气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。     

孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育研究

卵黄总免疫球蛋白Y(IgY)含量可以作为鸡胚健康状态的一种标志。本试验旨在研究孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育规律。选取正常孵化的2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、21日胚龄种蛋各20个,对胚蛋、胚体、心脏、肝脏、肌胃、肠道等进行分离和称重,构建鸡胚生长模型;采集卵黄并制备卵黄总IgY样品,使用鸡免疫球蛋白Y的ELISA试剂盒检测卵黄总IgY水平。结果表明:孵化期卵黄总IgY水平为47.928~1813.484μg,鸡胚健康状况良好;2~12日胚龄卵黄总IgY水平缓慢下降,12日胚龄后卵黄总IgY水平急剧下降,14~16日胚龄卵黄总IgY水平下降幅度最大,卵黄IgY动态变化与鸡胚生长发育规律吻合;二次、三次、S三种非线性生长模型都能较好描述白来航鸡胚生长规律,3种曲线的拟合度均在0.99以上,其中S模型的拟合度最高,达到0.998;胚体重、心脏重、肝脏重、肠道重和肌胃重随着胚龄的增大而增加,各器官在胚胎发育中期的相对生长强度大于后期,各个器官在孵化期生长发育存在不平衡性。     

鸡组织滴虫病PCR病原学诊断方法的建立

为建立鸡组织滴虫(H.meleagridis)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ng/μL。特异性试验表明与其他常见鸡寄生虫的DNA样品均无交叉反应。该PCR方法对临床样品的检出率为100%,与组织病理学诊断结果符合率为100%。该诊断方法敏感、特异,可以用于组织滴虫病的临床诊断。     

肉牛冻精细管无伤害制作技术

本文对日本和牛冻精细管生产过程中的种公牛饲养管理、采精管理、稀释液的配方及其配制过程,稀释过程,冷冻过程进行了详细描述。这项技术使细管冻精的平均活力由的0.3提高到0.4以上,大幅提高了冻精生产质量。     

碌曲县生长季草地植被覆盖度与生产力动态特征

针对碌曲县地形地貌复杂的特点,应用M ODIS产品数据与地面调查相结合,以该县2018年6-9月的数据为例,研究了不同类型草地主要生长季节的植被盖度和产量动态.结果 表明:NDVI像元二分模型和回归模型能够较好地反映草地的植被盖度和草产量,碌曲县主要草地类型为高寒草甸和山地草甸,面积为37.55万hm2,高寒草甸占比较大,为56.86％.碌曲县草地生长季植被平均盖度呈先上升后下降的趋势,并在7月达到峰值,为81.77％,9月最小,为49.45％;山地草甸和高寒草甸的平均盖度也是7月最大,分别为82.38％和81.33％;6-8月的草地平均盖度以I级为主,分别占全县草地面积的65.53％、93.32％和69.84％,9月以Ⅱ级为主,占比为58.74％.根据样地样方实测数据与相应点影像NDVI提取值,建立6-9月产量估测模型,各月全县和各草地类型的可食牧草干草平均产量呈现逐步增大的趋势,9月产量最高.     

污泥和生长素添加对草地早熟禾生长及土壤微生物的影响

污泥可用作土壤改良剂和生物肥料,改善绿地土壤的理化性质,促进植物的生长.以草地早熟禾品种午夜作为试验材料,研究水分胁迫下,添加污泥、吲哚丁酸和色氨酸的不同处理对草地早熟禾生长及土壤微生物的影响.结果 表明:施用污泥能有效缓解草地早熟禾光合速率和相对含水量的下降,提高其耐旱性,同时污泥能显著提高土壤微生物量碳,土壤微生物的丰度及群落多样性,在污泥中加入色氨酸比单独施用污泥或色氨酸对草坪草的耐旱性能产生更显著的影响.     

IBV AH1-99分离株N基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR技术成功扩增出IBV AH1-99分离株的N基因全长cNDA,将其克隆到pMD18-T载体上。经酶切分析、PCR鉴定及核苷酸序列测定,成功获得该分离株N基因的重组质粒。序列分析结果表明,分离株N基因全长1 230个核苷酸,编码409个氨基酸。同部分IBV参考毒株相比,核苷酸同源性为85.8%~89.9%,氨基酸同源性为86.6%~91.0%,在进化关系树中,AH1-99与国内分离株X、LX4亲缘关系较近。     

运用微卫星标记对中国地方绵羊品种的遗传多样性分析

利用30对微卫星引物,以中国西部7个地方绵羊（Ovi saries）品种为研究对象,通过计算基因频率、平均杂合度（H）、多态信息含量（PIC）及有效等位基因数目（Ne）,并根据共祖遗传距离矩阵进行UPGMA聚类分析,评估其品种内和品种间的遗传变异。结果表明：在30个座位中,共检测到239个等位基因,平均每个座位等位基因数为8个;品种平均有效等位基因数为2.9～3.4个,座位平均有效等位基因数为1.9～5.3个;座位平均杂合度为0.320～0.818,品种平均杂合度在0.656～0.719之间,座位平均PIC为0.388～0.786,品种平均PIC在0.590～0.666之间。聚类分析表明各绵羊品种聚类结果与其来源、育成史和地理分布基本一致,其中有争议之处仍待进一步探讨。     

银杏防御素对仔猪生长性能及免疫指标的影响

本试验旨在通过在断奶仔猪饲粮中添加银杏防御素,研究其对仔猪生长性能及免疫指标的影响,以期为生产上提供安全、环保、高效的绿色饲料添加剂.试验选择断奶后体重约为7 kg的“杜×长×大”仔猪120头,随机分为对照组和试验组,每组5个重复,每个重复12头猪.对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中添加0.2％银杏防御素的试验饲粮.试验期21 d.结果显示,与对照组相比,试验组末重提高了8.92％(P ＜0.05),腹泻率极显著降低(P＜0.01),料重比降低了7.27％(P ＜0.05);血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A含量分别提高了13.03％(P ＜0.05)、12.27％(P ＜0.05)、7.89％(P ＞0.05),血清白蛋白和总蛋白含量分别提高了19.97％(P ＜0.05)和14.97％(P ＜0.05),血液T淋巴细胞转化率提高了8.25％(P ＞0.05),血液白细胞介素2含量提高了15.25％(P ＜0.01).由此可见,银杏防御素可提高仔猪生长性能和免疫指标,降低腹泻率.     

我国猫尾草引种栽培与猫尾草产业之梗概

阐述了猫尾草在中国引种的历史过程及植物学特征、生物学特性、营养价值和主要栽培技术,并指出猫尾草产业是草产业中一个突出的成长点和特色领域。