牛病毒性腹泻活疫苗田间试验

在完成牛病毒性腹泻活疫苗实验室研究的基础上,于2011年试制了3批活疫苗,经检验合格后,分别在3个牛场、总计180头牛进行了田间试验。结果,在试验观察期内,未发生牛病毒性腹泻病感染,且无任何不良反应,3个牛场的试验组在生产性方面与非试验牛群均无显著差异;抗体检测结果表明,试验组每头牛均出现了较高水平的抗体应答,log2SN50在7.4以上。由此说明,研制出的牛病毒性腹泻活疫苗不但使用安全,而且免疫效果可靠。     

重组大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及对小鼠胚胎稳定性的影响

为研究大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）对小鼠胚胎稳定性的影响,运用大肠杆菌表达系统制备了具有生物活性的重组大肠杆菌LT,用重组LT通过腹腔注射处理妊娠小鼠,分析了LT对小鼠胚胎稳定性的影响。首先采用PCR方法从产毒大肠杆菌菌株44815基因组中扩增LT的A、B亚基基因,将其插入到pET-20b（＋）原核表达载体pelB信号肽的下游,分别构建成LTA和LTB分泌型表达载体;将载体分别转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,在IPTG的诱导下进行表达,利用Ni-NTA琼脂糖凝胶从细菌周质释放液中提取和纯化重组LTA和LTB蛋白;利用细胞毒性试验检测重组蛋白的生物活性。然后用制备的重组LT注射妊娠6d的小鼠,连续注射3d后,统计小鼠的胚胎存活率。同时用ELISA方法检测小鼠血清中与胚胎稳定性密切相关的Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）及IL-β的表达水平。结果表明,采用分泌性表达策略实现了重组LT在大肠杆菌中的高效分泌表达,LTA和LTB的表达量分别达68、62mg/L。表达的重组LT具有明显的细胞毒性作用;用LT处理妊娠小鼠,胚胎的存活率为32%,明显低于对照组;小鼠血清中Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的含量明显高于对照组（P〈0.01）,分别为对照组的2、3倍。同时细胞因子IL-1β为对照组的2倍（P〈0.01）,而稳定胚胎发育的Th2型细胞因子IL-4、IL-10没有明显变化（P〉0.05）。据此推测,LT可能与大肠杆菌性肠炎引起妊娠家畜流产有关,LT对胚胎稳定性的影响除与LT的直接毒性有关外,可能还与LT介导的免疫调节异常有关。     

维持性血液透析患者Palindrome导管晚期功能不良相关因素的Cox回归分析

目的探讨维持性血透(MHD)患者Palindrome导管晚期功能不良的相关因素。方法收集53例使用Palindrome导管的MHD患者临床资料,用Cox风险回归分析导管晚期功能不良的相关因素。结果单因素Cox回归分析显示原发病、置管部位、临时导管留置时间、低血压发生次数、红细胞压积、超滤率与导管晚期功能不良相关(P<0.01或0.05)。多因素Cox回归分析显示置管部位、红细胞压积、超滤率是导管晚期功能不良的独立影响因素(P<0.01或0.05),相对危险度分别为2.310、1.254、1.623。结论置管部位、红细胞压积、超滤率是MHD患者Palindrome导管晚期功能不良的独立影响因素。     

高产优质杂交籼稻新组合准两优893的选育与应用

准两优893是用两系不育系准S与恢复系R893配组育成的两系杂交水稻新组合,具有高产、稳产,米质优,适应范围广等特点,于2007年通过湖南省审定,2008年先后通过江西省审定和国家审定,2009年通过重庆市引种认定。介绍了该组合的选育经过、主要特征特性、栽培及制种技术要点。     

两面针水提物对酵母朊病毒作用研究

为研究两面针水提物的抗朊病毒作用,借助酵母朊病毒[PSI+]表型系统分析两面针水提物对[PSI+]表型的治疗作用,引入半变性琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白水平分析两面针水提物对酵母朊病毒的治疗效果.结果显示,两面针水提物浓度为125 mg/mL时,作用酵母朊病毒[PSI+]细胞5d的治愈率为90.2％；并且两面针水提物浓度在25 mg/mL～125 mg/mL范围内,药物剂量与酵母朊病毒[PSI+]表型治疗效果呈现较好正相关性.蛋白水平试验表明两面针水提物作用酵母朊病毒[PSI+]细胞5d后红色菌落的朊病毒聚集体大小与[psi-]相似.     

风景园林学科力量薄弱院校专业课程设置改革探索

风景园林学科力量薄弱院校与强势院校有诸多的差异,此类院校专业课程设置须在保持规范性的同时进行改革,以职业需求为导向,突出特色课程,减少理论课,增加实践课;增加休闲、游憩、旅游相关课程.根据我国园林事业发展趋势,不同的课程设置力度也应有所不同.     

茶树DNA的快速抽提法

使用简化改良的CTAB法抽提茶树(Camellia sinensis)鲜叶DNA,通过电泳和PCR检测所提取DNA的质量.实验结果表明,改良的CTAB法提取茶树DNA,步骤减少、抽提过程简单、时间短、效率高,用嫩叶和成熟叶均能抽提出高质量的DNA.     

山羊TNNT3基因可变剪切及其对骨骼肌细胞分化的作用

【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T（fast skeletal troponin T3,TNNT3）作为肌钙蛋白(troponin, Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因（NM_001314210.1）和牛TNNT3基因（XM_010821200）mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量（real-time PCR,RT-qPCR）及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织（背最长肌（longissimus dorsi muscle,LD）、半膜肌（semimembranosus muscle,SM）、心、肝、脾、肺、肾）和7个发育阶段（胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300）肌肉组织（背最长肌和半膜肌）中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cells,MuSCs）中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3（NM_001314210.1）CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因 5个新转录本（TNNT3_1—5）,其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其中在骨骼肌中高度富集(P < 0.01),心脏及肺次之,其余组织中较低;TNNT3 mRNA在背最长肌和半膜肌中的表达始终处于一个动态变化中,胚胎期TNNT3在半膜肌的表达量高于背最长肌（P<0.05）;出生后则背最长肌中高于半膜肌（P<0.05）。④山羊TNNT3基因转录本TNNT3_3重复出现保守的外显子9—11（138bp）,体外翻译实验显示其可编码蛋白且蛋白大小与预期基本相符（37 kD）;相较于对照组,在山羊MuSCs中过表达该转录本使肌分化标志基因Myomaker、MyoG和MyH4 mRNA极显著升高(P < 0.01)。【结论】获得了山羊TNNT3基因具有完整CDS区5个新可变剪切体,TNNT3主要在肌肉组织（背最长肌和半膜肌）中高表达,在哺乳动物中高度保守且促进成肌分化。初步表明TNNT3基因在动物肌肉生长发育中具有重要的生物学功能。     

不同品系欧洲报春的抗寒性研究

在不同低温处理下,分别对引进的3个品系欧洲报春叶片和花进行相对电导率及游离脯氨酸含量测定,分析其抗寒性的差异,结果表明:3个品系的欧洲报春花叶片伤害度、半致死温度和游离脯氨酸含量变化较为相符,其叶片和花的耐寒性强弱为:丹若娃的叶片>里拉的叶片>妃纯的叶片;妃纯的花>丹若娃的花>里拉的花,与其在露地栽培中观察到的结果相符。     

珍稀濒危树种云南蓝果树育苗技术研究

对云南蓝果树的种子采集处理、育苗试验和对苗木生长观测调查,初步研究了云南蓝果树的育苗技术、苗期生长规律。结果表明:云南蓝果树种子无休眼期,宜随采随播,播种1周后开始萌动,25 d出土,种子贮藏方式以混沙贮藏为好。培育的云南蓝果树容器苗210 d即可出圃造林,1 a生苗高和地径的生长节律呈现出"慢-快-慢"的生长过程,其幼苗的生长高峰为6月～7月,这期间应加强水肥管理,促进苗木生长。