人工合成Cecropin AD基因在酵母中表达

Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 是由Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ａ的Ｎ 端１ １１ 位氨基酸残基和Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｄ 的Ｃ 端１２ ３７ 位氨基酸残基构成的一个杂合肽,抗菌活性高于天然抗菌肽。根据Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 的氨基酸序列,以酵母偏爱密码设计了Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因,全长１４０ｂｐ 。采用基因片段化学合成结合ＰＣＲ 法合成Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因。合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因克隆到ｐＣＲＴＭ２１ 上,进行ＤＮＡ 序列测定,证实合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因的ＤＮＡ 序列与设计序列完全一致。将Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因定向克隆到大肠杆菌 酵母穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２ 的Ｂａｍ ＨＩ和Ｓａｌ Ⅰ位点上,构建成含Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因的重组质粒ｐＣＡＤ,将重组质粒转化入宿主酵母ＡＢ１０３ ,以大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１ 为指示菌,用活性蛋白酸性ＰＡＧＥ 法测定,具有抑菌活性,表明Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因在酵母中获得表达。     

烟草Ⅰ类几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶cDNA植物双价表达载体的构建及转化番茄的研究

将烟草中经修饰的Ⅰ类几了质酶和β－1,3-葡聚糖酶cDNA分别加上CaMV35S启动子和NOS终止子,依次插入到同一植物表达载体pBin19上,获得植物双价表达载体pCG－Ⅱ。然后载体pCG－Ⅱ以土壤农杆菌LBA4404介导转化番茄,再生植株的点杂交及PCR扩增证明两种cDNA已随T－DNA同时导入番茄植株中。     

荔枝种质遗传多样性的SRAP分析

为评价荔枝种质的遗传多样性,从88对SRAP引物中筛选出22对多态性高、稳定性好的引物,用于研究46个荔枝品种.每对引物组合产生6～19条谱带,其中多态性条带284条,占总带数的97.93%.46个种质的相似系数在0.469～0.838之间,平均相似系数为0.644.其中,秤砣与红荔的相似性系数最大,亲缘关系最近;小丁香与三月红、三月红与A13两对相似系数最小,亲缘关系最远.UPGMA聚类分析显示,在相似系数为0.644处46份荔枝供试品种被划分为4个类群,并且来源地相同的品种间亲缘关系较密切.22对多态性引物中,引物me7-em2在海垦18中扩增出1条特征谱带,引物me3-em7在水东中也扩增出1条特征谱带,而仅凭这1条特征带就可以将荔枝品种海垦18或水东与其它材料区别开来.这说明SRAP标记可用于荔枝的品种鉴定和群体遗传结构的研究.     

无核荔枝生长素反应因子基因克隆及序列分析

为获得在无核荔枝中胚珠退化过程中差异表达的生长素反应因子基因(ARF),对其全长的克隆并进行分析,根据构建的无核荔枝胚珠败育SSH消减文库的生长素反应因子EST序列,提取高质量的RNA,通过SMART-RACE技术,获得一个生长素反应因子3501 bp的核苷酸序列。应用生物信息学软件进行分析,预测该序列含有2550 bp的开放阅读框,推导的蛋白质为849个氨基酸,具有B3、Auxin_resp和AUX_IAA保守区与结构功能域。分析表明该基因为ARFs基因家族中的一个新成员,进化树上与芒果亲缘关系最近。     

频繁开花高产小桐子组织培养的初步研究

为了奠定频繁开花型高产小桐子的快繁及转基因基础,通过对小桐子茎段腋芽培养、叶片和叶柄愈伤诱导及不定芽分化的不同激素组合培养进行研究。结果表明：适合该高产品种的茎段培养的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋IBA0．1mg／L．叶片愈伤诱导及不定芽分化培养基为Ms＋6-BA2．5mg／L＋IBA0．5mg／L．叶柄愈伤诱导及不定芽分化培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．2mg／L．生根培养以1／2MS＋IBA0．5mg／L＋AC0．1％较为适宜。引起小桐子组培苗玻璃化现象的主要原因之一是BA浓度过高：在不定芽的分化培养中．愈伤过多会严重影响不定芽的数量及质量。     

稻瘟病菌生理小种RAPD分析及其与马唐瘟的差异

氯化卞法微量提取稻瘟病菌７个生理小各和马唐瘟病菌基因组ＤＮＡ，用６０个随机引物进行ＰＣＲ扩增，其中２１个引物的特异性扩增条带，第一引物－菌系组合扩增到３－１９条，平均１０．３条；其中有多态性条速为１－１２条，平均６．１条，多态性为６１．１％。说明稻瘟病菌群体有丰富的ＲＡＰＤ多态性。引物ＯＰＨ１、ＯＰＨ２，ＯＰＨ４，ＯＰＨ１３，ＯＰＨ１４，ＯＰＫ１４等扩增的条带多，多态性丰富，而且可以有效地区分稻瘟     

海南豆科饲用植物资源及营养价值评价

全面考察了海南及其周边岛屿,报道了海南豆科饲用植物资源及其分布情况,记载饲用豆科植物57属211种,并分析其中48种植物的化学成分,测定其中23种植物的叶黄素和β-胡萝卜素含量。     

柚木离体快速繁殖技术

从优良柚木林段选取3~4a生优良单株,从中选取无病虫害的幼嫩侧芽,经表面消毒后接种到无菌培养基上,侧芽萌发率达70%~80%。切取新芽进行增殖,30~40d为一周期,增殖系数为2~3倍。当侧芽增殖到足够数量时,转移到生根培养基上,生根率超过80%~90%。植株移栽成活率达80%~90%。几个月后植株便可种植到大田。      

橡胶树延伸因子cDNA及其5′端启动子区域序列的分离与分析

橡胶延伸因子REF(Rubber Elongation Factor)是橡胶生物合成中最重要的酶之一, 是胶乳中主要的蛋白质. 作者利用已发表的REF cDNA序列设计并合成引物. 通过提取胶乳总RNA用RT法合成cDNA后, 通过PCR技术扩增并克隆了REF cDNA序列. 序列测定结果表明, 所克隆的REF cDNA编码区序列全长414个碱基, 编码138个氨基酸, 3′端非编码区     

提取大白菜基因组DNA的几种方法比较

对用 SDS法、尿素法、改良 SDS法、氯化苄和 CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较。结果表明 ,改良 SDS法提取的 DNA具有典型的天然 DNA分子的标准紫外吸收光谱特点 ,其 A2 6 0 /A2 80 为 1 .7～ 1 .9,A2 6 0 /A2 30 为 1 .8～ 2 .0 ,叶片的 DNA产量为 40 0μg/g。用该法提取的大白菜 DNA适于进行 RAPD分析。