转基因棉花的田间筛选技术研究

利用不同浓度的卡那霉素对棉花叶片进行处理,较为系统地研究了棉花不同品种、不同叶位、不同生育时期内叶片对卡那霉素处理的反应。在此基础上建立了一种在田间对转基因棉花进行筛选的简便方法。研究表明,在棉花花铃期以前,利用5000～7500mg,L-1卡那霉素对转基因棉花新展开的倒1叶和倒2叶进行检测,能够有效筛选出带有卡那霉素标记基因的转基因后代,这对于转基因棉花材料的选育有较大的利用价值。     

一种绿色木霉纤维素内切酶基因的克隆及其定点突变对酶活力的影响

纤维素资源是地球上最丰富的可再生资源,纤维素酶的酶活力和生产成本制约着纤维素的利用.本研究从多年户外放置的朽木(Populus bonatii)中分离出一株真菌G-1,经18S rDNA序列分析鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride).从G-1中分离出一种纤维素内切酶基因(endoglucanase,EG;GenBank登录号:HM116999.1).通过重叠引物延伸法对EG进行定点突变,得到一个突变序列EG-mut,将EG和EG-mut分别插入分泌型表达载体pPIC9K,并导入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris),筛选到两个菌株,经刚果红染色和DNS法对酶活性测定,显示其内切酶的活性分别达到20.915 U/mL和24.110 U/mL,酶活力高于本实验中得到的其它重组菌株.结果表明某些定点突变可以揭示影响酶活的重要功能域.     

转铜绿假单胞杆菌KatB基因烟草获得及其抗逆性鉴定

以NC 89烟草（Nicotiana tabacum）为材料,通过农杆菌介导法获得转铜绿假单胞杆菌（Pseudomonas aerugi-nosa）KatB基因植株,利用PCR和RT-PCR对转化烟草进行鉴定,最后通过水分胁迫、盐胁迫、过氧化氢胁迫进行抗逆性分析。结果表明：与野生型植株相比,在缺水条件下的第13 d,3...     

大叶补血草Na+/H+ 逆向转运蛋白基因的克隆及序列分析

 根据同源序列区域设计简并引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ 及ＲＡＣＥ 方法从盐生植物大叶补血草中分离了Ｎａ^＋／Ｈ^＋逆向运输蛋白基因的ｃＤＮＡ（LgNHX1,ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＥＵ７８０４５７）。LgNHX1的ｃＤＮＡ 全长为２３９７ｂｐ,５′端非翻译区长度为５１２ｂｐ,３′端非翻译区长度为２２９ｂｐ,其中包括１２ｂｐ的ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴,中间的开放读码框为１６５６ｂｐ,编码１个５５０个氨基酸的多肽,推测分子量为６１ｋＤ。氨基酸同源性分析表明,ＬｇＮＨＸ１与北滨藜、小麦、盐角草和拟南芥液泡Ｎａ^＋／Ｈ^＋ 逆向运输蛋白的一致性分别为８２．６２％,８２．０１％,８０．６４％ 和７５．８６％。预测分析表明,ＬｇＮＨＸ１具有１１～１２个跨膜结构区域。系统发育分析表明该蛋白（ＬｇＮＨＸ１）与液泡型的Ｎａ^＋／Ｈ^＋ 逆向转运蛋白的亲缘关系较近,与质膜型的Ｎａ＋／Ｈ＋ 逆向转运蛋白亲缘关系较远。     

甜叶菊叶片高频再生体系的建立

以“守田3号”甜叶菊叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、不定芽继代培养和生根的影响.结果表明:用0.1％的升汞处理3 min为最佳消毒方法,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA-1.0 mg/L IAA+300 mg/L水解酪蛋白,平均诱导率为80％;最佳不定芽继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.2 mg/L GA3 +4.0 mg/L KT;最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IAA,生根率为100％,所获得的再生苗生长健壮且移栽后成活率高,最终建立了甜叶菊最佳的再生体系.     

矮牵牛自交不亲和性基因sx的克隆及功能初步分析

利用NCBI、CODEHOPE、Primer Premier5.0等数据库和生物软件设计兼并引物,以矮牵牛花柱cDNA为模板,利用RT-PCR扩增到1条长为417 bp的序列,在GenBank中比对发现,该序列与SX基因相似性最高。然后以SX序列为模板设计特异性引物,RT-PCR扩增到1条全长为747 bp的目的片段,测序结果分析表明,该基因核苷酸序列开放阅读框全长660 bp,编码220个氨基酸,其中包括有22个氨基酸的跨质膜信号肽区,和5个保守区(C1-C5)以及2个高变区(Hva, Hvb),据前人研究所知,该基因具有S-核酸酶功能。同时,从番茄DNA中克隆到一长为717 bp的花粉特异性启动子LAT52。为了使SX基因能在花粉中发挥其S-核酸酶功能,去掉22个氨基酸跨质膜信号肽(命名为sx)之后,与番茄花粉特异性启动子LAT52嵌合构建植物表达载体并转化拟南芥。 TTC染色结果表明,LAT52能特异性的在花粉中调控sx基因的表达,使花粉活力很低甚至没有活力,从而使转基因植株不育。     

天山雪莲sikP基因提高番茄类黄酮含量的研究

【目的】将克隆得到的天山雪莲sikP基因转入番茄中,以提高番茄类黄酮的含量。【方法】利用农杆菌介导的叶盘法,把天山雪莲MYB转录因子sikP基因的植物过表达载体pBI121-35S-sikP转入番茄,利用PCR和RT-PCR技术检测目的基因是否整合到番茄中并表达,将获得的转基因番茄和对照番茄生根后移栽至花盆中,分别对其类黄酮含量进行检测。【结果】在获得5株转基因番茄中,测得转基因番茄总黄酮质量分数明显提高,是对照组番茄总黄酮质量分数的5.4倍。【结论】天山雪莲Myb转录调控因子sikP基因对番茄次生代谢具有重要的调控作用,能够有效地提高番茄类黄酮的含量。     

新疆网室熊蜂传粉制棉花不育系效果初探

[目的]研究不同传粉昆虫制种效果的影响。[方法]2008年新疆兵团农七师农业科学研究所从北京蜜蜂研究所引进2箱熊蜂,利用新疆兵团农七师农业科学研究所转育的哈克尼西棉胞质不育系9-21A及其对应保持系进行试验。保持系和不育系配比均设置为1∶3,试验采用随机排列,与当地的意蜂在4个网室进行2次重复对比试验。[结果]结果表明,熊蜂的数量不是影响棉花不育系制种产量的主要因素,熊蜂的蜂群活力才是影响棉花不育系制种产量的主要因素。[结论]试验结果说明,利用优势熊蜂群在新疆利用网室进行熊蜂授粉制棉花不育系的方法是可行的。     

大叶补血草Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NHX1的克隆及番茄的遗传转化

根据NCBI公布的大叶补血草NHX1基因序列设计特异性引物,经RT-PCR方法克隆得到大叶补血草液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,构建植物融合表达载体pCAMBIA1301-NHX1,重组质粒通过农杆菌介导转化番茄,经PCR和RT-PCR鉴定,获得转基因番茄植株.本研究为大叶补血草耐盐基因NHX1的进一步功能分析和应用奠定了一定的理论基础.     

F3′5′H基因的克隆、表达载体构建与矮牵牛遗传转化

类黄酮3′5′羟基化酶(Flavonoid-3’,5-’hydroxylase;F3′5′H)是花色素苷代谢途径中的一个关键性酶,能使花色素的合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素。从蓝紫色矮牵牛的花瓣中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆得到了约1.7kb的F3′5′H片段。F3′5′H的cDNA序列分析结果表明,克隆得到的序列与原序列同源性达到99.34%,开放读码框为1 521 bp,编码507个氨基酸。将推算的氨基酸序列与NCBI登录的氨基酸序列进行分析比较,发现与文献报道的存在2个氨基酸差异,氨基酸同源率为99.6%。将此基因构建到含有35S启动子的植物表达载体PBI-F3′5′H上,并通过农杆菌介导法对粉红色矮牵牛进行了遗传转化,初步鉴定获得了转基因植株。