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为进一步了解乙型脑炎病毒(JEV)减毒疫苗株基因组变异和分子遗传特性,本研究根据已发表的JEV基因组序列,设计合成了8对引物,应用RT-PCR对SA14-14-2-B3株基因组进行了克隆和序列测定,获得了该株病毒的全基因组序列(10977nt)并推导出其编码的氨基酸序列(3432aa)。序列分析表明:SA14-14-2-B3株与疫苗株SA14-14-2和SA(A)及野毒株SA14的核苷酸和氨基酸相似性较高,分别为99.8%、99.9%、99.4%和99.7%、99.8%、99.1%,与猪源分离株HEN0701和KV1899的核苷酸与氨基酸相似性较低,分别为88.5%、88.5%和97.6%、96.6%,比较显示在SA14-14-2-B3株基因组第10700nt处有一碱基"G"的插入。以全基因组为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明:SA14-14-2-B3株与SA14源病毒株SA14、SA14-14-2、SA(A)、SA(V)及分离株Beijing-1、p3、WHe和HW的遗传关系较近,与XJP613株和HEN0701株的遗传关系较远。以E基因为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明SA14-14-2-B3株属于JEV基因Ⅲ型。 相似文献
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兔病毒性出血症是由兔病毒性出血症病毒引起的兔的一种烈性、毁灭性传染病。目前该病在世界范围内流行,给养兔业带来了巨大的经济损失。随着分子生物学与现代免疫学技术的日臻进步,兔病毒性出血症的各种检测方法不断改进完善。本文就近年来针对兔病毒性出血症的病毒分离、血凝和血凝抑制试验、RT-PCR、荧光定量RT-PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术等诊断方法的最新研究进展以及各种检测方法的优缺点进行全面论述,旨在为不同实验室寻找和建立适合自己的检测方法,及发展新型的检测方法提供参考,为兔瘟的诊断与防控提供合理的科学依据。 相似文献
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用传染性支气管炎病毒(IBV)M41株毒种接种11日龄鸡胚,收获感染鸡胚病毒液,将新鲜的病毒液用小型盒式超滤浓缩系统浓缩,然后用高速离心机离心,去上清,沉淀用原病毒液体积1/100的HA缓冲液悬浮,制备出100倍浓缩的IBV病毒液;将100倍浓缩的IBV病毒液中加入15%^20%的A型魏氏梭菌滤液,充分混匀,放37℃恒温振荡器感作2h,取出置2-8℃条件下48 h.制备出了5批IBV M41株HI杭原.检验结果显示:5批HI抗原的性状均为白色混浊液体,底部有少量沉淀;无菌检验为阴性,HA效价为1:128~1:512,5批杭原与IB阳性血清呈阳性反应,HI效价为81og2,而与阴性血清、新城疫阳性血清、H9亚型禽流感阳性血清、H5亚型禽流感阳性血清及产蛋下降综合征阳性血清呈阴性反应,HI效价低于21og2.各项检验结果均符合要求. 相似文献
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采用药物浓度递增法,以0.07mg/L地克珠利为起始诱导浓度连续传代,以最适抗球虫指数(POAA)、病变记分减少率(RLS)和相对卵囊产量(ROP)3项指标综合判定抗药性。经12次传代,该诱导虫株对1.5mg/L地克珠利具有完全抵抗力。试验结果表明,用实验室方法诱导柔嫩艾美耳球虫抗药株完全可行。 相似文献
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采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。 相似文献