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目的 构建pneo-CH9/3091真核表达质粒,并建立其稳定表达的HepG2细胞系.方法 质粒pCH9/3091包含HBVl.1倍体和CMV启动子,将PCR扩增出的带有新霉素(neo)抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091.重组质粒经酶切,测序验证正确后,通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2.G418筛选后,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),PCR检测细胞上清液的病毒颗粒,Western blot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southern blot检测细胞内核心颗粒HBV DNA的复制情况.结果 有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性,且HBV C区片段可通过PCR扩增出来,Western bot结果 提示只有细胞株HepG2 -H7可以表达HBV核心蛋白.Southern blot结果 说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合,并且能在细胞内检测出HBV DNA复制中间体.结论 成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7,能持续产生HBV病毒颗粒. 相似文献
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针对青浦区河道整治的工程实践,在明确河道综合整治目标的基础上,提出了河道综合治理的对策,即以生态工法的理念为指导,在满足水安全和人们对水的各种需求外,还满足水域生态系统的完整性的要求,恢复与建设洁净的水环境,实现人与自然的和谐相处。 相似文献
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休闲农业在中国有较快的发展趋势。笔者认为,休闲农业依托了休闲这个概念,融合了旅游这一方式,是休闲行为和农业的耦合,属于休闲产业的范畴。若要准确认识休闲农业的发展规律和建设方向,必须充分理解休闲和休闲产业。中国休闲农业的发展有内因和外因。内因是农业产业结构发生变化,以及社会观念的理性回归。外因是政府重视、闲暇增加、收入增长和交通便捷。上海的休闲农业面临区域竞争和行业竞争双重挑战,建议采取产业联动和产业嵌入的方式开辟休闲农业发展的新途径。 相似文献
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导读:根据四川简阳市等西南地区多年的早熟玉米、冬瓜栽培经验及间作套种原理,在充分利用光照、气温、玉米秸秆等自然资源的基础上,笔者对栽培模式及种植时节进行优化总结,探索出一套早熟玉米套种冬瓜的“有架”高效栽培模式,以期在西南地区大范围推广,促进农民增产增收。 相似文献
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防渗渠道输水损失的估算 总被引:4,自引:0,他引:4
渠道防渗已成为我国大型灌区改造的主要手段 ,以提高水资源的利用率 ;如何估算防渗渠道的水量损失 ,已成为评价灌区改造的重要技术问题。在概括渠道输水损失的各种估算理论和方法的基础上 ,揭示了流量指数型估计式 σ=A/ Qm(% )对于防渗和非防渗渠道都具有广泛的适用性。并基于全国范围内的实测资料统计分析 ,对影响估计式参数的因素及规律性进行了深入分析 ,建议对防渗或非防渗渠道的渠道渗漏损失均采用该估计式 ,防渗渠道的参数可通过现场静水试验求得 ,或直接对透水性系数进行折减。 相似文献
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平南县木材公司有200多干部职工;它是县中型企业,有直属乡镇收购站10个,贮木场2个,木材加工厂1个,在新形势下,采取了“以林促工,以工养林,林工结合”的办法,走出困境,跃上新台阶:从1985年起,年年超额完成任务,1985年至1990年6月共上交利润183.19万元,平均每年上交20多万元,连年被区、地、县评为先进企业。今年第一季度全县就完成了全年木材收购计划的一 相似文献