犬弓首蛔虫雄虫cDNA文库构建及EST分析

为构建T.canis雄虫cDNA文库,采用Trizol法提取T.canis雄虫的总RNA,合成cDNA,连接到λTripEx2载体上,通过包装蛋白对连接产物的包装,接种到大肠杆菌XL-1-Blue中进行原始文库和扩增文库的滴度测定.经质量鉴定表明:初始文库的滴度为5.25×106 pfu·mL-1,扩增后文库的滴度为6.90×109 pfu ·mL-1.文库的插入片段大小在500～2 000 bp,平均片段大小为1 000 bp,重组率为99.47％.所有指标均显示已成功构建了T.canis雄虫的cDNA文库.利用该文库获得了189条5'有效表达序列标签(EST).对ESTs拼接后代表了101个Unigenes,含有27个Contigs和74个Singletons.其Unigenes在GenBank中的序列号为HO348195～HO348295.同源性分析检索到有56个Unigenes与已知基因同源,其中具有已知或推测功能的基因有40个,未知功能基因有16个,未比对上的基因45个.未比对上的基因与NR数据库中的蛋白序列没有任何意义的匹配,为研究中发现的新基因.这些结果为进一步开展犬弓首蛔虫功能基因及分子机制研究奠定了基础.     

持续风沙流胁迫对黑果枸杞叶片生理特性的影响

以民勤和永靖种源3龄黑果枸杞(Lycium ruthenicum)盆栽实生苗为试验材料,采用风洞模拟试验,在9 m·s^-1风速下每天1 h,持续4 d进行风沙流胁迫,记录胁迫过程中叶片形态变化,测定第4 d和第11 d叶片生理指标,以期探究民勤、永靖黑果枸杞对持续风沙流胁迫的生理响应机制。结果表明：持续风沙流胁迫后黑果枸杞叶片受损,出现褐色斑块,萎蔫,第11 d膜透性增大;与对照相比,胁迫后民勤叶片过氧化氢酶(Catalase, CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性及脯氨酸(Proline, Pro)含量增加,丙二醛(Malonaldehyde, MDA)含量在第11 d显著下降;永靖叶片CAT、过氧化物酶(Peroxidase, POD)活性,MDA含量增加,PSⅡ最大光化学效率(F_v/F_m)在第4 d显著下降。二者其余荧光参数变化不一。研究结果可为风沙地区黑果枸杞种植选育提供一定的理论依据。     

Research Progress of Effect of Oxidative Stress on Broiler and its Mitigation Technology

Oxidative stress is ubiquitous in livestock and poultry production.When the body is in the situation of harmful stimulation in vitro or in vivo,the oxidation system and antioxidant system are in a state of imbalance,leading to metabolic disorders,which depresses the growth and development of animals,decreases disease resistance and quality of livestock products seriously,and has a negative impact on the production and health of livestock and poultry.So it is important to find an effective measure to alleviate the health of livestock and poultry.Lipoic acid,tea polyphenol,VE and other antioxidants play significant roles in reducing oxidative stress.In this paper,the effects of oxidative stress on broiler and mitigation technology research were outlined.     

猪miR-206前体的克隆、表达及生物信息学分析

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体（Precursor）,对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行了分析。RT-PCR结果显示,该前体miRNA在猪大多数组织中均有表达,在骨骼肌中表达量最高。生物信息学分析表明miR-206前体序列在不同物种间具有较高的保守性。     

牡荆总黄酮提取工艺优化及其对产气荚膜梭菌抑菌活性研究

【目的】 探究牡荆总黄酮的提取工艺,并探讨牡荆提取物对产气荚膜梭菌的抑菌活性。【方法】 以芦丁作为对照品,采用分光光度法对牡荆中的总黄酮含量进行测定;以总黄酮含量为考察指标,先通过单因素试验研究乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比4个单因素对牡荆总黄酮提取量的影响,确定单因素情况下最佳工艺的水平范围;在单因素试验基础上,通过设计L9（3⁴）正交试验,利用NaNO₂-AL （NO₃）₃-NaOH显色法对牡荆总黄酮含量进行测定,绘制标准曲线,计算回归方程,通过精密度、稳定性、重复性、加样回收率进行方法学考察,验证标准曲线。通过将试验所得数据代入标准曲线,比较得出牡荆总黄酮的最佳制备工艺,并在此基础上通过微量二倍稀释法考察其提取物对产气荚膜梭菌的抗菌活性。【结果】 牡荆总黄酮最佳提取工艺条件为：乙醇浓度60%、提取温度50 ℃、提取时间2.5 h、料液比1：35。在此最优提取条件下,牡荆总黄酮含量最高（43.17 mg/g）。其因素影响顺序为料液比>提取时间>乙醇浓度>提取温度,料液比对牡荆总黄酮含量影响最大。最佳工艺下的牡荆提取物对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度（MIC）值为7.81 μg/mL。【结论】 在乙醇浓度60%、提取温度50 ℃、提取时间2.5 h、料液比1：35的条件下提取的牡荆总黄酮含量最高,所制备提取物对产气荚膜梭菌具有较强的抑菌作用,为生产高质量的牡荆提取物提供了理论依据。     

不同生育期和不同品种苜蓿的果胶含量及与其他营养素的相互关系

采用4×5两因子设计,研究了不同生育期(营养期、孕蕾期、开花初期和开花盛期)和不同品种(陇东、新疆大叶、L 173、Derby和Super 7)苜蓿中的果胶含量及与干物质、有机物质、粗蛋白、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸性洗涤木质素、钙和磷等的相互关系。结果表明,1)随着生育期的推移,苜蓿中果胶的含量逐渐降低,营养期、孕蕾期、开花初期和开花盛期5个品种的平均(干物质基础)果胶含量分别为11.2%,9.23%,9.07%和8.28%;2)苜蓿中果胶含量与其他各养分含量间存在显著相关关系,其中与粗蛋白质(r=0.952,P=0.048)呈显著正相关关系;与有机物质(r=-0.961,P=0.039)呈显著负相关关系;3)不同品种苜蓿间果胶及其他各养分含量(4个生育期平均,干物质基础,下同)存在显著差异,Super 7的果胶含量显著高于L 173(P<0.05);陇东苜蓿的粗蛋白含量显著高于新疆大叶、Super 7和L 173(P<0.05);Derby的粗纤维含量显著高于Super 7(P<0.01)、L 173(P<0.05)和新疆大叶(P<0.05),中性洗涤纤维含量显著高于Super 7(P<0.05);而Super 7的酸性洗涤纤维含量显著低于其他4个品种(P<0.05);Super 7的钙含量高于其他4个品种(P<0.05);品种间磷含量无显著差异(P>0.05)。     

太行鸡Mx基因抗性位点与体尺和胴体性状的关联分析

采用错配PCR-RFLP对太行鸡Mx基因2032位点多态性进行检测,结果发现太行鸡Mx基因2032位点经RsaⅠ酶切后,检测到AA、AG和GG3种基因型,基因型频率分别为0.185,0.577和0.238,抗性基因A的频率为0.473。χ2适合性检验表明该多态位点上等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。对3个基因型与太行鸡一些经济性状间的关联性分析,结果表明,发现除胸深、胫围和胫长外,AA基因型个体其他体尺小于或接近AG和GG基因型个体;抗性纯合子AA基因型个体胴体性状均显著小于GG基因型个体。     

16S~23SrRNA基因序列在细菌鉴定中的应用

近些年围绕16S~23S rRNA基因间隔区发展起来的分子生物学技术为细菌多样性的研究开辟了新的途径,使得人们在细菌多样性的研究中得以摆脱传统分离培养的束缚,进而使分析方法得以长足拓展,并为指导实践提供可靠的理论依据,作者就16S~23S rRNA基因间隔区序列的特点、应用及发展前景作一简述。     

猪流行性腹泻病毒ORF3和M基因的克隆与序列分析

为了解福建省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株ORF3和M基因变异情况,本研究从4个不同规模猪场发生仔猪“顽固性腹泻”疾病的病料中扩增到4株PEDV的ORF3和M基因,并进行了序列分析.结果表明:4株PEDV ORF3基因均含有675个碱基,编码224个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为89.7％～100.0％,氨基酸的同源性为94.7％～99.6％,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与CV777 truncated毒株最低,仅为89.7％,FJNP毒株核苷酸的同源性与中国北方流行的CH ZKFG 11毒株最高,达100.0％.M基因含有681个碱基,编码226个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为94.8％～100.0％,氨基酸的同源性为94.8％～99.6％,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与日本D89752毒株最低,仅为94.8％,FJNP毒株核苷酸的同源性与韩国CPF193、泰国毒株最高,达100.0％.4株PEDV毒株均与国内外流行强毒株的亲缘关系较近,与attenuate DR13弱毒株的亲缘关系较远.     

伪狂犬病毒Sa株gI-/gE-/YFP+基因缺失载体构建及突变株筛选

根据伪狂犬病病毒SA株的gI和gE基因序列,设计两对引物,缺失掉gE基因5’端738bp,在克隆测序的基础上,采用酶切方法构建了含部分gE基因的转移载体pBgIE,同时将pBLYFP载体上含CMV启动子、多克隆位点、黄色荧光蛋白(YFP)基因和polyA尾巴的表达盒双酶切后插入到缺失位置,构建转移载体,命名为pBgIE-YFP,为下一步开发以伪狂犬病病毒为载体的基因工程疫苗提供了基础。