９４年育苗期，在山东省十余家育苗场采集了亲虾、受精卵、无节幼体、蚤状幼体、糠虾幼体和仔虾等样品共５６份。组织病理学切片观察说明，所有样品均未检查出对虾暴发性流行病病原ＨＨＮＢＶ的病理变化；ＨＰＶ的病理变化主要在亲虾、糠虾幼体和仔虾中检出，蚤状幼体有ＨＰＶ感染的可疑情况。１９９４年，５．５％的糠虾幼体和５．１％的仔虾检出有ＨＰＶ的感染。在糠虾和仔虾阶段，海捕亲虾苗种的ＨＰＶ带毒率为４．０％，越冬亲虾苗种的带毒率为６．２％。ＨＰＶ和ＨＨＮＢＶ的单克隆抗体ＥＬＩＳＡ检测方法表明有３个样品为可疑的ＨＨＮＢＶ阳性；有１２．５％～２５％的糠虾期育苗池和７０％的仔虾期育苗池存在有ＨＰＶ的感染。     

中国对虾新品种“黄海2号”的培育

选取中国对虾“黄海1号”、“即抗98”2个养殖群体,朝鲜半岛南海群体、乳山湾群体、青岛沿岸群体及海州湾群体4个自然群体,采用不平衡巢式交配设计方案,于2005年建立了中国对虾育种的基础群体.设计并建立了中国对虾的多性状复合育种技术,选育的目标性状为生长速度、白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)感染后的存活时间及养殖存活率.结果显示,养殖170 d收获体质量的遗传力为0.22,抗WSSV存活时间的遗传力为0.14,存活率的遗传力为0.03.采用BLUP法估算个体育种值,通过百分比加权的形式,分别赋予生长速度、抗WSSV存活时间和存活率的加权值为80％、15％和5％,并对性状育种值进行标准化,获得综合选择指数;按照每个家系及个体的综合选择指数大小进行家系间及家系内留种,并根据系谱信息,设计交配方案,将每代的近交系数控制在1％以内.选育4代后的统计结果表明,平均每代的遗传进展为生长速度,13.56％;抗病力,6.76％;存活率,5.05％.3个性状中,收获体质量的遗传力最高、加权最大,每代获得的遗传进展稳定在12％以上;抗WSSV存活时间与存活率遗传力较低,每代获得的遗传进展相对小且不稳定.实验培育的新品种“黄海2号”于2009年通过全国水产原良种委员会审定,可在适合中国对虾的养殖区进行推广养殖.     

中国对虾人工受精技术的研究

首次探讨了中国对虾人工受精的方法。干法、湿法、半湿法和滴管法都可获得一定比例的受精卵,其中滴管法的受精效果最佳,最高受精率为77.8％。受精卵经过培养,能够进行正常的卵裂和胚胎发育。通过对这几种方法受精效果的分析和比较,认为,在精卵未丧失受精能力的前提下,尽可能地使精卵充分混合,才能得到较高的受精率。还对这四种方法的人工受精和自然受精对受精率的影响进行了比较和分析。     

中国明对虾Dscam基因的克隆及其在免疫致敏(类免疫)诱导反应中的表达分析

为了研究对虾免疫致敏过程中Dscam基因的表达规律,实验采用同源克隆和RACE技术获得了中国明对虾Dscam基因c DNA全长序列,并对该序列进行生物信息学分析。结果显示,中国明对虾Dscam基因的c DNA全长为6 624 bp,其中包括171 bp的5′端非编码区,459 bp的3′端非编码区,开放阅读框的长度为5 994 bp,编码1 996个氨基酸。推测该基因编码的蛋白含有一个信号肽、10个Ig结构域、6个FNIII功能区、1个胞质尾区和1个跨膜结构域。同源性分析及系统进化分析表明,Dscam基因与节肢动物的Dscam基因首先聚为一类,且与凡纳滨对虾的同源性最高,为92.4%。连续投喂6 d热灭活白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)饵料来诱导免疫致敏反应,在0、6和12 d及二次感染后的12、24、48、72和168 h分别取样,用RT-PCR的方法检测中国明对虾Dscam的相对表达量。结果显示,诱导感染组Dscam基因在第12天开始上调,且与阴性对照组和未诱导感染组差异显著;二次感染后24 h,Dscam基因的相对表达量达到最大值,与阴性对照组和未诱导感染组差异显著;48 h后基因表达量开始下降,但表达量仍高于阴性对照组和未诱导感染组。实验表明,中国明对虾存在Dscam基因,并在免疫致敏过程中发挥重要作用。