JAK/STAT通路抑制剂AG490对单核细胞增生李斯特菌感染的影响

为检测Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂α-氰-3, 4-二羟基-N-苄基肉桂酰胺(AG490)对单核细胞增生李斯特菌(LM)感染小鼠脑微血管内皮细胞和小鼠的影响,将不同浓度抑制剂AG490与细胞共同孵育,然后将LM分别感染细胞,MTT法检测不同浓度抑制剂AG490对细胞活性的影响;利用菌落计数法计算LM的侵袭率和胞内细菌数量,检测AG490对LM介导的小鼠生存曲线的影响;利用试剂盒检测抑制剂AG490对LM介导的乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响;利用实时定量PCR检测AG490对LM介导的炎性小体NLRP3的mRNA水平影响。结果:抑制剂AG490在5、10或15μmol/L浓度时未见对细胞活性有明显影响,AG490显著抑制了LM的侵袭、胞内和脏器内细菌数量,提高小鼠成活率,显著提高LM介导的LDH、IFN-γ、IL-6、IL-1β和NLRP3的mRNA水平。本研究表明,JAK/STAT信号通路抑制剂AG490可调控细胞内LM的存活,增强LM介导的细胞炎性小体水平,为调查LM引起脑膜炎的致病机制提供科学依据。     

NF-κB信号通路在丝状支原体山羊亚种感染中的作用

为分析细胞核转录因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路在丝状支原体山羊亚种(Mmc)感染山羊肺泡上皮细胞中的分子作用机制,将Mmc感染细胞,于4 h、8 h、12 h和24 h收集细胞,利用实时定量PCR检测NF-κBp65 mRNA的表达水平。采用不同浓度的NF-κB抑制剂BAY11-7082与细胞孵育1 h,然后用Mmc感染细胞,于24 h收集细胞,利用实时定量PCR检测白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达水平,用试剂盒检测Caspase-3活性、H2O2和NO浓度变化,利用平板计数检测Mmc对细胞的致病力变化。结果显示,Mmc于8 h、12 h和24 h等3个时间点显著提高细胞NF-κBp65 mRNA表达水平(P0.01);Mmc显著提高细胞IL-8 mRNA水平、TNF-αmRNA水平、Caspase-3的活性、H2O2和NO浓度(P0.01),而BAY11-7082(浓度为5μmol/L和10μmol/L)能够显著降低Mmc介导的细胞IL-8 mRNA水平、TNF-αmRNA水平、Caspase-3的活性、H2O2和NO浓度的升高(P0.05),且可显著降低细胞中Mmc存活量(P0.05)。综上可知,NF-κB信号通路在Mmc致病机制中发挥重要作用。     

mTOR抑制剂对胞内李斯特菌繁殖的影响

为了检测mTOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin)对单核细胞增生李斯特菌(Lm)在小鼠脑微血管内皮细胞内存活的影响,将不同浓度抑制剂雷帕霉素与细胞共同孵育,然后将Lm分别感染细胞,细菌菌落计数法计算胞内细菌数量,MTT法检测抑制剂雷帕霉素对细胞活性的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抑制剂雷帕霉素对Lm介导的IFN-γ和IL-6分泌的影响,利用试剂盒检测caspase-1活性。结果表明:抑制剂雷帕霉素在5、10、25 nmol/L浓度时不影响细胞活性,雷帕霉素显著抑制了Lm在细胞,且与雷帕霉素浓度和感染时间相关,雷帕霉素显著提高了Lm介导的IFN-γ、IL-6、caspase-1、IL-1β和NLRP3的mRNA水平。结论:本研究表明,mTOR抑制剂雷帕霉素可调控细胞内Lm的存活,雷帕霉素可增强Lm介导的细胞炎性体水平,为Lm引起脑膜炎的致病机制提供科学依据。     

藤茶粉对杂交鲟生长性能和肌肉品质及肠道菌群的影响

将180尾、体质量为(32.81±1.28) g的杂交鲟幼鱼随机均分为4组，分别投喂藤茶粉添加水平为0.00%(A0)，0.50%(A1)、1.00%(A2)、2.00%(A3)的试验饲料，试验共进行60 d，每组3个重复，每个重复15尾鱼，试验结束后，检测杂交鲟的生长性能、血清生化指标和免疫指标、肠道形态指标、消化酶活性和微生物多样性、肌肉组分含量和氨基酸组成。结果表明：与A0相比，A1和A2杂交鲟的终质量、增重率、特定生长率和成活率均无显著变化，A3的终质量、增重率和特定生长率均显著降低；A1的总胆固醇、甘油三酯、白蛋白含量及谷草转氨酶活性均显著升高，A2和A3的谷草转氨酶活性均显著降低；各试验组的血清碱性磷酸酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力及肠道蛋白酶、淀粉酶活性均显著升高，A2的脂肪酶活性显著升高，A1的脂肪酶活性显著降低；A1和A2的肠道皱襞高度显著升高；A2的肠道菌群的物种多样性增加；各试验组的肌肉常规成分均无显著变化；A2和A3肌肉的必需氨基酸占总氨基酸的比值显著升高。可见，本研究条件下，适量添加藤茶粉可提高杂交鲟的免疫水平而不影响其生长，添加量以1.00%为宜。