枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis WHNB02）,其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31．5倍,回收率为13．0％。该酶为单体酶,SDS—PAGE测得的分子量约为43KD,以植酸钠为底物的Km值为0．5mmol／L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10min酶活保存61％,最适pH为7．0,在pH6．0—10．0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca^2＋存在。EDTA,Mn^2＋,Ba^2＋（5mmol／L）对酶活具有很大的抑制作用。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2 、Pb2 、Fe3 对酶有抑制作用,Ba2 、Fe2 对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

禽传染性支缺管炎病毒四川分离株M基因的克隆及真核表达载体构建

膜蛋白是禽传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白,可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,能诱导细胞介导的免疫反应,但其免疫生物学功能尚不清楚.本研究选择禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBWJ,通过RT-PCR扩增获得其膜蛋白基因M基因并插入到PGEM-T载体中,获得重组质粒PGEM-M,将重组质粒中的克隆片段进行序列测定及分析.对PGEM-M进行双酶切获得M基因片段,克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过菌落PCR、双酶切证明获得了M基因的真核表达质粒.利用DNAstar软件将IBV SAIBwj株的膜蛋白基因的核苷酸序列与GenBank中的国内外参考毒株进行比较,其核苷酸序列的同源率为91.6%～98.8%,氨基酸序列的同源率为91.6%～99.6%.糖基化位点的增加和减少对M蛋白的抗原性产生很大的影响.在M蛋白近N端含有两个糖基化位点,第一个跨膜疏水区距离亲水区大约20个氨基酸.SAIBwjM基因核苷酸、氨基酸进化关系可以看出,SAIBwjM与国内外参考株的同源性均较高,因此可能具有交叉保护性抗原,可望用于制备诊断试剂及制备基因工程疫苗.由于IBV变异较大,常规疫苗不能产生完全保护力.在IBV的免疫保护机制中,细胞免疫起着关键的作用,近年来一些研究者已经进行了IBVDNA疫苗的研究,并取得了一定的进展.IBV的S1基因真核表达质粒可同时诱导机体形成针对IBV的细胞免疫和体液免疫反应,由于S1基因经骨骼肌细胞内源性表达后主要通过MHCI类分子提呈抗原,特别有利于CD8+细胞毒T淋巴细胞的激活,对IBV免疫保护极有意义.陈洪岩等将鸡传染性支气管炎病毒肾型T株S1基因cDNA连接于pcDNA3构建了真核表达质粒,经肌肉注射免疫SPF鸡后血清IgG抗体逐渐升高,至35日龄左右达到高峰,但血清IgG抗体升高幅度不及IB油苗.质粒DNA免疫攻毒后有40%的鸡可耐过强毒的攻击,说明S1基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力.刘思国等将鸡传染性支气管炎HB株的核蛋白基因(N基)亚克隆到pcDNA3,构建了真核表达质粒pcDNA-N.用该质粒两次免疫SPF雏鸡一周后进行攻毒试验,结果保护率为40%,表明N蛋白介导的细胞免疫在抗感染中发挥了作用.现在的DNA疫苗研究主要集中在免疫原性较高的N基因和S基因,对免疫原性较低的M基因的研究,国内未见报道.国外有报道M蛋白也能刺激机体产生低水平的抗体,M蛋白上可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,本研究将为进一步研究M基因的免疫原性及其在IBV中的作用基础材料.     

内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中高效表达及表达条件研究

根据枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因序列设计引物,采用PCR扩增到获得去除信号肽后约1.4Kb的内切葡聚糖酶表达片段。以此片段成功构建了pPIC-End载体,并转化至巴斯德毕赤酵母GS115。经过MD、MM平板筛选和酶活性测定,获得了高效表达的转化子GS115-pPIC-EndⅠ、GS115-pPIC-EndⅦ、GS115-pPIC-EndⅧ。在摇瓶培养条件下,对酵母工程菌表达条件进行了优化研究：在pH4-8条件下均能稳定表达,诱导起始OD600=5表达水平最高,甲醇诱导最佳浓度为0.5%-1%,加大培养通气量对表达有显著的促进作用。三种工程菌在优化条件后诱导培养,酶活性可达860.7U、760.3U、786.2U,分别为原始菌株酶活（63.78U）的13.5倍、11.9倍和12.3倍。SDS-PAGE分析表明表达产物分子量约为79.82KDa,热稳定性分析表明该酶在65℃保温30min可保持最高酶活的80%以上。     

规模化猪场仔猪黄白痢大肠杆菌的药敏区系调查

仔猪黄痢、仔猪白痢是由致病性大肠杆菌引起仔猪的一种疫病。其病原菌主要为肠产毒性大肠杆菌( ETEC) ,每年在死亡的幼猪中约有 5 0 %与 ETEC有关[1] 。王红宁等[2 ] 1 995— 1 999年在四川等地规模化猪场通过流行病学调查发现 ,仔猪黄、白痢的发病率可达 2 0 %～ 60 % ,如果仔猪黄、白痢与其它猪病混合感染 ,其死亡率可达 60 %以上。随着养猪业向规模化发展 ,由大肠杆菌引起的仔猪腹泻有明显上升趋势 ,仔猪死亡率增高 ,存活率降低 ,断奶窝重降低 ,严重制约了养猪业的发展。大肠杆菌用药物治疗效果不理想 ,且因盲目用药使用药成本增高。…     

生物炭对铜胁迫下盘菜种子萌发及幼苗生长的影响

为探讨生物炭缓解铜胁迫对盘菜幼苗伤害的调节作用机制,以温州盘菜为试材,通过盆栽试验,研究了不同生物炭添加量(3%、5%)对铜胁迫(300mg·kg~(-1))下盘菜种子萌发、叶绿素相对含量(SPAD)、生长性状、活性氧清除系统酶活性、丙二醛含量的影响。结果表明:生物炭浸提液可以缓解由铜胁迫造成的盘菜种子萌发抑制;铜胁迫下盘菜幼苗生长缓慢,以及生长性状、叶绿素相对含量均有所降低,活性氧清除系统酶(SOD、POD)活性以及丙二醛(MDA)含量均呈增加趋势;随着生物炭添加量的增加,叶绿素相对含量呈上升趋势,活性氧清除系统酶(SOD、POD)活性以及丙二醛(MDA)含量均有一定程度的下降。综上可见,生物炭可以提高铜胁迫下盘菜苗期的抗氧化能力和对铜胁迫的耐受性,缓解铜污染对盘菜幼苗的伤害,利于调节盘菜幼苗的生理代谢。     

农民专业合作经济组织的发展机理探析

阐述了农民专业合作经济组织特有的发展机理,指出它是分散弱小的广大农户为应对市场风险、提升市场竞争地位而自愿组织起来的内生型组织;从具有所有者与使用者同一、劳动联合、民主管理和共有产权等方面探讨了农民专业合作经济组织区别于其他经济组织的本质特征;剖析了农民专业合作经济组织的动力机制,指出市场环境和政府政策构成其外部发展动力,组织形成方式以及产权制度、激励制度等是其发展的内部动力,组织发展效率的提升主要依赖决策成本、监督成本和教育成本等非物质成本的降低。     

金荞麦内转录间隔区(ITS)的扩增及序列分析

以2份金荞麦为材料,对其内转录间隔区ITS区序列进行PCR扩增,均获得长约700 bp的特异性产物。测序结果表明,金荞麦1号样品包含ITS序列660 bp,金荞麦2号样品包含ITS序列646 bp,在Genebank中的登录号分别为DQ780602和DQ780600。对现有金荞麦ITS的序列比对表明,其同源率为80.2%~93.1%,变异位点主要在ITS1,表现出较丰富的遗传多样性。采用邻接法构建了金荞麦的系统进化树。     

喷施茉莉酸甲酯对百合花香的影响

为了揭示茉莉酸甲酯(MeJA)对百合花香释放的影响,使用50、200、600μmol/L的MeJA溶液喷施西伯利亚百合花瓣,通过顶空套袋法收集花朵挥发物,采用自动热脱附-气质联用技术对挥发物成分及其释放量进行测定。结果表明,经200、600μmol/L的MeJA处理后,与对照相比西伯利亚百合挥发物总释放量显著升高,而50μmol/L的MeJA处理则引起了挥发物释放量明显下降。其花朵释放的挥发物主要包括八大类,萜烯类挥发物平均释放量最高,酯类挥发物种类数量最多。萜烯类、醇类、醛类、酮类等物质随着MeJA含量的增加,释放量呈上升趋势;酯类的释放量呈现先增高后下降的趋势;脂肪烃类物质随MeJA溶液浓度升高,释放量先下降后升高;芳香类的释放量对MeJA溶液浓度的改变几乎无响应。月桂烯和罗勒烯是西伯利亚百合最主要的花香成分。月桂烯、萜品烯、丁酸乙酯、正己酸乙酯、惕各酸乙酯等花香挥发物的释放量随着MeJA浓度升高,表现出先升高后下降的趋势;以罗勒烯和波斯菊萜为代表的一系列花香挥发物的释放量随着MeJA浓度的升高逐渐升高;还存在一类化合物如萜品油烯等,对MeJA浓度变化无明显响应。