奶牛妊娠早期血浆中微量胎儿DNA的提取与检测

妊娠奶牛外周血的血浆中存在的胎儿游离DNA片段,为进行早期奶牛胚胎的性别诊断提供了理论依据.本试验采集妊娠奶牛静脉血液,探索从血浆中提取胎儿游离DNA的无创伤性新方法,从而为妊娠奶牛早期胚胎的性别鉴定提供新的技术途径和方法.     

虫草素预防肥胖及通过ADORA1介导GH3细胞中泌乳素分泌研究

为了研究虫草素是否具有预防肥胖的作用及其可能机制,试验利用高脂饮食诱导肥胖型高脂血症大鼠动物模型,并给予高、中、低不同剂量（50、25、12.5 mg/（kg·d））的虫草素,连续灌胃35 d后观察大鼠体重、脂肪系数、血脂水平的变化;体外培养大鼠脑垂体瘤细胞（GH3）,通过CCK8、Western blotting、ELISA等方法检测虫草素对GH3细胞的增殖毒性,以及腺苷受体A₁（ADORA₁）的表达和对泌乳素分泌量的影响。体内试验结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠体重、脂肪系数和血脂水平（高密度脂蛋白（HDL）除外）均极显著升高（P<0.01）;虫草素高、中、低各剂量组均能极显著或显著降低大鼠体重、脂肪系数及总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平（P<0.01;P<0.05）,但HDL水平仅在虫草素高剂量组中显著升高（P<0.05）,而虫草素中、低剂量组均无显著变化（P>0.05）;体外试验结果显示,虫草素浓度低于25 μg/mL时对GH3细胞增殖无影响;虫草素能够诱导GH3细胞ADORA₁表达升高;虫草素和ADORA₁激动剂（R-PIA）单独作用能显著或极显著降低泌乳素的分泌量（P<0.05;P<0.01）,虫草素与ADORA₁抑制剂（DPCPX）联合作用时能够在一定程度上阻断虫草素对泌乳素的抑制作用。结果表明,虫草素具有预防肥胖和降血脂的作用,其可能的作用机制是通过诱导ADORA₁表达抑制泌乳素的分泌,该研究结果将为虫草素作为一种潜在的减肥降脂药物的开发提供一定依据。     

中药复方对人工感染雏鸡大肠埃希菌病及沙门菌病的防治效果观察

为验证中药复方对鸡大肠埃希菌病和沙门菌病的临床效果,对人工感染大肠埃希菌和沙门菌鸡进行防治试验,用O78、O1、O2型大肠埃希菌菌株和鸡白痢沙门菌株对试验组鸡进行人工感染后,分为中药复方高、中、低剂量组,抗生素和健康、阳性对照组。结果表明,中药复方防治两类疾病疗效可靠,效果明显,其中以高剂量组防治效果最好。对人工感染引起的鸡大肠埃希菌病和鸡白痢的保护率为92%,治愈率分别为82%和88%。     

贵州香猪内源氮与内源氨基酸代谢规律研究

选择3.5～4.0月龄、遗传来源相似、体重(12±2) kg的贵州从江香猪、剑白香猪去势公猪各6头,采用无氮饲粮(NFD)法和NFD+5%酶解酪蛋白(EHC)法进行代谢试验,测定贵州香猪内源氮与内源氨基酸的代谢规律,探索贵州香猪的维持蛋白质和氨基酸需要量.研究显示,贵州香猪内源氮排泄量为0.212 g/d W0.75,内源氨基酸排泄量为1.463 g/d W0.75.结果表明,贵州香猪可消化粗蛋白质维持需要量(DCPm)为1.91 g/d W0.75,可消化氨基酸维持需要量为2.10 g/d W0.75,以Lys为100建立贵州香猪维持需要可消化氨基酸模型为:Lys 100、Thr 54、Val 188、Met 40、Ile 79、Leu 126、Phe 101、His 25、Arg 58、Trp 17.     

线虫fat-1基因密码子优化设计

本研究旨在优化线虫fat-1基因,使其在牛肌肉组织中高效表达,为进一步生产fat-1转基因肉牛提供目的基因。试验在不改变fat-1基因编码氨基酸序列的基础上,参考了11个牛肌肉蛋白相关基因的密码子使用频率,对fat-1基因进行了密码子优化。结果发现,共改变了65个碱基,涉及65个密码子、7个氨基酸,约占fat-1基因总碱基数的5.38%,G+C含量从45.08%上升到50.04%,且分布均匀利于基因的表达。结构预测结果显示,该优化后的基因能够在牛肌肉中高效表达。     

诱导滞育的温度和光照节律对家蚕滞育激素基因Dh表达的影响

滞育激素(DH)是导致家蚕滞育生理现象出现的关键因素。研究卵期不同温度和光照节律引起家蚕滞育激素基因Dh表达的变化,探讨温度和光照对家蚕滞育调控的机制。催青期25℃持续光照(25LL)条件下,蚕卵中Dh基因mRNA高水平稳定转录;而在15℃持续黑暗(15DD)条件下,蚕卵中只有痕迹量Dh基因mRNA存在;25LL或者20℃、光照与黑暗12h交替(20LD)条件下,胚胎发育至单眼着色后(有效积温2160℃.h以后)Dh基因mRNA转录水平显著上调,与此时期胚胎对诱导滞育的温度和光照节律更加敏感一致。从催青期开始整个世代的保护温度和光照节律,呈现高温25℃显著上调整个胚后时期Dh基因mRNA转录水平,光照上调蛹期与蛾期Dh基因mRNA转录水平,且高温的作用强于光照。5龄第3天幼虫的基因芯片表达谱显示,Dh基因mRNA转录水平存在显著的性别与组织差异,雌蚕多个组织中的Dh基因mRNA转录水平都显著低于雄蚕,卵巢中的Dh基因mRNA只有痕迹量。亲代卵的催青温度与光照节律决定子代卵的滞育性,也影响到Dh基因mRNA的转录水平;但子代卵内Dh基因mRNA转录水平高低不是蚕卵滞育与否的关键。推测家蚕Dh基因表达的性别差异及在早期蚕卵中表达特征与滞育性不一致的现象,可能与Dh基因的前体多肽翻译产物剪切有关。     

多重PCR诊断猪细小病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒Ⅱ型方法的建立和应用

根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRV gB、PCV2 ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列.在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术.用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上.该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV和PCV2临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段.     

动物园部分动物舍内外环境中常见病原菌的调查

为了解动物园动物及其环境中常见病原菌的分布情况,采用菌落计数、细菌分离培养及动物致病性试验等方法,对南京市红山森林动物园的部分动物生存环境的空气、土壤、水共126份样品进行检测.结果表明,各种动物舍内菌落总数均大于舍外菌落总数.从126份样品中分离到16个菌种127个菌株,其中葡萄球菌有69株,占54.33%(69/127);肠杆菌有51株,占40.16%(51/127);链球菌有7株,占5.51%(7/127).通过动物试验得知,分离得到的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、臭鼻克雷伯氏菌、粘质沙雷氏菌、假结核耶氏菌、福氏志贺氏菌1-5型、聚团肠杆菌和血链球菌等8种致病性较强,松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌、解糖葡萄球菌和变异链球菌等4种致病性较弱,耳葡萄球菌、头葡萄球菌、施莱福葡萄球菌和唾液链球菌等无致病性.动物舍内外环境中葡萄球菌是主要污染菌.     

堆肥中高温纤维素降解菌的筛选和应用

选用PCS培养基和定期改变传代的方法,从高温堆肥样品中筛选出4组具有较强纤维素分解能力的混合菌群,从菌群的生长特性、纤维素酶活力和滤纸、水稻秸秆的降解能力等方面复筛出一组纤维素分解能力较强而稳定的混合菌群MixF-3。该混合菌群经72h能将滤纸完全崩解,崩解滤纸后的培养液pH值基本稳定在8.5左右。培养温度为55℃或65℃时有利于MixF-3复合菌群产生的纤维素酶活较快地达到最大值;55℃培养96h左右,培养液中最高酶活为91.05U/mL,培养7d对水稻秸秆的降解率为46.5%。将复合菌群MixF-3接种到猪粪和牛粪自然堆肥中,发现其能促进肥料快速升温,48h内超过65℃,加速了原料的快速腐熟,为进一步研究开发堆肥快速腐熟菌剂奠定了基础。     

鲁西南地区青山羊种质资源调查与分析

济宁青山羊是中国著名的裘用地方山羊品种,作者分析了青山羊的选育历史、体型外貌、生产性能等种质特性,同时对青山羊种质资源的保护和利用提出了建议。