家蚕微孢子虫丙酮酸激酶基因的克隆与表达特征分析

丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)在糖酵解最后一步起着不可逆的作用,可以催化磷酸烯醇式丙酮酸将高能磷酸基团转移给ADP生成ATP和丙酮酸。通过在NCBI和家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)数据库中对丙酮酸激酶基因的比对分析,选择家蚕微孢子虫丙酮酸激酶M2亚型的一个基因(NbPK-2,GenBank登录号EOB11679.1)进行克隆。生物信息学分析显示,该基因序列长度为1 359 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码452个氨基酸,预测蛋白质等电点为7.13,相对分子质量为51.7 kD,没有信号肽;NbPK-2蛋白的二级结构预测显示其含有38%的螺旋、21%的延伸片段和40%无规则卷曲。通过qRT-PCR检测感染微孢子虫后家蚕不同发育时期的NbPK-2表达水平,发现该基因在感染后24 h内处于相对较高的表达水平,而此后表达水平开始降低,至144 h达到最低值,在168 h又有所升高。研究结果可促进对家蚕微孢子虫糖酵解途径的研究,为家蚕微粒子病的防控奠定理论基础。     

多杀性巴氏杆菌中recN基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列(登录号:CP003313.1)设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a(+)-recN重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,试验成功克隆了大小约为1 677 bp的recN基因序列,通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94 ku,主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析,recN蛋白的分子式为C₂₇₃₅H₄₄₂₈N₇₈₆O₈₅₅S₁₆,消光系数为24 785,不稳定系数为43.99,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.62,为酸性蛋白;总平均亲水性为-0.316,与试验表达的包涵体蛋白性质相同,即同为疏水性蛋白;recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h,在酵母(体内)中的半衰期>20 h,在大肠杆菌(体内)中的半衰期>10 h;二级结构主要以α-螺旋(64.87%)及无规则卷曲(21.00%)为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。     

饲料霉变品质变化及其评价指标探讨

霉变是造成饲料和食品大量浪费的世界性危害．近年来，全球多发的自然灾害（如暴雨、洪涝灾害、干旱和霜冻），加上经济的全球化使谷物和饲料中霉菌和霉菌毒素的污染有加重的趋势。根据联合国粮农组织估算。全世界每年大约有5％～7％的粮食、饲料等农作物产品受霉菌污染．霉变所造成的粮食和饲料经济损失可达数千亿美元。我国一些地区，尤其是南方地区．饲料霉变问题相当严重。     

常见奶牛蹄病的防治

患蹄病的奶牛生产性能明显下降,严重者被淘汰,使高产奶牛过早夭亡,给奶牛业造成了严重的经济损失。牛的肢蹄病中９５％发生于奶牛;Ｇｒｅｅｎｏｕｇｈ曾报道欧洲奶牛肢蹄病发病率为５．５％,其中８８％是蹄病。１９８８年蹄病在北京某成乳牛群中的发病率高达３１．７...     

产肠毒素大肠杆菌K88诱导仔猪炎症反应的分子机制

为探讨产肠毒素大肠杆菌（ETEC） K88感染仔猪发生炎症反应的分子机制,试验用ETEC K88灌服断奶仔猪,ELISA法检测攻毒后仔猪血清中白细胞介素8（IL-8）含量,实时荧光定量PCR方法检测淋巴结中Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）及其信号通路相关基因（髓样分化因子88（MyD88）、Toll相互作用蛋白（Tollip）、B细胞淋巴瘤因子3（Bcl3））的mRNA相对表达水平。结果发现,仔猪攻毒ETEC K88后6和24 h血清IL-8含量和淋巴结TLR2/4的表达水平均极显著或显著高于对照组（P<0.01;P<0.05）,且感染后24 h显著低于感染后6 h（P<0.05）;仔猪感染ETEC K88后24 h淋巴结中MyD88、Tollip和Bcl3的表达水平均极显著高于对照组（P<0.01）,但是感染后6 h时与对照组相比均无显著差异（P>0.05）。综上所述,ETEC K88感染仔猪可能是通过TLR2/4-MyD88信号通路产生炎症因子IL-8,促使仔猪出现炎症反应,且该炎症反应可能受Tollip和Bcl3蛋白的调控而被减弱。     

新疆南疆地区部分集约化肉牛繁育场主要临床病症和生物安全调查

近年来,新疆南疆地区开始引进国外安格斯肉牛养殖。为了解该地区集约化安格斯肉牛繁育场的主要疫病流行现状和存在的生物安全问题,采用现场调查、问卷调查和实验室检测相结合的方式,对新疆喀什地区4个大中型集约化安格斯肉牛繁育场进行了调查。结果显示：4个牧场安格斯肉牛表现的临床症状主要是腹泻,其次是肺炎;导致犊牛腹泻的病毒性病原主要是牛冠状病毒（BCV）、牛诺如病毒（BNoV）,阳性检出率分别为19.93%、15.20%,导致肺炎的主要是牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛腺病毒3型（BAV-3）,阳性检出率分别为28.24%、14.12%。4个牧场在防疫设施设备建设、消毒制度落实、人流物流管控、规章制度建设以及饲养管理、鼠害蝇害防控和无害化处理等生物安全方面均存在不同程度的隐患。结果提示,南疆地区安格斯肉牛繁育场要加强BCV、BNoV、IBRV、BAV-3等病毒感染的防控,通过加强免疫,降低牛群腹泻和肺炎的发病率,通过严格生物安全控制,防止外部病原传入。本调查为南疆地区国外引进安格斯肉牛的动物疫病防控提供了依据。     

祁连山云杉林土壤溶磷细菌的分离及对白三叶的促生效应

为获得具有促进牧草白三叶(Trifolium repens L.)生长能力的优良溶磷细菌(Phosphate solubilizing bacteria, PSB)资源,本研究以祁连山青海云杉林(Picea crassifolia)根际土壤细菌为研究对象,采用平板定性与钼锑抗比色定量分析、系统进化分析和植物盆栽接种试验,探究了上述根际土壤所分离菌株的溶磷能力、分类地位和对白三叶生长的影响。结果表明：筛选得到的12株PSB菌株在难溶性无机磷(National botanical research institute phosphorus, NBRIP)平板上的溶磷圈直径/菌落直径的比值范围为1.44～2.40。12株PSB菌株均归属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。在上述基础上,选取的5株菌株在NBRIP液体培养基培养96 h后,发酵液的可溶性磷含量范围为387.41～479.87μg·mL^-1,其中菌株LT-4发酵液的可溶性磷含量最高。植物接种试验结果表明,与空白对照相比,接种菌株LT-4能显著提高白三叶的生物量,植株地上部和根干重分别显著增加87....     

过去的经验今天的财富

《饲料工业是个很大的行业》这本书，是一本纪念文集，纪念（１９８４～２０００年全国饲料工业发展纲要（试行草案）》（以下简称《纲要》）目标胜利实现。《纲要》是１９８４年１２月由国务院颁布实施的。本书编入的７６篇文章，都是有关饲料工业的，时间起自１９８５年，迄止２０００年底，大体描绘了饲料工业发展纲要的整个实施历程。 在《纲要》的指引下，我国饲料工业实现了一次惊人的腾飞。一座座新兴的饲料厂拔地而起，迅猛发展，到１９９１年，全国配合饲料的产量达到３４９４万吨，居世界第二位，一跃成为饲料生产大国。到１９９…     

4种蛋白酶制备水溶性蜂王浆

通过水溶性蛋白质的提取率,比较了4种蛋白酶制备水溶性蜂王浆的效果,结果显示,木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶的水溶性蛋白质提取率分别为14.10%、13.97%、24.91%、7.20%,酶解产物在热、酸、碱环境中具有较强的稳定性。采用中性蛋白酶制备水溶性蜂王浆明显优于其他3种酶,同时中性蛋白酶反应条件简易,可用于水溶性蜂王浆的生产。