泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清的制备及应用

 根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches’-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane pro-tein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因。序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%。将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达。以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PaWB-AMPD抗血清。利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体。     

乳泉I号添加剂提高母猪哺乳性能的研究

选用８６头哺乳母猪，随机分为２组，对照组喂基础日粮，试验组于产后１０日内在基础日粮中添加２．５％的中药复合添加剂（乳泉Ｉ号）。结果表明，试验组仔猪２０日龄窝重和３５日龄断奶窝重分别较对照组提高２５、５９％和２５．９０％（Ｐ＜０．０１）；仔猪断奶个体重提高１８．５６％（Ｐ＜０．０１）；哺乳期平均日增重提高２２、７６％（Ｐ＜０．０１）；哺乳期仔猪成活率提高８．０％（Ｐ＜０．０１）。     

钾肥不同基追比对烤烟K326烟叶品质的影响

在钾肥用量不变的前提下,为明确钾肥的最佳基追比例,通过梯度对比试验,比较了钾肥不同基肥与追肥配比对K326烟叶的外观质量、内在化学成分及感官评吸的影响。结果表明:在钾肥的基肥与追肥配比为4︰6时,烤后烟叶的成熟度、颜色、叶片结构、油分及色度均有改善,烟叶的外观质量达到最优;烟叶的总糖和还原糖含量增加,总氮和烟碱含量有所增加但均处于合理范围,同时各项化学成分指标更趋于协调;增加了烟叶的香气质和香气量,减小了刺激性和杂气,改善烟叶吃味。综合考虑钾肥不同基追比对烟叶品质的影响,建议在生产中钾肥的基肥和追肥配比为4︰6,以提高烟叶工业可用性。     

大豆携带菜豆晕疫病菌PCR检测技术研究

晕疫病是豆科作物上重要的检疫性细菌病害。本研究在传统 PCR 检测技术的基础上,分析了细菌洗涤液、洗涤时间以及洗涤液容量对一粒带菌大豆检出率的影响,以及有效检出不同带菌率大豆的最佳检测时间。结果表明,洗涤液种类、洗涤时间以及洗涤液容量对检测结果影响不大,但对不同带菌率大豆洗涤时间的长短直接影响病菌的检出率,实验表明振荡洗涤时间8 h,可检测到的大豆种子最低带菌率为0.0625%。本研究所建立的检测方法简便易行,可有效应用于口岸检测进口大豆中的菜豆晕疫病菌。     

PCR-DHPLC技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌

本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法.该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DHPLC)检测.结果表明,几种方法特异性强,检测灵敏度均为菌液浓度102 cfu/mL,PCR-DHPLC技术具有检测成本较低、高通量、自动化程度高、污染风险小及鉴定结果准确等特点,能够满足快速、准确诊断玉米细菌性枯萎病菌的要求.     

番茄细菌性叶斑病菌RPA检测技术研究

青枯菌为应对逆境胁迫,可进入活的但非可培养状态(viable but non-eulturable,VBNC).本文利用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立了一种快速有效区分青枯菌死活细胞的分子检测方法.基于hrcS基因序列,设计了一对青枯菌种特异性检测引物hrcSf/hrcSr;利用PMA对青枯菌Po82菌株的细胞悬浮液样品进行预处理,随后进行常规PCR扩增.结果表明,当样品中PMA质量浓度为3 μg/mL、曝光时间大于5 min时,PMA可有效抑制死亡菌体细胞中的DNA扩增;且对可培养和VBNC状态细胞中的DNA扩增没有影响;本试验建立的PMA-PCR方法能有效对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测,避免了假阳性与假阴性结果的产生.     

PCR-ELISA法对大豆品种的转基因定性检测研究

以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增,对PCR扩增的固相和液相产物分别进行杂交和凝胶电泳检测的PCR-ELISA法,对黑龙江省常规选育品种合丰35和黑农37、外源DNA直接导入大豆的分子育种所获品种黑生101、及大连进口的美国2号等大豆,进行转基因定性检测.结果表明:该方法高效可靠,可作为一种快速定性检测转基因产品的方法;检测结果:美国2号为转基因大豆,黑生101、合丰35和黑农37为非转基因大豆.上述结果对分子育种、生态保护、安全监测及对建立黑龙江省非转基因大豆生产保护区等具有重要意义.     

蚕豆染色病毒CPS基因的序列测定及RT-PCR检测方法的建立

 The nucleotide sequence of small coat protein (CPS) gene of Broad bean stain virus (BBSV) was determined and compared with other comoviruses. The CPS gene of BBSV consisted of 687 nucleotides and encodes a putative protein of 228 amino acid residues. The CPS sequence of BBSV and those of other comoviruses shared identities of 36.5%-58.9% and 35.2%-70.3% at the nucleotide and amino acid levels, respectively. The RT-PCR method specific for BBSV detection was developed based on the determined CPS sequence. The RT-PCR assay presented here allows, for the first time, rapid and specific detection of BBSV.     

永城煤矿塌陷区水污染对鲫鱼外周血细胞数量的影响

选用鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,以相对无煤矿污染的商丘天沐湖为对照,以煤矿污染较严重的永城煤矿塌陷积水区为研究样地,研究永城煤矿塌陷区水质对鲫鱼外周血细胞数量的影响。结果表明:与对照天沐湖相比,永城煤矿塌陷区样地鲫鱼的红细胞数量极显著增加(P<0.01),但白细胞数量差异不显著(P>0.05);从白细胞分类计数统计结果看,淋巴细胞极显著增加(P<0.01),血栓细胞极显著减少(P<0.01),单核细胞显著减少(P<0.05);嗜中性粒细胞虽有减少,但两地差异不显著(P>0.05)。总之,永城煤矿塌陷区水污染已造成鲫鱼外周血细胞数量发生明显改变。     

玉兰黄化病病原的分子检测与鉴定

对表现叶片黄化的玉兰植株,利用植原体16S rRNA基因通用引物进行巢式PCR检测,得到1.4 kb的特异片段,将此片段克隆后进行序列测定、分析及构建系统关系树.结果表明,该片段与16SrI组中的各植原体同源率均达到99%以上,而与其他组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于97%,认为该植原体株系为翠菊黄化植原体组中的成员之一.