锦鲤疱疹病毒病病原检测能力验证结果分析

为了提高中国锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病原检测的整体水平,加强相关实验室检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的能力,2014—2016年开展了3次能力验证项目。能力验证样品为盲样,使用鲤鱼组织匀浆液,与包含了KHV TK基因片段和Sph基因片段的2种重组质粒溶液混合制成。对盲样进行了均匀性和稳定性检测。采用水产行业标准《鲤疱疹病毒检测方法 第1部分：锦鲤疱疹病毒》(SC/T 7212.1-2011)中,推荐使用的聚合酶链式反应(PCR)方法进行病毒检测,并对各参加单位锦鲤疱疹病毒的检测结果进行分析。2014年能力验证第一轮测试结果满意率为58%,第二轮满意率为96%;2015年能力验证第一轮测试结果满意率为77%,第二轮满意率为89%;2016年能力验证第一轮测试结果满意率为82.69%,第二轮满意率为92.73%。通过2014至2016年的能力验证活动,大多实验室具备了锦鲤疱疹病毒PCR检测能力和质量管理水平,可以承担锦鲤疱疹病毒的检测和监测工作。     

南非Ⅱ型口蹄疫病毒抗原表位的筛选及抗原性分析

目前,我国南非Ⅱ型(SATⅡ)口蹄疫病毒(FMDV)的防控形势十分严峻,为了防止SATⅡ型FMD的跨境传入,迫切需要建立其特异的检测方法。本研究以SATⅡ型FMDV结构蛋白氨基酸序列为依据,利用分子生物学软件分析了FMDV结构蛋白VP1~VP3上可能的抗原表位,并人工合成了8条表位多肽。通过采用SATⅡ型FM-DV阳性血清进行ELISA反应,检测其反应原性;通过采用与载体蛋白偶联的合成肽免疫小鼠,测定小鼠血清中抗体效价,检测合成肽的免疫原性。结果表明,合成的8条多肽均能与SATⅡ型FMDV阳性血清结合,其中的6条多肽免疫小鼠后能产生针对多肽的抗体。本研究为利用串联表位为抗原检测SATⅡ型FMDV抗体方法的建立奠定了基础。     

中国沿海养殖牡蛎尼氏单孢子虫感染情况调查

单孢子虫病是严重危害世界贝类养殖业的主要疫病之一。本研究选取中国沿海养殖的牡蛎作为研究对象,采用OIE推荐的PCR方法结合测序技术,对采自中国沿海4个监测点养殖牡蛎的感染情况进行调查,结果表明,这些监测点养殖的牡蛎均不同程度感染了单孢子虫。经PCR测序及序列分析表明感染种类均为尼尔森单孢子虫(Haplosporidium nelsoni)。     

南非Ⅱ型口蹄疫主要抗原表位串联基因的表达及抗原性分析

在对南非Ⅱ型口蹄疫病毒抗原分析基础上,将已经筛选出的6条抗原性良好的多肽采用柔性linker拼接,人工合成相应核苷酸后连入T载体中。将酶切回收的串联基因(VP1-VP3)克隆于表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-VP1-VP3。该质粒转化于感受态细胞BL21(DE3) plysS中,经IPTG诱导后进行了可溶性分析和Western blotting分析,且对融合蛋白柱上酶切纯化后进行了抗原性分析。重组质粒pGEX-VP1-VP3的PCR和测序结果表明,VP1-VP3串联基因已成功插入pGEX-6p-1载体中;pGEX-VP1-VP3融合蛋白分子质量约为38.3 ku,并以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,该融合蛋白与南非Ⅱ型FMDV阳性血清能发生特异性反应;酶切纯化后蛋白间接ELISA鉴定结果表明,表达的VP1-VP3蛋白具有良好的免疫原性与反应原性。串联多肽的成功表达,将为南非型口蹄疫血清学检测方法建立奠定基础。     

96孔板-PCR排除法筛选猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因

为了从猪蛔虫雌虫cDNA文库中筛选出猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因,本研究根据猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因的EST序列为模板设计引物,采用96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并筛选出阳性克隆F993-G10-A10。测序结果表明,该基因序列长621bp,有完整的3'端。经BLAST分析,其推导的氨基酸序列与秀丽隐杆线虫(C.elegans)的卵黄蛋白原基因(Vit1、Vit2、Vit3、Vit4和Vit5)的氨基酸序列的一致性分别为35%、35%、34%、34%和35%,核苷酸序列相似性分别为55%、57%、54%、54%和53%。该阳性克隆的获得为该基因的深入研究奠定了基础。同时也证明了96孔-PCR排除法是一种高效、简便、低成本的筛选文库方法。     

欧洲暴发施马伦贝格病疫情及我国应采取的对策

2011年夏秋季节,德国和荷兰一些牛场开始出现一种未知疾病,病牛出现发热(>40℃)、精神不振、体质下降、厌食、产奶量下降(高达50%)和腹泻等临床症状,有时出现流产症状,但多数症状出现数天后自动消失[1-2]。德国弗里德里希洛弗勒研究所(Friedrich Loffler Institute,FLI)通过实验室诊断,先后排除了蓝舌病、流行性出血热、口蹄疫、裂谷热、     

Pseudoterranova decipiens复合种的几个姊妹种种间线粒体nad1基因序列差异的研究

对来自世界各地的P．declplens复合种共6个姊妹种的线粒体（mtDNA）NADH脱氢酶亚单位Ⅰ基因（nad1）序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析。结果显示，nad1基因序列种间差异为3．6％～15．0％，遗传差异性分析结果与ITS1、ITS2和cox1的基因序列遗传差异性分析结果基本上一致，nad1能提供准确的遗传标记，可用于P．decipiens复合种姊妹种的鉴定。这些结果有助于阐明P．declpiens复合种种间的遗传变异，为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。     

口蹄疫检测技术的研究进展与应用

从生物学试验、血清学诊断技术和分子生物学检测技术等方面概述了目前口蹄疫检测技术的研究进展及其应用。其中生物学试验包括动物试验和细胞培养;血清学诊断技术包括补体结合试验、中和试验、凝集试验、酶联免疫吸附试验和免疫胶体金快速检测技术等;分子生物学检测技术包括反转录聚合酶链式反应、核酸探针、核酸序列分析和等电聚焦等。     

进口俄罗斯牛肉传入牛结节性皮肤病风险评估

依照世界动物卫生组织《陆生动物卫生法典》中的动物及动物产品进境风险分析框架,采用定性评估方法,对俄罗斯输华牛肉开展牛结节性皮肤病传入风险评估。评估认为,在不采取检疫监管措施的情况下,牛结节性皮肤病随俄罗斯进口牛肉传入的风险为"中",暴露风险为"低",后果风险为"高",综合风险为"中"。由此,建议采取产地牛源控制、疫源监测检测以及加强宰前宰后检验和牛肉进口检疫监管等措施,防范牛结节性皮肤病随俄罗斯牛肉进口传入我国。