鱼类细胞系研究现状

鱼类细胞系是研究鱼类病毒学、生理学、毒理学、免疫学和分子遗传学的重要材料和重要的体外研究系统。鱼类细胞系的组织来源包括脑、心脏、鳃、肾脏、鳍条和卵巢等各种组织。目前已至少建立并应用了826株鱼类细胞系。本文综述了近年来鱼类细胞系的组织来源、培养方法及应用现状,旨在为鱼类细胞系研究提供最新的数据支撑。     

反刍动物埃立克体微滴数字PCR方法的建立及初步应用

为建立反刍动物埃立克体(E.ruminantium)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR),本研究以E.ruminantium p CS20基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,建立了E.ruminantium dd PCR方法。利用本研究建立的dd PCR方法检测E.ruminantium、牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、无形体、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体等,结果显示仅E.ruminantium出现特异性扩增,而与其他寄生虫均无交叉反应,特异性强;将p UC57-p CS20重组质粒标准品10倍倍比稀释(1×10-1拷贝/μL～1×105拷贝/μL)后,利用该dd PCR方法检测,结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限为1.8拷贝/μL,比相应荧光定量PCR方法的敏感性高10倍,本实验建立的dd PCR方法敏感性高;批内和批间重复性试验结果变异系数(CV)均小于2%,重复性好。利用建立的dd PCR方法对50只钝眼蜱样品检测,结果显示,阳性样品反刍动物埃立克体核酸的最低拷贝数为26拷贝/μL,dd PCR和荧光定量PCR检测试剂盒的检出率均为1...     

非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体的筛选及免疫学特性鉴定

为制备非洲猪瘟病毒CD2v蛋白阻断ELISA候选单克隆抗体,并探究其免疫学特性,以真核表达的CD2v蛋白免疫BALB/c小鼠,经两次免疫后采集小鼠血清,以间接ELISA检测小鼠多抗血清效价。对血清效价最高的小鼠进行加强免疫后,取脾脏进行细胞融合。通过有限稀释法筛选能够稳定分泌CD2v单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生腹水法和辛酸-硫酸铵法获得纯化的CD2v单克隆抗体,对其进行免疫学特性检测。间接ELISA试验显示,4号小鼠血清效价最高(1:72 900),选取该小鼠脾脏进行细胞融合,经过筛选得到4株杂交瘤细胞,分别命名为21D10、21G8、36A3和38G8,亚型鉴定均为IgG₁/κ,经检测36A3 ELISA效价最高,可达1:2.187×10⁵。免疫荧光试验显示,36A3抗体能与细胞内表达的CD2v蛋白发生特异性反应,而与携带His标签的p30蛋白无交叉反应;特异性鉴定结果显示,36A3抗体特异性良好,与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒以及非洲猪瘟病毒p72蛋白均无反应;亲和力检测显示,36A3抗体亲和力较高,亲和...     

对动物检疫中检测试剂使用问题的探讨

进出境动物检疫是保护国门生物安全的重要举措,而规范、合格的检疫试剂是检疫任务顺利完成的前提。文中分析了近几年动物检疫常用检测试剂的对比研究文献,发现在动物检疫实际工作中,因检测靶标和方法不同,往往导致结果出现差异,同时检测试剂的诊断敏感性和特异性也会影响检测结果的准确性。在对相应问题分析的基础上,提出了建立标准化、规范化的质量评价体系,依据检测目的选择相应试剂,以及加强自主研发,提高检测水平等建议,以期为进出境动物检疫常用试剂的选用提供依据。     

环介导恒温扩增技术快速检测非洲猪瘟病毒

以人工合成的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72全长基因为模板,利用在线软件Primer Explorer4设计环介导恒温扩增(LAMP)的内、外引物,通过对反应体系和反应条件进行优化,建立了ASFV的LAMP检测方法,同时进行了敏感性和特异性试验。结果表明,所建立的LAMP检测方法最低检测限可达10拷贝质粒DNA,且具有良好的特异性,LAMP产物的酶切鉴定也验证了反应的特异性。对凝胶电泳后紫外观察、肉眼观察颜色变化、生成沉淀观察以及实时荧光PCR扩增曲线Ct值判定等不同判定方法进行比较表明,以上结果判定方法各有其优缺点,其中荧光PCR的敏感性最高,染色法相对较方便直观,电泳法敏感性稍低。     

仔猪球虫病的防制

集约化养猪生产使得象猪等孢球虫之类的病原容易发作并造成严重的危害 ,大多数猪场的产房条件都非常优越 ,温度、湿度等极利于球虫繁殖 ,乳猪也容易感染。球虫病是造成 7～ 1 4日龄间仔猪发生腹泻的主要原因。但由于重视不够、诊断不准 ,此病对生产造成严重的经济损失。1　球虫病对养猪生产的危害1球虫病导致的发病及死亡损失 ;2至断奶时 ,同窝仔猪发育不一致 ;3平均断奶体重下降 ;4继发细菌等感染而引起生病或死亡 ;5治疗本病及继发感染的开支 ;6消除被污染的圈舍工作量大 ,且不容易清洁。2　消除本病任重道远可用于猪场控制球虫病的方法有…     

猪链球菌2型LUX荧光PCR检测方法的建立

猪链球菌2型是一种严重的人兽共患病病原,为满足猪链球菌2型快速检测的需要,本研究根据猪链球菌2型Cps2J保守区设计LUX引物,首次利用LUX PCR方法对猪链球菌2型进行检测,并进行了敏感性和特异性试验及模拟样品检测试验。结果显示,本研究建立的猪链球菌LUX 荧光PCR检测方法具有较好的敏感性和特异性,检测质粒样品的敏感性为10拷贝,检测模拟样品敏感性为10²拷贝,与无乳链球菌、巴氏杆菌、粪链球菌、马链球菌兽疫亚种、沙门氏菌等无交叉反应。该方法的建立为猪链球菌2型的快速检测提供了新的途径。     

施马伦贝格病焦磷酸测序检测方法的建立

为适应口岸施马伦贝格病快速、准确、高通量检测需求,建立一种基于RT-PCR及焦磷酸测序技术平台的施马伦贝格病检测方法。本研究针对施马伦贝格病毒基因组RNA的S、M和L三个基因节段保守区域利用焦磷酸测序软件PyroMark Q96ID分别设计RT-PCR扩增引物及焦磷酸测序引物,以人工合成的SBV重组质粒为模板分别建立了SBV S、M、L基因的PCR-焦磷酸测序检测方法,比较三基因的PCR扩增结果以及测序分析结果,结合特异性检测结果,最终确定以M基因作为靶基因建立的焦磷酸测序检测方法效果最好,并以德国FLI提供的SBV（BH80株）RNA对所建立的方法进行验证,通过对测得序列的比对分析可确定为施马伦贝格病毒,这表明本研究所建立的方法灵敏度高、稳定性好、特异性强,可以用于施马伦贝格病毒基因序列水平上的精准检测鉴定。     

常见的家禽骨骼疾病

家禽骨骼疾病(见表)被认为是4种限制肉用鸡生产性能的主要因素之一。肉鸡和火鸡生产迅速,上市时间早,同生长慢的鸡相比,其腿部疾病较多,因此造成的损失亦较严重。Morris(1993)调查数据表明,肉鸡腿部疾病可导致美国每年0.8～1.2亿美元的损失,火鸡约0.32亿美元的损失。他列举了引起肉鸡腿部疾病的5个主要原因:营养障碍(如佝偻病)、传染性疾病(如病毒性关节炎)、代谢