锦鲤疱疹病毒CJ株ORF27基因克隆及生物信息学分析

为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株（KHV-CJ）ORF27基因编码蛋白的结构特征和进化关系,采用镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF27基因,将其克隆在pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF27基因的结构和功能,并与GenBank上公布的三株KHV构建系统进化树。结果显示：获得207bp的ORF27基因,编码69个氨基酸;预测ORF27编码蛋白的理论分子质量为7366.62Da,等电点为4.487;抗原表位预测显示抗原性良好;编码蛋白存在1个N-糖基化位点、4个O糖基化位点和5个磷酸化位点;系统进化树分析表明与锦鲤疱疹病毒美国株（KHV-U）属同一分支。     

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF124基因的克隆及生物信息学分析

为研究我国锦鲤疱疹病毒的基因背景信息,从锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ株)获得ORF124基因,应用生物信息学方法分析KHV-CJ株ORF124基因结构和功能,并与Genbank上已公布的三株KHV进行比较分析.结果显示,ORF124基因的理论分子质量为31221.96 Da,KHV-CJ株与其他三株KHV同源性均为99％;信号肽切割部位最可能位于24位的T(苏氨酸)和25位的V(缬氨酸)氨基酸之间;ORF124基因无跨膜区;氨基酸序列不存在潜在的N-糖基化位点、11个潜在的O-糖基化位点和7个磷酸化位点.该蛋白的表面抗原决定簇位点区域广泛、峰值高,预示该基因可作为基因工程疫苗的重要候选基因.     

锦鲤疱疹病毒病疫苗和免疫方法的研究进展

锦鲤疱疹病毒病(Kio herpesvirus diease,KH-VD)是由锦鲤疱疹病毒引起的一种导致锦鲤和普通鲤鱼高发病率和高死亡率的病毒病,死亡率可高达80%～100%。该病主要发生在水温18～28℃的春秋两季,夏季和冬季很少或不发生,同时该病只感染鲤鱼以及其他鲤科鱼类,而不感染其他品种的鱼类,但可携带病毒。经研究发现,该病毒为双股线性DNA病毒,其基因组大小为295kb,有156个开放阅读框(ORF),但只有少数确定了其功能。经电镜观察可发现该病毒是大小为100～110纳米的二十面体,有囊     

锦鲤疱疹病毒病的诊断及防治措施

正鲤鱼是品种最多、分布最广、养殖历史最悠久、年产量最高的淡水养殖鱼类之一,具有极高的经济价值。由于锦鲤的进出口及鲤鱼的国际贸易,目前锦鲤疱疹病毒病已在世界范围内传播,严重威胁鲤和锦鲤产业发展。我国养鲤业同样深受该病困扰。本文对锦鲤疱疹病毒的病原、流行病学、发病机制、诊断方法及防治措施进行整理,以期为有效鉴定锦鲤疱疹病毒病并及时控制治疗提供一定的指导方法。     

东北地区白斑狗鱼成鱼养殖技术研究

正2001年新疆额尔齐斯河特种鱼类繁育场在国内率先突破了白斑狗鱼的人工繁殖和苗种培育技术。此后该鱼在全国各地开始养殖。为了探索该鱼在东北地区的生长适应性,优化东北地区的水产养殖品种结构,发展高效、生态渔业。我们在2008年5月开始了白斑狗鱼的引进及池塘养殖试验,探讨了东北地区池塘健康养殖白斑狗鱼成鱼的关键技术,取得了一定的     

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF25基因的克隆及生物信息学分析

为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF25蛋白的结构特征和进化关系,采用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF25基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF25基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的三株KHV构建系统进化树。结果显示,获得了长1824 bp的ORF25基因,编码608个氨基酸;预测ORF25基因编码蛋白的理论分子质量为66825.44 Da,等电点为7.947;抗原表位预测显示抗原性良好;编码蛋白存在6个N-糖基化位点、25个O-糖基化位点和28个磷酸化位点;系统进化树分析显示,与锦鲤疱疹病毒美国株属同一分支。     

东北地区池塘养殖条件下白斑狗鱼肌肉营养成分分析

[目的]为评价在不同地区养殖白斑狗鱼的营养品质提供依据。[方法]从新疆地区引进白斑狗鱼夏花鱼种,在东北地区池塘养殖条件下对白斑狗鱼的肌肉营养成分进行分析。[结果]白斑狗鱼的鲜样肌肉水分、灰分、粗蛋白和粗脂肪含量分别为78.58%、2.20%、18.36%和1.32%,肌肉干样的灰分、粗蛋白、粗脂肪含量为87.83%、85.70%和6.16%。18种氨基酸总量为15.12%(占鲜样),其中人体必需的8种氨基酸含量为6.07%(占鲜样),占氨基酸总量的40.18%;4种鲜味氨基酸含量为5.75%。必需氨基酸指数(EAAI)为103。DHA和EPA含量丰富,占脂肪酸总量的23.74%,特别是DHA含量占脂肪酸总量的22.97%。[结论]在池塘养殖条件下白斑狗鱼仍属于一种高蛋白、低脂肪的优质鱼类,具有较高的开发养殖价值。     

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF56基因的真核表达及生物信息学分析

为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF56基因的结构和序列特征,试验采用锦鲤尾鳍原代细胞增殖培养KHV-CJ,提取DNA,以其为模板经PCR扩增获得ORF56基因,将该基因克隆到PVAX表达载体上,构建重组质粒PVAX-ORF56,并体外表达重组质粒,对KHV-CJ ORF56基因序列与GenBank上已知的对应基因序列进行比对,应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF56基因的结构和功能。结果表明:成功克隆出KHV-CJ ORF56基因;双酶切鉴定显示,目的基因与PVAX表达载体连接;体外表达重组质粒可见绿色荧光;与GenBank上已知序列比对显示,同源性达到99.9%;该基因序列信号肽切割部位最可能位于第26位的组氨酸和谷氨酸之间,没有跨膜区,最大疏水指数为2.174,最小疏水指数为-0.334,其抗原表位主要集中在第1～27,54～143,156～223,254～295位氨基酸。说明KHV-CJ ORF56基因是较好的抗原候选基因。     

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF81基因的克隆及生物信息学分析

为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ) ORF81蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF81基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒.应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF81基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的3株KHV构建系统进化树.结果显示,获得了长771 bp的ORF81基因,编码256个氨基酸;预测ORF81基因的理论分子量为28 246.50 u,等电点为8.404;疏水性大于亲水性;信号肽切割部位最可能位于29位的S(丝氨酸);有4个跨膜区;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,不存在N-糖基化位点、存在6个O-糖基化位点和11个磷酸化位点;系统进化树分析显示,与锦鲤疱疹病毒以色列株属同一分支.     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及鉴定

为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切和脂质体介导法,将其转染MDCK细胞,获得重组病毒rCAV-2-GP5,经酶切鉴定显示该重组病毒含有目的基因。经RT-PCR检测表明,rCAV-2-GP5能够转录相应GP5蛋白基因mRNA;western blot检测证实GP5蛋白在MDCK细胞中得到表达。体外连续传30代检测表明,rCAV-2-GP5具有良好的遗传稳定性。本实验为PRRSV新型疫苗的研制奠定了基础。