不同地区向日葵核盘菌菌株的多样性研究

对来自我国不同地区的12个核盘菌菌株进行培养特性、菌核萌发及致病力的研究表明:各菌株在生长速度、菌丝扩展方向、菌核排列方式、菌核产量及致病力等方面存在着明显差异,这与各菌株的地理来源有一定的相关性,但亦有差异.来自新疆的12号菌株菌丝呈扇形扩展,生长速度最慢,菌核在培养基上零散分布,致病力最弱,不同于其它所有菌株.来自吉林和云南的菌株生长速度快,致病力强.各菌株的致病力与其生长速度趋于一致.对各菌株转代培养物及菌核后代的培养特性比较结果说明它们的分化特性是稳定的.以ITS1和ITS4为引物对12个菌株的rDNA ITS区进行了PCR扩增,4种限制性内切酶(AluI,HhaⅠ,MspI,HaeⅢ)酶切,结果表明各菌株间的酶切图谱基本相同,在供试的向日葵核盘菌菌株中不存在限制性酶切片段长度多态性.     

土壤磷素活化剂对大豆的增产作用

以吉林35号为材料研究了土壤磷素活化剂对大豆的增产作用.结果表明,土壤磷素活化剂可增加大豆的株高、单株粒重,降低病粒率,显著地提高大豆百粒重和小区产量.产量随磷酸二铵施用量的减少而增加,幅度为3.64%～17.25%,土壤磷素活化剂是生产绿色大豆、保护生态环境、提高大豆产量、增加经济效益、具有良好应用前景的生物菌肥.     

枸杞中番茄红素β-环化酶基因(LycB)的分离

以宁夏枸杞叶片为材料,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿法提取完整的总RNA,利用PolyATract mRNA Isolation System(Promega公司)分离mRNA,然后利用Universal Riboclone RcDNA Synthesis System(Promega公司)合成双链cDNA,在cDNA末端连接上EcoRⅠ接头,并与λExCell载体连接,利用Packagene Lambda DNA Packaging System进行包装,在国内外首次构建出滴度为2.78×105 pfu/ml,重组效率为88.1%的枸杞叶片cDNA文库。用Digoxigenin(DIG)标记龙胆草LycB探针,并对枸杞叶片cDNA文库进行筛选,获得5个LycB cDNA阳性克隆。释放质粒后,进行酶切鉴定,LycB阳性克隆cDNA插入片段的大小为2.1kb左右。为利用基因工程手段来调控类胡萝卜素的生物合成奠定了基础。     

两个马铃薯品种对两种抗生素的基础抗性研究

以马铃薯东农303和Favorita的无菌苗为材料,研究了无腋芽茎段诱导愈伤组织过程中对卡那霉素和头孢霉素的基础抗性。结果表明,两个品种对两种抗生素的基础抗性存在差异,东农303对两种抗生素均较Favorita敏感。用卡那霉素作为诱导愈伤组织的抗性筛选时,对东农303的适宜浓度为50mg/L;Favorita的适宜浓度为200mg/L。用头孢霉素作为农杆菌遗传转化的脱菌剂时,对东农303适宜浓度为100mg/L或略高;Favorita依菌液的浓度和活力不同,加入低于500mg/L的浓度不会影响无腋芽茎段愈伤组织的形成。     

白粉菌诱导的小黑麦异多附加系M17特异cDNA克隆的研究

实验以对小麦白粉病菌免疫的小黑麦异多附加系Ｍ１７（１Ｒ″６Ｒ″） 为材料, 一组接种小麦白粉病菌,另一组不接种。分别提取两组叶片的总ＲＮＡ,分离出ｍＲＮＡ,在体外反转录合成ｃＤＮＡ,克隆进λｇｔ１０ 载体,得到了１ 个含９－８ ×１０４ 个重组子的ｃＤＮＡ 文库。两组ｃＤＮＡ 双链经切口平移法制成总ｃＤＮＡ 探针,分别与ｃＤＮＡ文库杂交,通过差别筛选的方法,找到了６ 个与小麦白粉病菌诱导有关的阳性克隆ｃＤＮＡ 克隆。将这６ 个阳性克隆用Ｈｉｎｄ Ⅲ和Ｂｇｌ Ⅱ进行双酶切分析,通过比较２ 个克隆酶切片段的差异,从１ 个克隆中找出１ 个约２－０ ｋｂ 的片段,此片段中包含约０－８６ ｋｂ 的外源ｃＤＮＡ 的片段。     

番茄子叶、茎段及菊花愈伤组织对潮霉素敏感性的研究

分别以番茄东农704、东农708、东农709三品种的子叶、茎段及菊花30、33、34的愈伤组织为材料,用不同浓度的潮霉素进行敏感性试验.结果表明,随着潮霉素浓度的升高,番茄子叶、茎段的出愈率下降,菊花愈伤组织的褐化率增加.在以潮霉素作为抗性选择标记时,选择压力番茄以15 mg/L为宜,菊花3品种潮霉素的选择压力以15～20 mg/L为好.     

SeNHX1与GFP融合基因在酵母中表达及其耐盐性表现

通过构建盐角草的液泡型Na /H 反向转运蛋白SeNHX1基因的酵母表达载体,研究该基因对酵母耐盐性的影响.将SeNHX1基凶与荧光报告基因GFP融合,分别构建酵母表达载体pYES2.SeNHX1-GFP、pYES2-SeNHX1和pYES2-GFP,转化酵母W303,诱导3个载体表达,并测定含有不同表达载体的酵母生长曲线.结果表明.荧光显微镜下观察到带有报告基因GFP的2个转化子W303(pYES2-SeNHX1-GFP)和W303(pYES2-GFP)均可发出绿色荧光,而没有报告基因的转化了W303(pYES2-SeNHX1)不发出荧光;在含有0.8 mol/L NaCl培养基中培养0～48 h内,W303(pYES2-SeNHX1-GFP)和W303(pYES2-SeNHX1)菌株前期生长比对照菌株W303(pYES2-GFP)慢,但在培养48 h后则大大超过对照菌株.表明所构建带有目的基因SeNHX1的酵母表达载体已表达,且证实SeNHXl基因可提高酵母的耐盐性.     

利用农杆菌介导将抗逆相关基因GmDREB导入大豆的研究

转基因技术用于作物改良是分子育种技术的重要内容之一,分子育种技术与传统育种技术相结合方法来改良大豆品种的性状已展现出良好的应用前景.以大豆未成熟子叶为外植体,研究了5个基因型体细胞胚发生率以及未成熟子叶对PPT的基础抗性.用农杆菌介导法将含有GmDREB基因的prdGm-200质粒转化大豆未成熟子叶,并探讨了影响农杆菌大豆遗传转化的主要因素.结果表明,5个大豆基因型的未成熟子叶体细胞胚胎发生率存在显著差异,东农40和吉林35的胚胎发生率显著高于黑农41、九9568、九9313.东农40和吉林35未成熟子叶对PPT很敏感,PPT适合筛选浓度为2-3 mg L-1.农杆菌EHA101菌液浓度、浸染时间对转化效率均有影响,农杆菌菌液浓度为OD600=0:5-0.7、浸染时问10-20 min有利于转化.经PPT筛选,PCR、PCR-Southern检测得到抗性体细胞胚和抗性植株,初步证明GmDREB基因转入到大豆中.     

马铃薯东农303对两种抗生素敏感性的研究

[目的]探讨马铃薯东农303对两种抗生素敏感性,为进一步改良与利用东农303提供依据。[方法]以马铃薯东农303无菌苗的无腋芽茎段和单芽茎段为外植体,研究东农303在诱导愈伤组织和芽的过程中对卡那霉素或头孢霉素的敏感性。[结果]东农303无腋芽茎段对两种抗生素的敏感性存在一定差异,东农303以卡那霉素作为无腋芽茎段诱导愈伤组织的抗性筛选时适宜浓度为50 mg/L,作为单芽茎段芽生长的抗性筛选时适宜浓度为100 mg/L。东农303对头孢霉素也较敏感。无腋芽茎段在含头孢霉素100 mg/L的培养基中培养时芽的诱导率受到明显抑制。[结论]东农303对两种抗生素均较为敏感,对头孢霉素的抗性要高于卡那霉素。     

不同组分培养基及培养温度对安祖花叶片愈伤组织诱导率的影响

以安祖花嫩叶为试材,研究安祖花品种、培养基不同组分和培养温度对叶片愈伤组织诱导率的影响.结果表明,品种是影响安祖花叶片愈伤组织诱导率的主要因素;培养基成分和培养温度影响叶片愈伤组织诱导率,当6-BA浓度为0.5mg·L-1时,嫩叶形成愈伤组织能力较强;将硝酸铵用量减少至MS配方量的1/2时,叶片愈伤组织诱导率没有变化,但当硝酸铵和氯化钙用量同时减至1/2时,叶片愈伤组织诱导率提高;采用21～26℃变温培养较恒温培养更能促进叶片愈伤组织的形成.嫩叶在改良MS(1/2硝酸铵 1/2氯化钙) 0.5mg·L-1 6-BA 0.1mg·L-1 NAA培养基中,日温26℃,夜温21℃的变温暗培养,叶片愈伤组织诱导率高.