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11.
12.
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。 相似文献
13.
刺参全体重与躯体重为线性函数关系,其回归曲线为W1=0.537900+3.7001。采用海区调查和室内实验相结合方法,研究了刺参夏眠特点。不同年龄组群的夏眠临界为水温是1,1龄为24.1℃,2龄为22.9℃,2-3龄21.8℃,龄以上21.8℃;体重25克以内的个体77.8%消化痄宛明显退化,尚能继续摄食,不夏眠;消化道退化是在摄食强度降低的前提下发生的;肠退经一条长度与体长近似,直径不足1毫米的 相似文献
14.
随着社会主义新时代的到来,兽医行业面临前所未有的发展机遇和挑战,因此对我国兽医人才的培养也提出了新的更高的要求,迫切需要一大批专业技能型兽医人才。目前,许多高等农业院校培养出的兽医专业人才专业理论基础不扎实、操作技能普遍偏低,不能适应生产一线需要。对此,塔里木大学动物科学学院临床兽医、预防兽医和基础兽医方向7位志同道合的教师组成一个团队,对学生施行共同培养,形成"团队式"的人才培养模式。该培养模式实施两年以来,成效显著,学生的个人认识、实践能力等综合素质显著提升。笔者从我国兽医人才培养现状及存在问题、"团队式"兽医人才培养模式及培养效果等多个方面进行了阐述。 相似文献
15.
为分析中国新疆小反刍兽疫病毒(PPRV)毒株分子演变特点和疫情传播路线,从GenBank数据库下载所有国家全部的PPRVF基因全序列,应用DNAStar软件,结合疫情毒株时空分布进行序列分析。结果显示,中国新疆PPRV株F基因全序列,与2014年小反刍兽疫情中河南和北京毒株核苷酸的同源性最高,为99.8%~99.9%,与中国西藏3个毒株核苷酸的同源性为97.7%,与中国采用的疫苗株核苷酸同源性为92.9%,核苷酸同源性最低的是肯尼亚毒株,与国外毒株核苷酸同源性最高的是印度毒株。F基因系统进化关系分析显示,中国新疆PPRV株属于基因Ⅳ系。F蛋白氨基酸同源性结果显示,除与科特迪瓦1989年毒株ICV89氨基酸同源性最低外,与其他氨基酸同源性比对结果均与核苷酸的比对结果一致。中国新疆PPRV株存在一定程度的变异,可能是由周边国家传入。 相似文献
16.
试验旨在分析2013年新型重配A(H7N9)流感病毒分子流行病学特点。作者从GenBank数据库下载不同分离宿主的流感毒株NA全基因序列,应用分子生物学软件进行遗传进化分析。结果显示,2013年新型重配A(H7N9)流感毒株NA蛋白颈部氨基酸发生缺失,其唾液酸结合(HB)位点发生一定程度适应性变化,NA蛋白糖基化位点为7个,NA蛋白酶活性中心未发生变异。与A/Hangzhou/1/2013(H7N9)株中NA片段的核苷酸同源性较高的前10个序列均分离自亚洲5个国家的禽类,同源性达96%以上。至于此次新型重配A(H7N9)流感毒株NA基因是否是禽传给人尚不清楚,还有待进一步研究。 相似文献
17.
根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%~100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。 相似文献
18.
[目的]明确新疆南疆驴是否感染EIV,及EIV NA基因特征.[方法]根据GenBank登录的EIV基因序列,设计合成1对引物,针对新疆南疆地区2个驴屠宰点33份驴肺进行EIV NA基因RT-PCR扩增、电泳分析、胶回收、测序及序列分析.[结果]中国新疆南疆驴源EIV A/donkey/Xinjiang/1/2015(H3N8)株NA基因长1 413 bp,编码470个氨基酸.与国内外H3N8亚型EIV参考毒株核苷酸同源性为75.2; ~ 99.6;,与国内外参考毒株氨基酸同源性为80;~100;,与国内毒株、哈萨克斯坦毒株和印度毒株在一个进化分支内.与GenBank数据库中唯一一个驴源毒株A/donkey/Xinjiang/5/2007(H3N8)糖基化位点个数和分布位置完全一致.[结论]新疆南疆存在驴感染EIV,可能为国内疫情的延续或周边国家传入. 相似文献
19.
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析 总被引:9,自引:1,他引:8
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单股正链RNA病毒。其基因组长约15kb,含有8个开放的阅读框架(ORFs)。PRRSV基因组的顺序依次为:5’-ORFla-ORFlb-ORF(2—6).ORFT-3’。鲁韦韦等分析表明,PRRSV的ORF7基因保守性较好,变异较小。此外,ORF7编码的核衣壳蛋白(N蛋白)具有良好的免疫原性及反应原性,机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白的。因此,N蛋白常可作为诊断抗原来检测PRRSV。 相似文献
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