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AIM:To screen the lentiviral vector carrying siRNA with higher efficiency of suppressing the sphingosine-1-phosphate receptor 2(S1P2) gene expression in the primarily cultured corpus cavernosum smooth muscle cells of spontaneously hypertensive rats (SHR).METHODS:SHR and SD rats (n=5 each) were used for primarily culturing corpus cavernosum smooth muscle cells.The cells were randomly divided into 6 groups:SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3,SHR GFP,SHR control (SHR non-transfection group),and SD control (SD rat control group).Each group had 5 samples with 1.0×105 cells of each sample.At 72 h after transfection (MOI=60) with lentiviral vectors carrying S1P2 siRNA into the SHR corpus cavernosum smooth muscle cells,the expression of GFP was observed under fluorescence microscope.The protein expression of S1P2,ROCK1,ROCK2 and eNOS in the corpus cavernosum smooth muscle cells,and the mRNA expression of S1P2,ROCK1 and ROCK2 were determined by by Western blot and RT-PCR.RESULTS:The transfection efficiency of the corpus cavernosum smooth muscle cells in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SHR GFP groups were>80%.Compared with SHR control group,the mRNA levels and the protein expression of S1P2,ROCK1 and ROCK2 in SHR GFP group showed no remarkable changes,while those in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SD control groups were significantly lower than those in SHR control group (P<0.05).The protein expression of eNOS in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SHR GFP groups were not significantly changed as compared with SHR control group,but that in SD control group was significantly higher than that in SHR control group.CONCLUSION:Three groups of siRNA lentiviral vectors targeting S1P2 inhibit the expression of S1P2 in the corpus cavernosum smooth muscle cells of SHR,and by silencing the S1P2 expression,the expression of ROCK1 and ROCK2 is inhibited.Among them,siRNA-1 has the highest inhibitory efficiency. 相似文献
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以广泛种植的2个黄瓜品种"长春密刺"和"水果黄瓜"为试材,叶面喷施0.30%、0.60%、0.90%硝酸铵,研究了不同浓度硝酸铵对幼苗鲜质量、叶绿素含量、渗透调节物质及酶活性等生理指标的影响,为有效且合理地施用氮肥提供参考依据。结果表明:喷施硝酸铵可提高2种黄瓜幼苗的鲜质量,对叶绿素a含量影响不大,促进叶绿素b含量和叶绿素总量的增加;随着喷施硝酸铵浓度的增大,可提高2种黄瓜的游离脯氨酸含量,降低可溶性糖含量,对可溶性蛋白质含量影响不明显;随着喷施硝酸铵浓度的增大,2种黄瓜的超氧化物歧化酶(SOD)活性变化趋势均为先增后降,而过氧化氢酶(CAT)活性变化趋势则呈现出先降后升,但较对照差异均不显著;"长春密刺"和"水果黄瓜"的叶面喷施硝酸铵最适浓度分别是0.30%和0.60%。 相似文献
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为了探索适宜于北京春茬露地生菜的灌溉方式,以生菜品种"雷达"为研究对象,设置3个灌溉处理,以常规灌溉为对照,研究不同灌溉方式对生菜生长、品质和产量的影响。结果表明:常规灌溉处理的株高和叶片数显著低于微喷带和边缝式滴灌带处理;边缝式滴灌带处理的单方水产出最高,且其植株硝酸盐显著低于微喷带处理,维生素C含量要显著高于微喷带处理和常规灌溉处理,果实营养价值和安全性相对较高。综合考虑植株生长、品质、产量和单方水产出率等要素,边缝式滴灌带相对适宜春茬露地生菜的生产,其产量667m~2达到了2 797kg,单方水产出率达到31.3kg·m~(-3),单方水产出率比微喷带处理和常规处理分别高20.8%和233.0%。试验还得出了春茬露地生菜各生育时期的作物系数,能够为实现春茬露地生菜的高效生产提供一定的参考依据。 相似文献
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以湖北省罗田板栗品种乌壳栗为试材,采用染色体步移的方法获得了板栗IFR启动子序列,研究了板栗黄酮代谢途径中关键基因IFR的启动子顺式作用原件及可能对雄花黄酮类物质合成的影响,并构建pCAMBIA1304融合载体。以期揭示板栗雄花黄酮代谢合成途径,IFRs启动子上游所包含的顺式元件对环境和栽培措施的响应及对板栗雄花发育的影响。结果表明:长度为1 688bp的板栗IFRs启动子序列包含多种类型的顺式作用元件,包括光响应元件GT-1motif、ASF-1motif等;与赤霉素,脱落酸、乙烯等相关的激素响应元件,如WRKY motif(赤霉素信号途径转录因子)、GCC-box(乙烯应答元件)以及Dc3(脱落酸响应元件)等;逆境胁迫相关的功能元件,如与抗损伤相关的ERF3、抗病相关的TGTCA-box等。以此推测,CmIFR基因的表达可能会受到以上光、激素、各种生物或者非生物胁迫等因素的影响。为了后期进一步研究启动子的功能,按照启动子功能区域,设计了CmIFR启动子不同长度的6个功能片段,并将这些片段替换pCAMBIA1304中的35S启动子,成功构建了由CmIFRPs启动子不同区域驱动的gus基因的植物表达载体pCAMBIA1304+CmIFRPs。 相似文献
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