Preparation of gfp-bcl-XL-contained recombinant adenovirus vector by the homologous recombination in bacteria

AIM: To prepare gfp-bcl-X_L-contained recombinant adenovirus(rAd-gfp-bcl-X_L).METHODS: Bcl-X_L gene was amplified from pEGFP-C₃-bcl-X_L, subcloned into shuttle plasmid and formed transfer plasmid of pAdTrack-CMV-bcl-X_L. Then pAdTrack-CMV-bcl-X_L was linealinzed with PmeI and co-transformed into BJ5183 bacteria with adenovirus genomic plasmid of pAdEasy-1. The identified recombinant adenovirus plasmid was digested with PacI and transfected into 293 cells to package recombinant adenovirus particles. The target gene was detected by PCR.RESULTS: There were about 35% positive recombinant bacterial clones after the co-transformation of pAdTrack-CMV-bcl-X_L and pAdEasy-1 into BJ5183. Recombinant adenovirus particle were produced and further amplified after the transfection of pAdEasy-1-gfp-bcl-X_L into 293 cells. PCR test indicated that the recombinant Ad contained bcl-X_L gene. The titer of the purified rAd-gfp-bcl-X_L was 6.5×10¹² PFU/L. CONCLUSIONS: The homologous recombination in bacteria is a convenient and high efficient method to prepare rAd-gfp-bcl-X_L. This affords a good gene transfer vector for the gene therapy in human’s diseases.     

刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化

以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。     

食用菌复合保水颗粒菌种生产工艺及其应用研究

运用微生物发酵技术，配合新型合成材料，研制出食用菌复合保水颗粒菌种。这类菌种可保持活力60d。这一工艺可用于糙皮侧耳、金针菇、灵芝、白灵菇、杏鲍菇、鸡腿蘑和鲍鱼菇等多种食用菌苗种的制作。栽培试验证明，此类菌种的菌丝生长速度、现蕾时间、生物学效率与常用的棉籽壳菌种相似。     

丝兰属植物提取物降低鸡舍氨气浓度的效果试验

通过在21日龄的肉用仔鸡饲料中添加丝兰属植物提取物(其有效成分为丝兰皂角苷)，研究丝兰属植物提取物对降低鸡舍中氨气浓度和提高肉仔鸡生产性能的效果。试验结果表明，试验组鸡舍内氨气平均浓度为4．75mg／L，对照组鸡舍内氨气平均浓度为13．80mgl／L，试验组比对照组鸡舍内氨气平均浓度降低了9．05mg／L，经t检验，两鸡舍内氨气平均浓度差异显著(P＜0．05)，并且试验组比对照组饲料报酬提高了8.92％。     

百合组培中鳞片处理及其颜色变化与鳞茎形成的关系

 研究了百合鳞片发育程度、切割段数、形态及生理变化、培养基的P 和K含量与鳞茎形成的关系。结果表明: 取中层鳞片、每片横切6 段的繁殖系数最高, 基部鳞片结鳞茎数最多, 且鳞茎发生最早。鳞片由基部向顶部繁殖系数递减。培养过程中鳞片颜色和形态变化依次为乳白色、浅黄、浅紫色、绿紫、鳞片干枯、鳞茎增大, 鳞片由浅黄变为绿紫色过程中叶绿素含量增加, 淀粉和可溶性糖含量下降。适当增加培养基中P、K的含量可提高鳞茎形成的数量和质量。     

BsC3-41杀蚊幼制剂对蚊幼虫毒杀效果研究

通过以BsC3- 41杀蚊幼制剂对 3种蚊幼虫进行生物活性测定和野外灭蚊试验 ,结果表明 :该制剂对致乏库蚊CulexfatigansWiedemann的毒杀效果最好、对中华按蚊AnophelessinensisWiedemann次之、对白纹伊蚊AedesalbopictusSkuse的效果较差 ,2 4小时LC50值分别为 0 2 0 2 5 μg/ml、 2 5 363μg/ml和 5 9 730 2 μg/ml。野外水体灭蚊使用 3ml/m2 的浓度防治淡色库蚊效果可达 98 88%～ 1 0 0 0 0 % ,使用 1 0ml/m2 的浓度防治中华按蚊效果可达96 81 %～ 1 0 0 0 0 % ,使用 2 0 0ml/m2 的浓度防治白纹伊蚊效果达到 90 64%以上。     

透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠杆菌中的高效表达

利用PCR技术将透明颠菌血红蛋白基因（vgb）克隆到融合表达载体pET28a，在大肠杆菌BL21（DE3）表达。重组蛋白在30℃诱导获得可溶表达。利用Ni^2＋亲和层析对重组蛋白进行了纯化，得到重组的透明颠菌血红蛋白，蛋白呈红色。实验现象显示重组蛋白与血红索相结合。紫外光区和可见光区波长扫描分析显示：蛋白粗提物和纯化后的血红蛋白在230nm和413nm都有强吸收峰，初步表明，尽管重组蛋白比天然蛋白多36个氨基酸，重组蛋白仍然具有生理活性。诱导后4h和6h的培养液氨基乙酰丙酸含量分别达到17mg／L和21mg／L。说明重组蛋白的表达明显促进了体内heme合成途径。     

Branched‐chain amino acid ratios in low‐protein diets regulate the free amino acid profile and the expression of hepatic fatty acid metabolism‐related genes in growing pigs

Liver metabolism is affected by nutrients. The aim of this study was to explore the effects of low‐protein diets (17% crude protein, CP) supplemented with branched‐chain amino acids (BCAAs), including leucine (Leu), isoleucine (Ile) and valine (Val), on hepatic amino acid profile and lipid metabolism in growing pigs. The ratio of Leu : Ile : Val in all groups was 1 : 0.51 : 0.63 (20% crude protein, CP), 1 : 1 : 1 (17% CP), 1 : 0.75 : 0.75 (17% CP), 1 : 0.51 : 0.63 (17% CP) and 1 : 0.25 : 0.25 (17% CP) respectively. Results revealed that compared to the positive control group (1 : 0.51 : 0.63, 20% CP), the low‐protein diets significantly augmented the concentrations of most essential amino acids and non‐essential amino acids (p < .05), with the greatest values observed in the 1 : 0.25 : 0.25 group. Moreover, relative to the control, the low‐protein diets with the Leu : Ile : Val ratio ranging from 1 : 0.75 : 0.75 to 1 : 0.25 : 0.25 markedly downregulated the mRNA abundance of acetyl‐CoA carboxylase (ACC), lipoprotein lipase (LPL) and fatty acid‐binding protein 4 (FABP‐4) (p < .05), and upregulated the mRNA expression of hormone‐sensitive lipase (HSL), peroxisome proliferator‐activated receptor‐g coactivator‐1α (PGC‐1α), uncoupling protein 3 (UCP3) and liver carnitine palmitoyltransferase 1 (L‐CPT‐1) (p < .05). Therefore, our data suggest that protein‐restricted diets supplemented with optimal BCAA ratio, that is, 1 : 0.75 : 0.75–1 : 0.25 : 0.25, induce a shift from fatty acid synthesis to fatty acid oxidation in the liver of growing pigs. These effects may be associated with increased mitochondrial biogenesis.     

美国动物卫生保护制度框架浅析

基于对美国《动物卫生保护法》的研究,本文概述了其立法宗旨,动物疫病预防、突发疫情应急处置、国内流行病控制消灭等制度框架,以及生产经营者主体责任、调运监管制度、动物卫生实验室体系、兽医认证计划、监督执法制度、经费预算方式等保障措施,以期为完善我国立法体系提供借鉴。     

欧盟国家非洲猪瘟流行情况及对我国防控工作的启示

非洲猪瘟(ASF)1957年首次扩散到欧洲,2014年再次从高加索地区传入,并迅速在波罗的海周边国家蔓延,至2018年4月已扩散至欧盟8个成员国,且逐渐呈现地方性流行态势。本文重点介绍了欧洲国家的ASF扩散史,综述了病毒在欧盟国家扩散的主要途径,梳理了欧盟的ASF防控法规和措施,并对我国ASF防控提出了建议,以期为ASF防控提供帮助。