仿洄游培育美洲鲥亲本的性腺发育

为解决美洲鲥(Alosa sapidissima)人工培育亲本性腺发育不佳的问题,开展了美洲鲥亲本仿洄游的培育,研究观察了美洲鲥亲本卵巢和精巢不同发育阶段(II^V期)的形态特征及相关参数,确定了仿洄游培育美洲鲥亲本性腺初次发育的特征。结果显示:在美洲鲥仿洄游培育过程中,在卵巢、精巢发育前期(II期),雌雄亲本生长迅速;而性腺发育到III期后,雌雄亲本的生长滞缓,雌鱼亲本甚至出现负生长。仿洄游培育美洲鲥性腺初次发育(II^V期)过程中,雌雄亲本均有较高的肥满度,分别为1.55~2.07和1.56~1.71;卵巢发育Ⅴ期雌鱼亲本的肥满度(2.07)显著高于在卵巢II^IV期亲本(1.55~1.67);而雄鱼亲本肥满度在精巢发育各阶段(II^V期)均无显著性差异。仿洄游培育美洲鲥性腺发育良好,雌雄亲本的性腺指数均较高,性腺发育Ⅴ期雌雄亲本的性腺指数(GSI)分别为(26.10±6.46)(18.88~33.62)和(5.18±0.68)(4.49~6.11)。研究表明,仿洄游培育的水温(10.8~30.8℃)和盐度(1~15)的周年变化符合美洲鲥亲本性腺发育的要求。     

长江刀鲚 GHRH基因遗传多态性及其与生长性状的关联分析

生长激素释放激素（GHRH）是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其 GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性状的关联性研究,为其分子标记辅助育种提供技术支持。结果显示：长江刀鲚 GHRH基因cDNA全长1 329 bp,由5′-UTR（300 bp）、ORF（465 bp）和3′-UTR（564 bp）组成,推导的蛋白序列由154个氨基酸组成,具有一个信号肽和GLUCA结构域;该基因的DNA序列长2 983 bp,由4个内含子和5个外显子组成,经筛选,在第1、2内含子和第3外显子上分别筛选到9、2和1个SNP位点;12个突变位点共36种基因型,分别与100尾长江刀鲚的体质量、体长和体高性状进行关联分析,获得2个与其生长性状显著相关的位点（g.1636C>T和g.1882A>C）（P<0.05）,CC基因型均是优势基因型;利用12个SNP位点分析刀鲚养殖群体的遗传多样性,获得的观测杂合度（HO）、期望杂合度（HE）和多态信息含量（PIC）分别为0.270~0.620、0.338~0.490和0.281~0.370;哈迪-温伯格平衡（HWE）检测结果显示,12个SNP位点中有4个位点显著偏离哈迪-温伯格平衡（P<0.05）。结果表明,长江刀鲚 GHRH基因上位点g.1636C>T和g.1882A>C可以作为优选长江刀鲚繁育亲本的重要候选分子标记。     

筛选法提高罗非鱼苗种雄性率效果的初步研究

取新吉富罗非鱼苗为材料,广式鱼筛为主要工具,以经过一筛、二筛和三筛处理的为试验组,甲基睾丸酮处理、既不筛选也不甲基睾丸酮处理的为对照组,研究筛选法提高尼罗罗非鱼苗种雄性率的效果。结果表明,平均每筛可提高雄性率7.9%,三筛后雄性率达91.4%,较无处理组(67.7%)提高23.7个百分点,较甲基睾丸酮处理组(98.8%)低7.4个百分点,但结果已相对比较理想,如对筛选工具和工艺予以完善,相信可以满足养殖生产、食品安全和环境保护的要求。     

刀鲚MSTN基因遗传多态性与生长性状的关联分析

为筛选刀鲚(Coilia ectenes)生长性状遗传改良的分子遗传标记,基于现有刀鲚转录组数据,利用基因克隆技术获得养殖刀鲚肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的全长序列,采用PCR产物直接测序和SNaPshot技术分别进行基因多态性的筛选和分型,并将不同基因型与刀鲚的生长性状(体长、体高和体质量)进行关联分析。结果显示,养殖刀鲚MSTN基因的DNA序列主要由2个内含子和3个外显子组成,经SNP位点筛选,仅在第1内含子上筛选到2个颠换突变位点(g.564G>T和g.755G>T)和1个转换突变位点(g.786C>T);将3个SNP位点与生长性状进行关联分析发现,SNP位点g.786C>T与刀鲚的体长、体高和体质量呈显著性负相关,具有TT基因型个体的体长、体高和体质量显著低于CC型和CT型(P<0.05),而SNP位点g.564G>T和g.755G>T的不同基因型仅与刀鲚的体高具有一定程度的相关性;3个SNP位点对养殖刀鲚的群体遗传分析显示,刀鲚养殖群体的观测杂合度(H O)、期望杂合度(H E)和多态信息含量(PIC)分别为0.280~0.480、0.332~0.455和0.277~0.351,3个SNP位点均属于中度多态(0.25T有望作为剔除劣质刀鲚繁育亲本的候选分子标记。     

长江刀鲚脑转录组多态性EST-SSRs的规模化开发与利用

为加速长江刀鲚(Coilia nasus)分子标记辅助育种的研究进程,对养殖长江刀鲚雌、雄个体分别进行转录组测序,利用MISA软件挖掘长江刀鲚脑转录组Unigenes中的EST-SSRs,采用SSRMMD软件规模化开发多态性EST-SSRs,并对3个长江刀鲚养殖群体开展遗传多样性研究。结果表明：从雌性长江刀鲚脑转录组143 374条Unigenes中获得了95 905个EST-SSRs,从雄性脑转录组135 215条Unigenes中获得了88 774个EST-SSRs;雌、雄转录组EST-SSRs均以二核苷酸重复基序数量最多,其他核苷酸重复基序的数量均呈逐级减少的趋势;单核苷酸到三核苷酸重复基序的优势重复基序分别为A/T、AC/GT和AGG/CCT;从1 082个多态性EST-SSRs中随机选取20个位点设计基因特异性PCR扩增引物,并进行有效性和多态性验证,获得了18对多态性较好的EST-SSRs(多态率约为90%),用其评估长江刀鲚不同年份(2018、2019和2020年)养殖群体的遗传多样性,结果显示,2018、2019、2020养殖群体的平均观测杂合度(H_o     

美洲鲥1+龄亚成鱼池塘越冬生长特性

为完善美洲鲥池塘养殖技术,对美洲鲥1~+龄亚成鱼在池塘保温大棚条件下越冬的生长特性进行了研究。在上海市水产研究所奉贤科研基地开展了美洲鲥池塘保温大棚越冬养殖试验,放养密度为4 682尾/hm~2。试验结果:在水温11.2~20.6℃条件下,经150 d的越冬养殖,越冬成活率98.0%,美洲鲥体长增长26.6%,体质量增加96.2%,体质量与体长呈幂函数关系:W=0.012 3L~(3.076),R~2=0.922 8,接近于匀速生长,体长、体质量日均增长量随养殖天数的增加呈n形变化,肥满度在1.55~1.71,最大值出现在越冬养殖中期。结果表明:美洲鲥1~+亚成鱼的适宜越冬水温在12℃以上,最佳越冬水温在15℃以上。     

美洲鲥脑转录组多态性EST-SSR的规模化开发与利用

【目的】挖掘美洲鲥脑组织转录组数据中的EST-SSR，规模化开发多态性较好的EST-SSR，为美洲鲥种质资源评估提供分子标记。【方法】采集2龄美洲鲥雌雄个体（各3尾）的脑组织，提取其RNA，构建cDNA文库，进行高通量转录组测序。用MISA软件进行脑组织转录组EST-SSR挖掘和特征分析，利用SSRMMD软件规模化开发多态性EST-SSR。从获得的多态性位点中随机选取20对4核苷酸重复的EST-SSR设计引物，对24尾1龄美洲鲥进行遗传多样性评估，验证这些多态性EST-SSR的应用效果。【结果】从雌性美洲鲥脑组织转录组189 428个非冗余基因中鉴定到117 751个EST-SSR，从雄性美洲鲥脑组织转录组185 419个非冗余基因中鉴定到114 809个EST-SSR。美洲鲥雌雄个体脑组织转录组中不同类型微卫星的重复基序均具有不同的数量分布特征，其中2核苷酸重复基序数量最多，分别占EST-SSR总数的72.78%和73.60%，而单核苷酸、3核苷酸、4核苷酸、5核苷酸和6核苷酸重复的EST-SSR数量随着重复碱基数量的增加而呈逐级减少趋势；不同EST SSR重复类型的优势重复基序亦有所不同，单核苷酸重复、2核苷酸重复和3核苷酸重复基序的优势基序分别为A/T、AC/GT和AGG/CCT。从7 671个雌雄美洲鲥脑组织转录组共有EST-SSR中成功鉴定到1 726个多态性EST-SSR，其中鉴定自单核苷酸重复、2核苷酸重复、3核苷酸重复的多态性EST-SSR分别有705，827和116个。20个4核苷酸重复的EST-SSR中，有17个位点多态性较好，其检测1龄美洲鲥的观测杂合度（Ho）、期望杂合度（He）和多态信息含量（PIC）均值分别为0.498，0.620和0.561，表明本单位科研基地的美洲鲥养殖群体历经数年的人工养殖，仍然具有相对较高的遗传多样性。【结论】基于美洲鲥脑组织转录组数据规模化开发了多态性EST-SSR，这些位点可用于美洲鲥养殖群体的遗传多样性评估及分子标记辅助遗传育种。