SOE PCR重构SLA-Ⅰ复合体研究

利用剪接重叠延伸PCR(SOE PCR)技术,中间加一富含甘氨酸/丝氨酸的linker(G4S)3,将SLA-Ⅰ重链基因SLA-2和轻链基因β2m连接,形成复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m,然后将复合体基因链克隆入p2X表达质粒,导入受体菌TB1并进行表达。结果显示,利用SOE PCR技术成功得到了复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m,并且克隆入p2X载体。SDS-PAGE检测表明,复合体基因导入宿主菌后获得了融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m,大小为84.1 ku。试验结果为今后在体外进行相关基因重组表达提供参考。     

稳定转化家蚕BmN细胞表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

为了建立稳定转化家蚕细胞持续表达外源基因的技术体系,构建了基于piggyBac转座子的带有人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(hGM-CSF)和新霉素抗性基因(neo)表达元件的转基因载体pigA3GFP-IE-neo-FH-hGM-CSF-polyA-fib-L-intron1,以及带有hGM-CSF和吉欧霉素(zeocin)抗性基因的昆虫细胞转化载体pIZT-IE-hGM-CSF,分别转染家蚕卵巢BmN细胞,并以含相应抗生素G418或zeocin的培养液筛选,得到稳定的转化细胞系FH-hGM-CSF和IE-hGM-CSF。ELISA检测结果显示,hGM-CSF在FH-hGM-CSF和IE-hGM-CSF转化细胞系的表达水平分别为1.534 55 fg/个细胞和2.227 38 fg/个细胞。     

茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的影响

通过检测茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的浓度变化,探索茯苓主要成分茯苓酸对仔猪水肿病的疗效机制.将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱ e组、不同质量浓度茯苓酸处理组5个组,采用ELISA法测定了培养3,6,9,12 h细胞上清液中P-选凝素、sICAM-1及TNF-α浓度的变化.结果表明,不同质量浓度茯苓酸处理组对SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞过量分泌P-选凝素、TNF-α无明显的抑制作用;0 mg/L茯苓酸处理组对SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞sICAM-1的分泌具有明显的下调作用,使其分泌sICAM-1的浓度逐渐下降至正常水平.由此可见,茯苓酸通过抑制SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞sICAM-1的过量分泌,阻止白细胞与内皮细胞之间的牢固黏附,防止过度炎症反应对机体的损害,以达到治疗疾病的目的.茯苓酸保护大鼠肠黏膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量为10 mg/L.     

添加纤维素酶或甲酸对青贮菠萝茎叶饲用品质的影响

本试验旨在研究添加不同浓度的纤维素酶或甲酸青贮菠萝茎叶后对其饲用品质的影响。以菠萝茎叶作为研究材料,青贮处理方式分别为直接青贮（对照组）及添加0.1 g/kg纤维素酶、0.2 g/kg纤维素酶和3.0 g/kg甲酸、6.0 g/kg甲酸青贮,青贮45 d后进行营养成分、养分的瘤胃降解分析。结果表明,与对照组相比,2个纤维素酶处理组显著提高了单宁含量（P＜0.05）,其他成分含量均没有显著变化（P＞0.05）;3.0 g/kg甲酸处理组显著降低了氨态氮（NH₃-N）、钙和磷含量（P＜0.05）,显著提高了可溶性碳水化合物（WSC）含量（P＜0.05）;6.0 g/kg甲酸处理组显著提高了干物质（DM）、可溶性碳水化合物含量（P＜0.05）,显著降低了粗蛋白质（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）、中性洗涤纤维（NDF）、氨态氮、钙和磷含量（P＜0.05）;6.0 g/kg甲酸处理组显著提高了72 h内干物质的瘤胃降解率（P＜0.05）,而对72 h粗蛋白质降解率和中性洗涤纤维降解率无显著影响（P＞0.05）。综上所述,在本试验条件下,添加6.0 g/kg甲酸青贮菠萝茎叶效果最好,其次为直接青贮组。     

五指山小型猪DAZAP2 cDNA的克隆及其生物信息学分析

为了克隆五指山小型猪DAZ相关蛋白2(DAZAP2)cDNA全长并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法克隆得到DAZAP2全长cDNA序列,并运用生物信息学软件对其核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:五指山小型猪DAZAP2基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、苏门达腊猩猩、斑马鱼、非洲爪蟾、牛、褐家鼠等动物具有很高的相似性。DAZAP2 cDNA全长943 bp,5’非翻译区长69 bp,3’非翻译区长367 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸。该蛋白的分子质量为17 311 ku,等电点为7.48。     

草地划区轮牧饲养原则及设计

为了推进北方草地可持续集约放牧饲养管理,促进完善划区轮牧实验设计及目的,本文总结了放牧国际划区轮牧的10条原则:单位时间的产草量确定载畜率,拔节期指示春季放牧开始时间,开始恢复再生的时间决定放牧时间天数,放牧间隔日数决定放牧频次,计算确定区块数及区块面积,满足牲畜采食行为,充分利用饲草质量和营养,保证牲畜饮水充足,环境友好、易执行、可操作、有弹性。在此基础上,设计了1个划区轮牧实践参考方案,并论述了划区轮牧目标及管理评价标准,讨论了1条北方草地可持续集约养羊畜牧业的发展途径。     

遮荫胁迫下外源一氧化氮对高羊茅的生理调控作用

用外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)处理遮荫胁迫下的2个高羊茅(Festuca arundinacea)品种,探讨外源NO对遮荫胁迫下其叶绿素含量、膜透性、丙二醛(MDA)含量、抗氧化酶活性及脯氨酸(Pro)含量的影响.结果表明:外源NO可以显著提高遮荫胁迫下高羊茅叶片的叶绿素含量(P＜0.05),减弱质膜相对透性的增加,减缓膜质过氧化产物MDA含量的升高,促进Pro的积累,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性(P＜0.05).遮荫胁迫下高羊茅品种踏火二号的电解质渗透率、MDA含量、CAT活性和Pro含量的变化显著(P＜0.05),NO的作用效果     

鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定与药防研究

本研究从四川、重庆等地鸭传染性浆膜炎鸭群中分离出可疑致病菌株19株,经生化鉴定为鸭疫里默氏菌,血清型鉴定除1株属Ⅱ型外,其余均为Ⅰ型;通过协同药物敏感性测定,研制出新型复方制剂“鸭浆灵”,经控制试验与临床应用效果显著。     

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒（PRV）gG-/LacZ＋标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。     

蚯蚓粪对家禽粪便中主要产臭气微生物的影响

为了探讨蚯蚓粪减少臭气产生的机理,研究了蚯蚓粪的除臭作用及对家禽粪便中主要产臭气生物的影响.结果表明:与添加灭菌土或灭菌蚯蚓粪组相比,添加30%没有灭菌的蚯蚓粪能有效的减少鸡粪氨气和硫化氢的含量,并对产生臭味的大肠杆菌和变形杆菌有明显的抑制和杀灭作用.