2014-2015年中国部分地区蜜蜂慢性麻痹病病毒流行病学调查及系统发育分析

【目的】前期笔者课题组对北京地区蜂群进行了常见病毒感染情况的调查,发现蜜蜂慢性麻痹病毒（Chronic bee paralysis virus,CBPV）在病蜂群中的检出率显著高于在健康蜂群中的检出率,据此推测可借助病蜂群对CBPV进行研究。鉴于目前国内CBPV流行病学数据的匮乏,论文旨在了解中国主要养蜂区病蜂群中CBPV的分布及遗传变异情况,以期为该病的防控提供依据。【方法】2014-2015年间从四川、安徽、浙江、河南、山东、山西、黑龙江、北京8个主要养蜂省（市）共采集到136份病蜂样品,采用RT-PCR法检测CBPV的感染情况。每份样品随机选取10只蜜蜂,取其头部,利用Trizol法提取样品的总RNA;通过凝胶电泳及NanodropND-2000对总RNA的质量进行定性与定量检测。以样品总RNA为模板合成cDNA第一条链,而后以cDNA为模板扩增CBPV的特异性片段。所有扩增片段均进行琼脂糖凝胶电泳,对部分阳性样品进行测序与序列分析;通过扩增片段与阳性片段的比对确定每份样品中CBPV的检出情况。为研究CBPV中国分离株的系统发育特性,以样品cDNA为模板,扩增全部阳性样品的RdRP基因（RNA-dependent RNA polymerase）特异性片段,而后进行测序与序列分析。将序列提交至GenBank获取基因登录号。对获得的分离株的RdRP基因与GenBank上发表的相应序列进行比较分析,利用CLUSTAL W软件对全部参考序列及本研究获得的分离株的对应序列进行同源性比对,应用软件MEGA 6.0 中邻接法（neighbor-joining）对所有序列绘制系统进化树。【结果】蜜蜂头部总RNA质量检测结果显示,所有样品的总RNA相对完整,且浓度处于（980.5±37.1）ng·L^-1范围内,A₂₆₀/A₂₈₀ 在1.92-2.24。CBPV感染率检测结果显示,136份病蜂样本中共检出120份CBPV阳性样品,阳性率高达88.2%。全部阳性样品的电泳结果可见与预期大小一致的特异性片段,其序列与靶序列同源性达到99%以上。RdRp基因特异性片段的序列分析表明,本研究共获得8个CBPV中国分离株,其序列与多种其他地区的CBPV的相应序列同源性达到97%以上。中国分离株GenBank登录号分别为KT374042-KT374049。对其系统进化树分析后可知,世界流行的CBPV分离株可分为5个进化分支：两个欧洲分支（European clade 1、 European clade 2）,两个中日混合分支（Chinese -Japanese clade 1、Chinese-Japanese clade 2）和一个美国分支（US clade）。获得的8个中国分离株均存在于同一进化分支上,且与之前得到的6个江苏分离株以及4个日本分离株共同形成两个混合分支。【结论】进一步证实了中国病蜂群中普遍存在CBPV感染;系统进化关系表明,目前国内CBPV分离株之间的遗传关系无明显地域性特征,与日本分离株亲缘关系较近。有关CBPV的监测工作亟需加强,且其预警作用需引起重视。     

猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建

设计扩增猪瘟病毒(swine fever virus,SFV)核酸5’端非翻译区的引物,采用RT-PCR方法克隆目的片段并插入PMD一18 simple T质粒,重组质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,提取质粒经PCR和序列测定证实为阳性重组质粒,命名为pSF。将构建的pSF作为标准阳性模板进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测表明,此模板在一20℃保存6个月对结果无显著影响;对于1×10 9,1×10 7,1×10 5拷贝／2μL 的pSF用FQ-PCR方法测定的ct值最大变异系数分别为1．55％;使用该模板建立的定量范围为1×10 2—1×10 11拷贝／2 μL ;构建的阳性重组质粒pSF具有良好的稳定性和特异性。该方法可以用于临床诊断。     

高职院校专业课教师的影响力对教育教学的影响

根据高职院校的现状,从高职院校的实际出发,阐述了高职院校教师的影响力在教育教学活动中的作用,主要从教师应具有渊博的知识、理论与实践结合、教育教学艺术、行为、爱心、情感等方面作了详细的论述。     

Effect of Planting Density and Fertilizer Application on Fiber Yield of Ramie （ Boehmeria nivea ）

As the most important cultural practices for ramie (Boehmeria nivea) production,the single effects of plant density and nitrogen (N),phosphorus (P),potassium (K) fertilization on yield are well documen...     

变偏移距VSP资料处理方法研究

变偏移距VSP这门勘探技术自从提出来已经有20多年的历史了,但是,变偏移距VSP的应用还是止步不前,主要原因在于变偏移距VSP方法与常规VSP方法相比有波场复杂、波场分离困难的缺陷.然而,由于该方法检波器可以固定在储集层的上方,有利于描述储层性质及其纵横向变化情况,当有油气显示时,用变偏移距VSP探测漏掉的油气层是很有效的.在理论分析的基础上,编写程序实现了抛物拉冬变换的正、反变换,利用此程序成功实现了复杂条件下变偏移距VSP资料的上、下行波和转换波的分离,效果明显,并且具有实用性.     

乌梁素海水质指标的主成分分析

本文采用主成分分析法对乌梁素海水体的污染程度进行定量化评价，结合前期实测数据，利用Matlab软件，分析出影响乌梁素海水质的主要指标为总氮、总磷、溶解氧、化学需氧量、pH、五日生化需氧量和叶绿素，并分析了污染程度。分析结果与实际相符，具有一定的可靠性和实用性。     

双孢蘑菇非麦粒基质栽培种的出菇对比研究

对以膨胀珍珠岩为主要基质的非麦粒蘑菇栽培种进行出菇试验,以麦粒菌种为对照,比较菌种吃料、爬土、纽结时间及产量情况,试验结果表明,非麦粒基质蘑菇栽培种在蘑菇堆肥上的表现正常,产量与麦粒菌种相当。     

基于本体的水稻栽培知识库构建及应用

在人工智能领域(AI)中,Ontology作为知识表示和知识组织的主要工具,能有效地对知识进行系统化的组织和表示,这种结构化知识表示有利于解决信息检索、资源组织等。以构建水稻栽培学知识库为依托,研究了本体在该领域的构建原则、方法等,通过对相关的分类体系确立、属性定义、实例确定,以及本体存储等各个部分进行研究,详细地阐述了本体信息的结构组织体系的确立与相关知识及其应用的全过程。     

大理市蔬菜农药残留状况及控制对策

蔬菜生产过程中防治病虫害而不合理大量使用农药,结果带来蔬菜农药残留量超标、环境污染等问题。严禁生产使用高毒、高残留农药品种,大力推广高效、低毒、低残留农药、安全合理使用农药和加强病虫害综合防治,是减少因不合理施用农药带来的蔬菜农药残留和改善农业生态环境的有效途径。     

6个种源山桐子种子含油率和脂肪酸GC/MS分析

为给山桐子的开发利用提供依据,本研究以6个种源的山桐子种子作为研究对象,采用索式提取法提取油脂,时山桐子种子含油率及种子中的脂肪酸组成和相对含量进行了测定分析,得到的油脂甲酯化处理后,用气相色谱-质谱联用技术(GC/MS)分析油脂中的脂肪酸组成及相对含量.结果显示,不同种源山桐子含油率相差较大,变幅为11.34％～26...