多位点基因打靶技术的鳜鱼体内实验研究

在转基因动物的研究中,一般采用随机插入的方法。基因在受体动物的基因组中随机整合,严重制约了转基因动物外源基因的稳定遗传,是转基因动物研究亟待解决的问题。转基因定点整合技术,即基因打靶技术是解决上述问题的重要途径,但是基因打靶存在打靶效率太低的问题。本研究小组已建立了体外动物细胞的多位点基因打靶技术,并构建了用于鳜鱼的体内多位点基因打靶的打靶载体,本文开展多位点基因打靶技术的鳜鱼体内实验研究。以鳜鱼rDNA基因(编码rRNA的基因)及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含干扰素基因的打靶载体,以其间隔序列为靶位点,针对鱼类胚胎发育特点,采用精子介导技术进行多位点基因打靶,最终获得定点整合干扰素基因的鳜鱼,并建立一套适用于动物的基因定点敲入的体内基因打靶技术。主要研究内容如下:(1)采用组织培养方法,获得鳜鱼头肾淋巴细胞和脾淋巴细胞,采用脂质体介导法使多位点基因打靶载体在鳜鱼的细胞上实行基因转移。采用正负筛选方法,利用筛选药物G418和GCV(更昔洛韦)筛选转染后的细胞两周后,对存活细胞进行DNA水平和RNA水平鉴定。结果证明了干扰素基因在鳜鱼细胞上实现了定点整合和稳定表达。(2)利用精子介导法将经线性化处理后的多位点基因打靶载体在鳜鱼的胚胎上实行基因转移。(3)根据靶位点定点整合的正负筛选原理,利用筛选药物G418和GCV筛选与富集定点整合后的阳性鱼胚或鱼苗,结果成功孵化出106尾转基因鳜鱼鱼苗。(4)培育6个月后,取20尾转基因鳜鱼进行鉴定。采用PCR、RT-PCR、测序等方法进行定点整合的鉴定。结果表明:6尾检测到已转入的基因——干扰素基因,其中有3尾实现了定点整合并表达。本研究率先将多位点基因打靶技术应用到转基因鱼的研究中,建立一套适用于鱼类的高效、安全的多位点基因打靶技术,并获得外源基因定点整合并表达的鳜鱼。     

2004年聊城市地膜棉存在的问题与对策

聊城市是老棉区，棉田面积在13万公顷左右，其中大部分是麦套棉，少部分是纯春棉，还有一些蒜套棉、菜套棉等。棉花播种基本上全是地膜覆盖，这对保证棉花一播全苗起到较有利的作用，但其栽培管理过程中仍存在几个方面的问题，影响棉花的丰产丰收。     

温敏雄不育小麦C49S不育性表达研究

通过连续两年对温敏雄不育小麦Ｃ４９Ｓ的分期播种试验表明，早播的ＩＣ４９Ｓ（第一播期Ｃ４９Ｓ）减数分型过程中有１７．９％的细胞发生异常，当小孢子从四分体释放后，大量细胞收缩变形，而使变异率急剧提高，以后小孢子的内含物逐渐解体，最终成为败育花粉，ＩＣ ４９Ｓ的花粉育性和结实率均很低。在Ｉ Ｃ４９Ｓ小孢子败育过程中花药蛋白药蛋白质含量低，被认为可能与花粉不育有关。     

试论聊城地区麦套春棉两熟栽培

一、气候因素与麦棉生长发育的关系我区自1958年就试验示范了头年种麦,来年套棉,三年改茬的二年三熟制。随着农业生产条件的改善,种植制度又逐渐演化为目前的当年种麦,来年套棉;拔花种麦,麦林内继续套棉的一年两熟耕作方式。这既反映了我区生产条件的改善,又在较大程度上     

用性诱剂和赤眼蜂防治微红稍斑螟

在北京中国儿童少年活动中心院内,主要的绿化树种是油松,共394株,因受微红稍斑螟危害,致使松树的枯梢遍布,侧梢丛生。1982至1984年,连年用高浓度(700倍)氧化乐果和杀螟松等农药喷雾防治,每年7—8次,并辅以人工剪除虫梢,但效果不佳,相反每次喷     

医用消毒剂和高分子成膜剂配伍防治苹果腐烂病

由于苹果腐烂病的病菌是一种真菌,因此选用对真菌具有快速杀灭和高效抑制作用的消毒剂和高分子有机成膜剂配伍进行防治苹果腐烂病试验,取得了较好的效果.     

玉米秸杆还田对温室甜瓜应用效果研究

通过日光温室内玉米秸秆庸熟还田,明确了其土壤的改良和增产效果,为唐山地区设施土壤改良和玉米秸秆高效综合利用提供技术指导.试验表明,玉米秸杆扇熟还田能使设施内土壤容重降低,有机质、氮磷钾的养分提高.     

东折棱河地区不同类型天然红松林林分结构比较

对东折棱河地区的柞树红松林、枫桦红松林和紫椴红松林等3种典型的阔叶红松林进行了标准地调查,比较了不同类型的天然红松林的林分结构和空间分布格局之间的差异,分析了出现差异的原因,同时判断了不同红松林的群落稳定性。结果发现：在分层现象明显的阔叶红松林中,主林层的红松为优势种,分布最广,占据最大的生存空间,而阔叶树种则在次林层争夺生存空间。在红松林的不同发育阶段,其林分密度不同,但自然稀疏现象的存在使林分结构趋于优化,趋于稳定。     

塑料模具设计与制造的主要工艺流程及生产效率

塑料模具设计与生产制造工序较为复杂,理论分析与生产实践活动之间存在较大差别。近些年在我国多项技术快速发展背景下,现代塑料制品开始朝着多样化与多元化方向发展,对传统设计与制造技术影响较大。本文对塑料模具设计与制造的主要工艺流程进行分析,旨在提升生产效率。     

我国农机合作社规范化建设影响因素研究

农机合作社作为新型农业经营主体经历了10多年快速发展,已经成为农业机械化的重要组织载体和农业生产的主力军,进入更加注重质量提升的新阶段。从农机合作社规范化建设内部因素出发,利用层次分析法构建规范化建设的影响因素指标体系,经计算得出盈余返还、合作社章程、农机具使用和带头人能力在17个影响因素中权重分别为:0.154 9、0.108 4、0.078 2、0.073 1,并从规范引导、培训宣传、打造品牌等方面提出农机合作社规范化建设的对策建议。