2020年养猪科技新技术盘点

"物极必反,困则思变",非洲猪瘟和新冠疫情没有让养猪行业止步不前,反而促使人们去尽最大努力探索养猪科技新技术.无抗替代技术、发酵混合饲料技术、区块链+畜产品溯源技术和生猪期货合约上市等承压前行,在不平凡的2020年交上了不俗的答卷.     

抗菌肽M50基因在Bac-To-Bac杆状病毒系统中的表达

将镰形扇头蜱体内的抗菌肽M50全长基因,克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-M50,并将其转化DH10Bac细胞后,得到重组穿梭质粒reBacmid-M50,再转染到sf9昆虫细胞,进行M50重组蛋白的表达,用Western blot和间接免疫荧光等方法对表达的蛋白进行鉴定。结果表明M50基因在Bac-To-Bac杆状病毒系统中成功表达。带His标签的重组蛋白分子量约为15 kDa,在昆虫细胞中表达的M50蛋白能被抗原核表达的M50蛋白的血清识别,也能被标签His单抗识别。     

饲料与动物产品中牛、羊源性成分的多重PCR检测

以鱼粉、奶粉、牛奶、果乳、鱼油及牛油为试验材料,进行了18S rDNA片段、牛源性成分和羊源性成分之间的多重PCR检测。多重PCR检测结果与单一PCR检测结果完全一致。结果表明,多重PCR方法用于进出口饲料及动物产品中牛、羊源性成分的同时检测是可行的。     

Application of non-structural protein ELISA kits in nationwide FMD surveillance in pigs to demonstrate virus circulation in Taiwan

Large scale surveillance of FMD non-structural protein (NSP) antibody in pigs was conducted to monitor for FMD virus circulation in Taiwan using Ceditest and UBI NSP ELISA kits after recurrence of FMD in 2009. A total of 53,759 serum samples were collected from pigs in the auction markets in 2009. There were 43 farms with positive FMD NSP reactors to both NSP ELISA tests in the nationwide surveillance. After tracing back, clinical examination and the NSP ELISA testing using both Ceditest and UBI on 14 follow-up serum samples from all the herds with confirmed NSP reactors in 2009, there were 4 farms classified as positive on follow-up testing criteria. In this surveillance, we have demonstrated that the NSP ELISA tests of outbreak farms followed by clinical and serological investigation could be used to detect FMD circulation in the pig population in Taiwan even while the national compulsory vaccination program is ongoing.     

猴源环孢子虫巢式PCR检测方法的建立

环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫。为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测。结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法(饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法)提高2.3%~3.4%。可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。     

监测口蹄疫抗体的液相阻断ELISA法的改进和体会

液相阻断ELISA（LBE）法由于具有高度的敏感性、特异性和重复性,目前被广泛应用于动物免疫抗体效果监测实践工作中,特别是为防控牛、羊亚洲I型口蹄疫（FMD）做出了积极的贡献。但该方法操作繁琐,稍有不慎就会导致实验结果发生偏差或试验失败,笔者就该方法应用于亚I型口蹄疫抗体检测中的改进和体会作一总结。     

H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立

通过RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒HA基因一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计了用于FQ-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增,并制作标准曲线,建立了检测H3亚型猪流感的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为13.68,18.21和20.57;变异系数分别为0.31%、0.17%和0.12%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度.     

活猪携带猪瘟病毒检测方法比较

对2个猪场的母猪血清、扁桃体、全血样品和公猪精液分别应用荧光抗体染色法、RT-PCR、CS-FV抗原ELISA、CSFV糖蛋白Erns ELISA 4种方法进行CSFV对应检测和比较。结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,但与其他3种方法存在较大差异,RT-PCR方法检出率和重复性次之;猪瘟抗原ELISA方法检出率第3,重复性第1;CSFV糖蛋白Erns检出率和重复性均最低,但可筛选是否感染猪瘟病毒野毒。在母猪3种样品中扁桃体的检出率最高,全血样品次之,血清检出率最低。4种样品中公猪精液重复性最好,其次是母猪全血样品,母猪扁桃体第3;母猪血清样品最差。     

环境高温对两品种肉鸡生长、胴体性状及脂肪沉积的影响

选择体重相近、健康的5周龄AA肉鸡公鸡和北京油鸡公鸡各108只,评价持续高温对其生产性能、胴体组成、脂肪沉积的影响,比较其对高温耐受性的差异。试验设3个处理：34℃持续高温,自由采食（试验组,34AL）;21℃适温,自由采食（适温对照组,21AL）;21℃适温,采食量与34AL组相同（采食配对组,21PF）。所有仔鸡在人工环控舱饲养至8周龄试验结束。结果表明：AA肉鸡在持续高温下的采食量比适温对照组降低45%（P〈0.001）,日增重由61.45 g/d降至22.29 g/d（P〈0.001）,饲料利用率明显降低（P〈0.05）。对北京油鸡而言,热暴露虽然也使采食量大幅下降（下降幅度为20%,P〈0.001）,但日增重却没有受到高温的影响,饲料利用率明显提高（P〈0.05）。北京油鸡在试验期间无一死亡,而高温处理的AA肉鸡死亡率高达36%。与适温对照组相比,高温试验组AA肉鸡的胸肌率明显下降（P〈0.05）,肌间脂肪和皮下脂肪的沉积率明显降低（P〈0.01）,腹脂沉积率无明显变化（P〉0.05）。北京油鸡胸肌率未受到高温的影响,但热暴露北京油鸡腹脂沉积率明显高于适温对照组（P〈0.05）,肌间脂肪和皮下脂肪的沉积相对稳定（P〉0.05）。研究表明,北京油鸡对高温表现出极高的耐受性,在持续34℃高温下正常的生长、发育没有受到影响;AA肉鸡在持续34℃高温下,正常的生长、发育被极大程度地破坏,死亡率高。北京油鸡适应高温的调节机制可能与其在高温下腹脂沉积增加及饲料利用率提高有关。     

日粮蛋白质水平对多阶段周龄饲养肉鸡生产性能、胴体组成及氮排出的影响

试验选用768只1日龄肉公鸡,随机将其分为6个处理,每个处理8个重复。依据理想赖氨酸:蛋氨酸比例及赖氨酸需要量回归方程,研究每周赖氨酸需要量分别增加5%、10%以及降低5%、10%、15%后,日粮中不同蛋白质水平对肉鸡生产性能、胴体组成及氮排出的影响。试验结果表明:①氨基酸-蛋白质水平提高后可显著降低0～7周龄肉鸡腹脂含量(P0.05),对生产性能及胸肉、腿肉产量无显著影响;②降低氨基酸-蛋白质水平能显著降低粪氮排出(P0.05),当氨基酸水平降低10%～15%后,肉鸡腹脂量显著增加(P0.05),对0～7周龄肉鸡平均体重、体增重、采食量、饲料转化率及胸肉、腿肉产量没有显著影响(P0.05);③0～1周龄肉公鸡日粮中赖氨酸水平降低5%(蛋白水平降为21.47%)时,对其生产性能和胴体组成无任何不良影响,同时可最大程度地减少氮排出。