番红花种球中虎眼万年青花叶病毒的分子鉴定与序列分析

【目的】对一批荷兰进境番红花种球(Crocus sativus)进行病毒鉴定,以防止危险性病毒传入危害。【方法】根据已报道的马铃薯Y病毒科(Potyviridae)通用引物(Sprimer和M4T),采用RT-PCR方法对一批番红花种球样品进行检测,取其中一个RT-PCR产物进行克隆测序,利用Gen Bank上的基本局部比对搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool,BLAST)和MEGA 6中的基于对数期望的多重序列比较(Multiple Sequence Comparison by Log-Expectation,MUSCLE)进行序列比对分析,并根据外壳蛋白基因(coat protein,CP)序列利用最大似然法(maximum likelihood method)进行系统发育分析。【结果】RT-PCR检测结果显示该批样品扩增到一条约1.7 kb的预期大小片段,说明该批番红花种球样品中存在Potyviridae科病毒。测序获得长度为1 666bp的序列(命名为2677-NL),含有部分核内含体b基因(nuclear inclusion b,NIb)、完整的CP和3′端非编码区(3′-UTR),其核苷酸序列与虎眼万年青花叶病毒(Ornithogalum mosaic virus,Or MV)的SW3.3分离物具有最高序列一致性(99.6%),与Or MV参考基因组序列(Reference genomic sequences,Ref Seq;NC_019409)的序列一致性为99.1%。该分离物的CP与6个Or MV印度分离物(JQ686722、JQ686720、JN692498、JN692497、JN692496、JF682235)的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为71.5%—77.3%和65.7%—79.7%,与其他32个Or MV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为77.9%—99.5%和82.9%—99.2%。基于CP进行的系统发育分析表明,Or MV可分为两个类群,而2677-NL与5个澳大利亚分离物(JQ807995、JQ807996、NC_019409、AF185964、AF185965)相聚成簇,表明其在系统发育关系上与Or MV澳大利亚分离物的亲缘关系最近。【结论】根据国际病毒分类委员会(ICTV)关于Potyviridae科病毒种类的分类标准,2677-NL为Or MV的一个分离物,证实该批番红花种球受到Or MV的侵染。这是世界上首次在番红花中发现Or MV的报道。     

小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)的RT-PCR检测

小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV）是葫芦科作物上的一种重要病毒,近几年来已成了我国葫芦科作物上的一种重要病原物。根据已知的ZYMV基因组序列分别设计了2对特异性引物,在优化RT—PCR条件的基础上,成功建立了ZYMV的RT—PCR检测方法。引物ZYM1／ZYM2用于扩增整个CP基因序列（片段长度949bp）,而引物ZYM3／ZYM4用于扩增部分CP基因序列（片段长度449bp）,其中,引物ZYM3／ZYM4的检测灵敏度比引物ZYM1／ZYM2的检测灵敏度高。把所建立的方法用于南瓜（Cucurbita moschata）、丝瓜（如如cylindrica）病叶的检测,结果在这些病叶中也检出ZYMV。因此,该方法可用于ZYMV的快速、灵敏检测及分子流行病学的调查研究。     

台湾“黑珍珠”莲雾反季节栽培技术实践

介绍了台湾"黑珍珠"莲雾反季节栽培技术,主要包括:修剪、环割、断根处理、遮光处理、水肥管理、催花处理、病虫害防治等。     

侵染百合的病毒种类及其检疫重要性

在侵染百合的18种病毒中,有6种病毒为我国禁止进境的检疫性有害生物,在进境的百合中曾检出4种检疫性病毒,因而在进境百合中具有十分重要的检疫重要性。本文介绍了国内外报道的百合病毒种类和最新分类进展以及从进境百合中截获的病毒种类。     

有益瓢虫的生防利用研究概述

对国内近三十年来有所研究报道的有益瓢虫的种类、防治对象及分布作一综述,有益瓢虫共有51种,其中3种为国外引进种,48种为国内所有种,除一种为菌食性外,其余均为捕食性,所取食的害虫种类大多数为介壳虫、蚜虫、螨类、粉虱,极少数种类取食叶甲、木虱、飞虱若虫、叶蝉若虫等。     

应用TaqMan MGB探针快速检测新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧

新菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley))是我国进境植物检疫性有害生物,新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧(D.brevipes)经常从进口菲律宾和东南亚水果中截获,用形态学方法对二者进行鉴定较难,且耗时较长。为了对这两种粉蚧进行快速准确鉴定,本研究利用mtDNA COI基因设计了两组特异性引物和MGB探针,应用TaqMan实时荧光PCR方法实现了对新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧进行快速准确鉴定的目的。该方法耗时短,重复性好,适合在口岸检疫中推广应用。     

火龙果细菌性软腐病菌的分离与鉴定

<正>火龙果(Hylocereus undatus Britt.et Rose)属仙人掌科三角柱属植物,是集水果、花卉、蔬菜、保健为一体的热带亚热带果树,在中美洲、美国南部地区,以及以色列、越南、泰国和我国的台湾、海南、广东、福建等地均有种植。近年来,随着火龙果种植面积不断扩大,火龙果病害呈逐渐加重趋势,严重威胁火龙果的产业发展。火龙果细菌性病害主要由欧文氏菌(Erwinia sp.)、阴沟肠杆菌(En-     

进境西班牙燕麦草可能携带的有害生物风险分析

根据西班牙提供的脱水燕麦草相关材料,查阅中国国家有害生物检疫信息系统和国内外有关文献期刊,检索CABI数据库,总结西班牙燕麦草上发生的有害生物。按照第11号国际植物检疫措施标准和《GB/T 20879—2007中华人民共和国国家标准——进出境植物和植物产品有害生物风险分析技术要求》,对进境的西班牙燕麦草可能携带的有害生物进行了风险分析,明确需重点关注的有害生物有12种,含昆虫1种、真菌1种、细菌1种、线虫2种、病毒2种和杂草5种,根据分析结果,结合贸易实际情况,提出了降低有害生物随燕麦草传入的风险管理措施。     

甘蔗簇粉蚧的形态和分子鉴定

为了准确快速鉴定甘蔗簇粉蚧,利用显微技术对虫体进行观察,再提取单头粉蚧基因组DNA,应用COI通用引物进行PCR扩增并双向测序。PCR产物测序分析后,输入GenBank中进行BLAST搜索并应用MEGA11构建系统发育树。结果表明甘蔗簇粉蚧主要形态特征为具有18对刺孔群,钉状单孔散布背面,多格腺少,仅在阴门附近,领状管腺无。所获得的COI基因序列与甘蔗簇粉蚧具有100%一致性,系统发育分析表明样品的COI基因序列均与甘蔗簇粉蚧处于同一分支中。研究结果可为该类粉蚧的检疫鉴定提供参考。