11种牛分枝杆菌抗原在牛结核病诊断中的初步评价

为筛选及评价用于牛结核病诊断的抗原,本试验将CFP-10、ESAT-6、TB10.4、TB27.4、MPT51、MPT63、MPT64、MPB70、MPB83、Rv3872和Ag85B共11种牛分枝杆菌抗原分别作为包被抗原建立间接ELISA方法,比较其对牛结核病的检出率;同时利用豚鼠和牛的皮试试验评价重组蛋白作为皮试试验刺激原的潜力。此外,将重组蛋白分别刺激结核病阳性牛和阴性牛的抗凝血24 h,检测血浆中的IFN-γ水平,评价各重组蛋白作为IFN-γ释放试验刺激原的潜力。结果显示,不同重组蛋白对结核病阳性血清的反应活性不一,MPB70总检出率最高,为59.7%;其次是Ag85B、ESAT-6和MPB83,检出率均在45%以上;MPT51的检出率最低,仅为2.2%。豚鼠和牛皮试试验均显示,单个重组蛋白作为刺激原难以产生令人满意的迟发型过敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH）,而TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63或Rv3872作为补充抗原,分别与CFP-10或ESAT-6混合,均可特异性地刺激结核病阳性牛产生较强的DTH反应,且与PPD-B无显著差异（P>0.05）。重组蛋白CFP-10、ESAT-6、TB10.4和MPT51均能刺激结核病牛全血释放一定的IFN-γ,其中CFP-10、CFP-10-ESAT-6串联蛋白和MPT51刺激结核病阳性牛全血释放的IFN-γ显著高于阴性牛（P<0.05）。因此,这11种牛分枝杆菌抗原并不适合单独用于牛结核病的血清学诊断、皮试试验或IFN-γ释放试验,但以CFP-10和ESAT-6为核心,TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63、Rv3872或MPT51作为其补充抗原,均能提高检测敏感性,有作为皮试试验和IFN-γ释放试验特异性刺激原用于牛结核病诊断的潜力。     

饲粮添加不同水平的维生素A对肉鸡免疫功能及肝脏、十二指肠组织中一氧化氮代谢的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的维生素A对肉鸡免疫功能及肝脏、十二指肠组织中一氧化氮(NO)含量及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因相对表达量的影响.采用单因子完全随机试验设计,选取1日龄爱拔益加(AA)肉鸡240只(公母各占1/2),随机分为5组,每组6个重复,每个重复8只.各组分别在基础饲粮中添加不同水平的维生素...     

休牧期日粮中NFC/NDF对苏尼特羔羊生长发育、血液生化指标和矿物元素含量的影响

试验探究休牧期饲喂非纤维性碳水化合物(NFC)/中性洗涤纤维(NDF)不同的日粮对苏尼特断奶羔羊体重变化、血清生化指标和矿物元素浓度的影响。试验采用单因素完全随机试验设计,选取体重接近的健康断奶羔羊56只,随机分为NFC/NDF比值不同的低精料(LC)与高精料(HC)2个日粮处理组(公、母比例一致),LC组的NFC/NDF为0.39,HC组为0.52。结果表明:HC组的羔羊体重、血清中谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性与尿素氮、甘油三酯含量显著高于LC组(P<0.05),HC组的β-羟丁酸含量明显低于LC组(P<0.05)。HC组血清Ca含量显著高于LC组(P<0.05),其他矿物质含量在两组间无显著性差异。休牧期,在日粮中适当增加精粗比,提高NFC/NDF可以促进苏尼特断奶羔羊的生长发育。根据各指标综合分析,日粮中NFC/NDF为0.52比0.39更有利于促进和改善休牧期断奶羔羊的生长和营养状况。     

利用PCR方法监测质粒DNA在鸡体内的动态分布

将质粒pcDNAKC通过腿部肌肉途径注入试验鸡体内,150μg/只,同时设生理盐水对照组,注射后定期宰杀试验鸡,取其血、心、肝、脾、肺、肾和肌肉注射部位,提取总DNA,用PCR方法检测质粒在各个组织器官内的残留情况。结果表明,注射后4天内pcDNAKC可在心、脾、肺、血和注射部位检测到,16天后任何组织都难以检测到。     

非洲猪瘟病毒EP153R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

试验旨在构建非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）EP153R基因原核表达系统,表达EP153R重组蛋白（rEP153R）,并制备抗rEP153R的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1的EP153R基因序列（GenBank登录号：FR682468.1）合成EP153R基因序列,并将其插入pET-28a载体,构建pET-28a-EP153R重组质粒,经双酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,分别在16和37 ℃条件下经IPTG诱导12 h进行最适诱导温度筛选。在最适温度下进行重组蛋白的表达,并利用SDS-PAGE、Western blotting进行初步鉴定。切取SDS-PAGE蛋白胶25 ku处条带,利用液相色谱－质谱联用技术鉴定重组蛋白是否正确表达。用纯化的rEP153R免疫小鼠,制备抗rEP153R的多克隆抗体,通过间接ELISA检测其抗体效价,Western blotting鉴定抗体特异性。结果显示,重组菌在16 ℃表达量较高,并以包涵体形式表达,产物在25 ku处出现明显的条带,与预期蛋白大小相符,表明rEP153R成功表达。液相色谱－质谱联用技术鉴定结果显示,匹配到YIGLINK、NESVLLR和KYIGLINK 3个rEP153R的特异性肽段,证实该蛋白为rEP153R。间接ELISA检测多克隆抗体效价为1∶128 000;Western blotting结果显示,制备的抗体具有较好的特异性。以上结果表明本研究成功表达了rEP153R,并制备了其特异性抗体,为进一步研究该蛋白生物学功能、非洲猪瘟活载体疫苗鉴定等提供了技术支持和材料。     

复合微生态制剂对蛋种鸡生产性能的影响

本试验旨在研究多菌种复合微生态制剂对蛋种鸡生产性能的影响。选用384只15周龄的海兰褐蛋种鸡,随机分成4组,每组4个重复,每个重复24只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组在基础日粮中分别添加50、100、200 g/t的复合微生态制剂。结果表明,试验3组的平均蛋重显著高于对照组(P＜0.05),但开产日龄比对照组晚;在27~30周龄时试验2组显著提高了产蛋率并降低了料蛋比(P＜0.05),而试验3组的产蛋率显著降低(P＜0.05),料蛋比升高(P＞0.05);试验组的繁殖性能指标与对照组差异不显著。因此,饲料中添加复合微生态制剂可以提高蛋种鸡产蛋前期的生产性能,本试验中复合微生态制剂的适宜添加量为100 g/t。     

天然放牧条件下年龄对苏尼特羊不同部位的肌肉脂肪酸组成与胆固醇含量的影响

试验研究天然放牧条件下年龄对苏尼特羊不同部位肌肉脂肪酸(FA)组成与胆固醇(CHO)含量的影响。选取在天然草场放牧的8月龄、24月龄和36月龄苏尼特羊各8只,禁食12 h、禁水2 h后进行屠宰,取背最长肌、臂三头肌、股二头肌、臀肌用于测定FA组成及CHO含量。结果显示,随着年龄的增长,肌肉组织的粗脂肪(EE)和CHO含量显著升高(P<0.05),分别以36月龄臀肌和36月龄背最长肌最高。二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、饱和脂肪酸(SFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、n-6多不饱和脂肪酸(n-6 PUFA)、n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)、n-6长链多不饱和脂肪酸(n-6 LCPUFA)、n-3长链多不饱和脂肪酸(n-3 LCPUFA)等含量及PUFA/SFA (P/S)均显著降低;不饱和脂肪酸(UFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)含量及n-6 PUFA/n-3 PUFA(n-6/n-3)和UFA/SFA(U/S)显著升高,SFA含量以背最长肌、臀肌中最高,MUFA含量以背最长肌、臂三头肌中最高,PUFA以臀肌最高,n-3 LCPUFA含量以股二头肌最高。年龄和部位的交互作用对C16∶1、C17∶0、C18∶1t9、C18∶2t6、PUFA含量及n-6/n-3显著影响(P<0.05)。研究表明,8月龄苏尼特羊的肌肉的CHO含量较低,且FA组成优于24月龄和36月龄,PUFA、n-3 PUFA、n-6 PUFA、n-3 LCPUFA、n-6 LCPUFA含量较高,n-6/n-3、MUFA、SFA含量较低。年龄对苏尼特羯羊FA组成和CHO含量的影响存在部位的差异性。     

牛分枝杆菌重组蛋白TB27.4的表达、纯化及活性鉴定

为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-TB27.4,优化原核表达条件,并用AKTA Purifier对蛋白的纯化条件进行优化。SDS-PAGE结果显示重组蛋白为可溶性表达,且大小与理论值相符,用牛分枝杆菌阳性血清进行Western blotting检测有特异性条带,且可特异性地刺激牛分枝杆菌感染牛外周血淋巴细胞释放大量IFN-γ。结果表明,重组蛋白TB27.4具有良好的B细胞活性和T细胞刺激活性,为进一步研究其在牛结核病诊断中的作用奠定了基础。     

维生素A、E对肉鸡骨骼钙、磷代谢的影响

试验选用1日龄健康艾维茵肉鸡384只称重后随机分为16个处理组,每个处理组设3个重复,每个重复8只,试验期为6周,采用4×4(VA×VE)完全随机试验设计,研究了日粮中添加不同水平维生素A(1 500、3 000、15 000和45 000 IU/kg)和维生素E(5、15、150和1 500 IU/kg)对肉鸡骨骼钙磷代谢的影响。结果表明,随日粮维生素A水平的增加,肉鸡的胫骨钙浓度呈显著一次线性降低(P<0.05),血清AKP活性与胫骨磷浓度呈一次线性降低趋势(P<0.10),而且45 000 IU/kg维生素A组的肉鸡血清AKP活性、胫骨的灰分与钙含量均显著降低(P<0.05),胫骨矿化度趋于降低(P<0.10)1;5 000 IU/kg维生素A组的上述各项指标均呈不同程度地降低。随日粮维生素E水平增加,血清钙含量与胫骨矿化度呈显著一次线性增加(P<0.05),胫骨钙含量呈显著的一元二次增加(P<0.05);而且1 500 IU/kg维生素E组的肉鸡胫骨矿化度有显著的增加趋势(P<0.10)。日粮维生素A水平在1 500～45 000 IU/kg范围内,维生素E水平在5～1 500 IU/kg范围内,维生素A、E在肉鸡的钙、磷代谢方面均无明显的互作效应存在。过量的维生素A对肉鸡钙、磷代谢有显著的负面影响,日粮维生素A水平为45 000 IU/kg时,提示肉鸡维生素A过量;日粮维生素A水平为15 000 IU/kg时,提示肉鸡维生素A临界过量。日粮中添加较高剂量的维生素E(1 500 IU/kg),可引起肉鸡骨骼强度呈增加趋势,对肉鸡的钙、磷代谢有一定的促进效果。     

抢抓政策机遇，加大禁牧舍饲退牧还草力度，发展生态型畜牧业

西部大开发生态建设资金逐步加大，要抓住这个好机遇，实现畜牧业生产经营方式的根本转变。