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91.
本研究旨在利用碱基编辑器在巴马猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast cells,PFFs)中对生长性状相关基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)进行高效、精确的定点编辑。通过PCR扩增和测序对巴马猪和大白猪的IGF2基因序列进行鉴定,构建靶向巴马猪的sgRNA-IGF2表达载体,进而通过细胞转染、混合细胞编辑效率检测、单克隆细胞筛选及基因型鉴定等技术手段研究不同碱基编辑器对猪IGF2基因靶点的编辑效率及突变类型。结果显示,巴马猪和大白猪IGF2基因第3内含子存在第3 072 bp处的单核苷酸多态性(SNP)位点,设计靶向巴马猪IGF2基因的单链寡核苷酸序列。单链寡核苷酸经退火后与BsaⅠ线性化的pGL3-U6-sgRNA质粒进行重组连接,构建sgRNA-IGF2表达质粒,重组质粒测序结果表明,sgRNA序列已经精确连入U6启动子和sgRNA骨架之间。将rA1-BE3、hA3A-BE3、hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F 4种胞嘧啶碱基编辑器分别与sgRNA-IGF2表达质粒共转染至猪胎儿成纤维细胞中,对混合细胞编辑效率进行检测结果表明,对于IGF2基因靶点,hA3A-BE3系列碱基编辑器C到T的编辑效率显著高于rA1-BE3(P<0.05)。流式分选、单克隆细胞培养及鉴定结果表明,虽然有71.43%的hA3A-BE3单克隆细胞已被编辑,但有42.86%的细胞存在插入和缺失(indels);hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F的编辑效率(56.86%和40.38%)虽低于hA3A-BE3(71.43%),但是indels的效率也较低(31.37%和21.15%)。测序结果分析表明,利用碱基编辑器高效筛选到IGF2基因靶点纯合点突变的单克隆细胞。碱基编辑器作为新的基因编辑工具,可以对猪基因组中与经济性状关联的SNP位点进行高效、精确的基因修饰,为加速猪经济性状的遗传改良提供理论与实践基础。 相似文献
92.
本文分析了乌当区阿栗杨梅产业发展的现状和存在的问题,并对阿栗杨梅今后的发展提出自己的建议,为乌当区整个杨梅产业及产品品质的提升提供参考与借鉴。 相似文献
93.
本文探讨了影响高校构建和谐校园建设的因素,及高校加强和谐校园建设的重要性和必要性,阐述了构建高校和谐校园长效机制。 相似文献
94.
世纪之交党中央做出了实施西部大开发战略的重大决策,为西部地区的经济发展带来了前所未有的历史机遇。大力调整和优化农业产业结构是西部大开发战略的重要内容之一,也是解决农牧民增收的重要途径。我们认为,在对农业结构进行战略性调整中.不可忽视加快畜牧业结构调整,促进畜牧业大发展。 相似文献
95.
96.
提出了一个基于模糊数据挖掘的入侵模型.异常检测的一个主要问题是正常模式随时间变化.如果一个实际的入侵行为稍有偏差就有可能与正常的模式相匹配,而异常检测系统则无法检测到这种入侵行为.为解决这个问题,本文利用模糊数据挖掘技术建立正常模式,并用一组模糊关联规则表示.在进行异常检测时,利用新的审计数据挖掘当前模糊关联规则,并计算其与正常模式的相似度,如相似度低于规定的阈值,使其产生入侵警报.最后,文中利用遗传算法优化模糊成员函数来选择其参数. 相似文献
97.
98.
采用PCR技术,从马铃薯叶片基因组DNA中扩增到了约0.6kb的马铃薯GBSS基因的5'侧翼序列,经序列同源性分析所克隆的序列与已知序列同源性为97.41%,含有启动基因表达所需的主要调控元件CAAT盒和TATA盒。构建该序列与GFP的融合基因植物表达载体pBIGGFP,并用基因枪转化法将pBIGGFP导入马铃薯无菌苗茎段、叶片和微型薯薯片,用荧光显微镜观察转化组织中GFP的瞬时表达,结果表明GFP在上述器官中都得到了表达,说明所克隆的约0.6kbGBSS基因的5'侧翼序列是具有启动基因表达的功能。 相似文献
99.
100.
对达日县畜牧业生产发展现状、草原建设、防灾基地建设情况及畜牧业生产中出现的问题,成因进行阐述,提出解决存在问题的措施。 相似文献