几种抗菌药物对嗜水气单胞菌突变选择窗(MSW)范围的研究

为了测定盐酸恩诺沙星、氟苯尼考和卡那霉素对5株临床分离的嗜水气单胞菌的MSW范围,本研究采用试管双倍稀释法测MIC,平板稀释法测MIC99,以超过1010 CFU接种于药物平板上的方法测MPC,确定了3种抗菌药物对5株临床分离的嗜水气单胞菌的突变选择窗范围.结果表明,卡那霉素和盐酸恩诺沙星对5株嗜水气单胞菌的MIC99相差不大,但MPC之间的差异较大:卡那霉素对4号菌株的MPC明显大于其他几种菌株,恩诺沙星对2号菌株的MPC明显小于其他菌株;氟苯尼考对2号菌株MIC99明显大于其他4种菌株,而MPC值均大于128 μg/mL.因此认为,目前恩诺沙星和氟苯尼考治疗嗜水气单胞菌的给药方案虽可发挥一定的治疗效果,但容易导致嗜水气单胞菌耐药性的产生.     

三种中药复方对鲤幼鱼生长及免疫性能的影响

本试验研究了灌服三种复方中药水煎剂后鲤鱼生长、免疫以及血液生化指标的变化.选用健康1龄鲤鱼,按平均体重分四组,每组40尾,设置两个重复在相同条件下喂养.连续灌服中药28 d后采样检测各项指标.结果表明,三个灌服中药组鲤鱼的增重率均比对照组有显著的提高.方剂AH、AB在有细菌性抗原侵入时能提高血清中总蛋白(TP),白蛋白...     

施氏鲟免疫球蛋白酶解片段分析

采用几种蛋白水解酶对施氏鲟免疫球蛋白的酶解片段进行了分析。结果显示施氏鲟的免疫球蛋白在37℃条件下可以被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶分别裂解成不同的片段：木瓜蛋白酶的酶解片段出现在分子质量为130KDa、50KDa、10KDa和7KDa的蛋白谱带附近,而在酶量比较小、酶解时间较短的一组,在94KDa附近也有一条蛋白谱带;胃蛋白酶的水解片段,主要出现在分子质量为130KDa、94KDa、90KDa和32KDa的蛋白谱带附近;胰蛋白酶酶解片段主要为分子量为130KDa和74KDa的两条主带。     

硝基苯染毒后鲤鱼Na~+,K~+-ATP、GSH-PX酶活性及MDA含量的恢复

将试验鱼暴露在硝基苯质量浓度为100×0.017,50×0.017,25×0.017,12.5×0.017,6.25×0.017,0 mg/L的水体中,72 h后置于清水中,于1,2,3,4,5,9,14 d分别取样,测定其对硝基苯敏感的生化指标:鳃Na+,K+-ATP酶、肝谷胱甘肽过氧化物酶和血清丙二醛.结果表明:硝基苯质量浓度低于12.5×0.017 mg/L时,鳃Na+、K+-ATP酶的活力基本保持不变,而达到25×0.017 mg/L时,鳃Na+、K+-ATP酶的活力开始较明显地降低;质量浓度超过12.5×0.017 mg/L时,GSH-PX活力一直表现为诱导作用;高浓度组(25×0.017,50×0.017,100×0.017 mg/L)与对照组相比MDA含量显著提高(P<0.05),至第4 d则与对照组没有明显变化.硝基苯染毒浓度越大,对鲤鱼影响越明显,染毒浓度越大,鲤鱼恢复正常所需的时间也就越长.     

三北地区鱼源气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

选取三北地区鲤、鲫、草鱼、大西洋鲑等鱼体内分离到的气单胞菌共16株,结合革兰氏染色、氧化酶反应和分子生物学方法对其进行鉴定后,采用K-B药敏纸片法测定16株菌对10类25种药物的敏感性。结果表明:16株菌均为革兰氏阴性、氧化酶阳性细菌;Blast比对分析发现实验菌株的16S rRNA序列分别与Gen Bank数据库中维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌的不同菌株的16S rRNA基因序列同源性较高,相似性达95%以上;系统发育树显示16株菌分别与维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌的不同菌株聚为一支,而与肠杆菌、志贺菌和弧菌分支较远,从而判定为维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌;16株分离菌中有3株维氏气单胞菌、4株嗜水气单胞菌、3株温和气单胞菌和6株杀鲑气单胞菌;药敏试验中16株气单胞菌对氨苄西林、青霉素G、阿莫西林、三甲氧苄氨啶、复方新诺明、磺胺异噁唑、氯霉素、利福平具有较高的耐药性,耐药率达95%以上,对氟喹诺酮类药物普遍较敏感,不同菌株之间的耐药谱存在很大差异。为气单胞菌的鉴定及三北地区淡水鱼细菌病的药物防治提供科学依据。     

喹乙醇对鱼类毒性作用的研究Ⅰ饲料中添加不同剂量喹乙醇对鲤鱼的生长及肠道菌群的影响

研究了饲料中不同剂量喹乙醇对鲤鱼生长、肠道菌群数量及组成的影响.设计6组不同喹乙醇含量的饲料(0,200,400,800,1 600和3 200 mg·kg-1),对鲤鱼进行84 d的饲养试验.试验结束时,各组随机取2尾鱼,分别对其前、中、后肠的细菌数量和组成进行了分析.结果发现,喹乙醇添加剂量在200～800 mg·kg-1可明显促进鲤鱼的生长并提高饲料转化效率,在3 200 mg·kg-1时则对其生长产生明显的抑制作用,且降低饲料转化效率.与对照组相比,投喂喹乙醇的试验组鱼肠道菌群数均有不同程度的下降,其中1 600,3 200 mg·kg-1组的下降最为明显.从1 600 mg·kg-1开始前肠菌群数明显下降,在400 mg·kg-1时中肠菌群数开始下降较为明显,后肠群数在各试验组均呈下降趋势.在对照组检出的7种主要菌群也是构成各个实验组鱼肠道中的主要菌群,但这7种菌群在各组中的组成比例不同,其中鲤鱼肠道菌属中Aer属、Aci属的组成比例变化较大,800 mg·kg-1(11.06%)、1 600 mg·kg-1(11.735%)和3 200 mg·kg-1(7.407%)组中Aer所占比例明显低于对照组(26.255%),而800mg·kg-1(37.502%)、1 600 mg·kg-1(36.52%)和3 200 mg·kg-1(41.357%)组中Aci所占比例明显高于对照组(13.213%).提示饲料中添加不同水平的硅乙醇可明显影响鲤鱼的生长性能及其肠道主要菌群的数量和组成比例.     

恩诺沙星对小体鲟和史氏鲟体内SOD活力影响的比较研究

在水温23℃、pH值6．5、溶氧10mg／L、氨氮含量小于0．1mg／L和亚硝酸盐含量小于0．001mg／L的条件下,将恩诺沙星按照0、20、40、60、80和100mg／kg浓度,连续口服给平均体重50．0±5．0g的小体鲟（Acipenser ruthenus Linnaeus）及史氏鲟（Acipenser schrenckii Brandt）5d,停药2d后测定其血浆及肝脏组织中过氧化物岐化酶SOD的活力,以期掌握不同恩诺沙星给药浓度下,两种鲟两种组织中SOD活力变化趋势,探讨分析该酶在药物代谢过程中的作用机制。结果表明：两种鲟两种组织内均含有一定量的SOD酶,且在对照组及所有给药组肝脏中酶活力均高于血浆中。不同给药浓度下,两种鲟两种组织中SOD活力均先受诱导升高,而后被抑制降低的变化趋势,且在40mg／kg浓度组达到最大值。血浆中SOD活力受给药浓度影响较小,起伏较平稳,而小体鲟SOD活力始终高于史氏鲟。肝脏中SOD活力变化较剧烈,在低浓度组（〈40mg／kg）史氏鲟肝脏中SOD活力明显高于小体鲟,而在高给药浓度组（〉40mg／kg）则小体鲟略高于史氏鲟。     

诺氟沙星在金鳟体内的药物代谢动力学研究

实验水温为15±2℃,金鳟（Oncorhynchus mykiss）（平均体质量100±10g）单剂量肌肉注射30.0 mg/kg诺氟沙星后,应用高效液相色谱（HPCL）法于0.15,0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,4,6,8,12,24,48,72 h测定了鱼血浆、肝脏和肾脏组织中药物的浓度,研究了诺氟沙星在金鳟组织中的分布及药物动力学规律。结果表明,诺氟沙星在金鳟体内吸收分布迅速,符合药物动力学一级吸收二室开放模型,但消除缓慢。诺氟沙星在金鳟血浆、肝脏和肾脏中的主要动力学参数如下：分布半衰期（T1/2α）分别为0.866、1.985、0.388h;消除半衰期（T1/2β）分别为31.369、36.402、30.975h;药时曲线下面积（AUC）分别为：308.005μg/mL.h、622.721μg/g.h、794.362μg/g.h。     

肌肉注射感染嗜冷黄杆菌虹鳟的组织嗜性与动态分布

嗜冷黄杆菌(Flavobacterium psychrophilum)是鲑鳟类细菌性冷水病(bacterial cold water disease, BCWD)的病原菌, 该病的发生和流行严重制约了鲑鳟产业的健康发展。本研究分析嗜冷黄杆菌肌肉注射感染虹鳟(Oncorhynchus mykiss)后病原菌的动态组织分布情况, 以期为 BCWD 的防控提供理论支撑。以 1.0×108 CFU/mL 浓度的嗜冷黄杆菌 CH06 株菌液肌肉注射感染实验虹鳟, 感染后 12 h、24 h、96 h 观察虹鳟临床症状及组织病变, 并利用 qPCR Taqman 探针法检测各组织病原载量。患病鱼的临床病征表现为体色发黑、游动缓慢或不动、食欲不振, 尾柄部注射处肌肉溃烂, 鳃苍白, 脾脏肿大, 伴有腹水。组织病理观察显示, 嗜冷黄杆菌感染后实验鱼注射处肌纤维断裂、溶解; 脾窦扩张, 其内充满红细胞; 肾脏组织含铁血黄素增加, 出现大量空泡变性, 肾小管上皮细胞变性、坏死, 肾间质炎性细胞浸润。qPCR 检测结果表明, 肌肉注射感染 12 h 后即可在脾脏、肝脏、肾脏、肠道、鳃、注射处肌肉、脑和尾鳍中检出嗜冷黄杆菌, 注射处肌肉病原载量最高为(5.85±2.11)×10⁵ copy/μL。感染后 24 h, 脾脏、脑中病原载量较 12 h时上升最多, 其他组织病原载量与感染 12 h 时水平一致, 注射处肌肉病原载量为(6.48±2.07)×10⁵ copy/μL, 显著高于其他组织(P＜0.05)。感染 96 h 后脾脏中的病原载量显著高于其他组织(P＜0.05), 达到(1.15±0.58)× 10⁷ copy/μL; 肝脏、肾脏、脾脏中的病原载量较 24 h 时上升最多。所有被检组织中病原菌载量随时间延长均呈上升趋势。另外, 3 个时间点注射处肌肉的病原平均载量最高, 其次为脾脏, 然后是肾脏和鳃。嗜冷黄杆菌人工感染虹鳟后, 注射处肌肉、脾脏是细菌的重要增殖场所。综上, 嗜冷黄杆菌可随着血液循环进入虹鳟各组织, 并表现出对注射处肌肉、脾脏、肾脏和鳃较强的组织嗜性, 而对肝脏、尾鳍、肠道和脑组织的嗜性相对较弱; 感染时间和病变程度与组织中的病原载量呈正相关。     

三种复方中草药对鲫血清、肝胰脏及脾脏中溶菌酶活性的影响

在水温18℃下研究了三种复方中药（AB、CD、AH）作为饲料免疫添加剂对体质量（44.6±0.2）g 1＋龄健康鲫（Carassius auratus）血清、肝胰脏和脾脏中溶菌酶活性的影响。试验鱼分为3组,每天按体质量的2.0%分别投喂添加了3种中药复方的饲料,对照组投喂基础饲料,每组均设相同数量的鱼做平行,连续饲喂28 d,停食1d后采集血液及组织样品,测定溶菌酶活性。结果显示：3种复方中药都能提高鲫体内溶菌酶活性。其中AB组提高血清中溶菌酶活性效果显著,AB、CD组对肝胰脏中溶菌酶活性的提升效果显著,3种复方中药对鲫脾脏中溶菌酶活性的提升均效果显著,说明3种复方中药均可增强鲫免疫力,有进一步研究和应用的价值,但对不同组织溶菌酶活性的影响不同,提示中药作用效果和机理的差异。