表达猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株核衣壳蛋白重组鸡痘病毒的构建

从含有猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳蛋白（N）的质粒扩增出N基因，构建禽痘病毒转移载体。该载体含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2控制之下的PRRSVN基因、P11启动下的报告基因lacZ以及用于同源重组的禽痘病毒基因组的片段。在转移载体转染亲本病毒S—FPV-017感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）之后，采用蓝色表型筛选的方法，筛选到表达N基因的重组病毒，并对其进行了6轮蚀斑纯化。PCR方法鉴定证明重组病毒的基因组中含有完整PRRSVN基因，间接免疫荧光试验证明了PRRSVN蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得表达，本研究为猪繁殖与呼吸综合征非复制型疫苗的研制打下了基础。     

猪链球菌2型溶血素基因缺失株构建及其生物学特性分析

猪链球菌溶血素(SLY)是较早确定的猪链球菌毒力因子之一,具有细胞毒性,在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。利用同源重组技术成功构建了猪链球菌2型(SS2)sly基因缺失的突变株SS2-Δsly,缺失株的体外溶血活性消失,对小鼠脑血管内皮细胞的细胞毒性显著低于亲本菌株(P<0.01),但不影响猪链球菌2型在巨噬细胞中的存活。该菌株可以用于研究SS2溶血素在感染细胞中的作用机制。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株的基因序列,设计U1和U6两套PCR引物和荧光探针,建立了扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR用于检测美洲型PRRSV。用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟（HCV）、猪伪狂犬（PRV）等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR可用于检测PRRSV,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,而与HCV等非PRRSV无交叉反应。本研究所建立的荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于PRRSV样品的检测。     

橙皮素对金黄葡萄球菌α-溶血素表达的抑制作用

α-溶血素在金黄葡萄球菌的致病过程中发挥着不可或缺的作用。本研究采用最小抑茵浓度测定、茵液上清溶血活性以及α-溶血素含量测定、荧光定量PCR及细胞毒性的测定等相关试验验证了橙皮素对金黄葡萄球菌α-溶血素表达的影响。结果显示,无抗茵活性的橙皮素在较低质量浓度下即可抑制金黄葡萄球菌α-溶血素的表达及其编码基因的转录,是-种潜在的以毒力因子为靶标的前导化合物,并可进一步开发用于抗金黄葡萄球茵感染。     

猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定

为了解猪链球菌2型（SS2）菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子（EF）抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128～1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104～1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。     

辽河三角洲湿地生态旅游资源评价与开发

生态旅游以其独特内涵吸引了众多游客,成为现在主要的旅游活动形式之一。辽河三角洲拥有丰富的湿地生态旅游资源,文章在分析辽河三角洲湿地生态旅游资源特征的基础上,结合辽河三角洲生态旅游开发现有问题,对辽河三角洲开展湿地生态旅游的前景作了分析,提出了开展湿地生态旅游的对策。     

我国电子商务运作中的问题及其对策的探讨

随着全球信息网络系统的建立和完善,我国许多传统企业和新兴电子商务企业积极从事电子商务活动,使我国电子商务迅速发展.本文结合我国开展电子商务活动存在的问题,提出相应的对策.     

隐性乳房炎试验(CMT)及防治方案

[目的]为找出陕西地区奶牛隐型乳房炎的临界点。[方法]采用生产上常用的乳房炎诊断方法,通过间接测定乳中体细胞数来诊断乳房炎的发生。[结果]找出体细胞数在47.46万以上时才依次表现出弱阳性、阳性、强阳性的特征。[结论]从而依据以上结果制定出两种方案用于预防和治疗乳房炎的发生。     

猪瘟病毒C株检测用国家核酸标准物质的研制

为研制均匀、稳定的猪瘟病毒（CSFV）核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为（5.1±0.7）×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。     

Harpin蛋白的研究进展

由植物革兰氏阴性病原菌编码产生的harpin蛋白是激发植物过敏反应的主要因子，具有显著的诱导植物抗性和促进生长发育等多种生物学效应，同时也是研究植物抗病信号传导的理想模型。基于对harpin蛋白的深入研究，国外已开发出新型、高效、安全的生物农药。本文综述了近年来harpin蛋白的研究进展。