球孢白僵菌HFW-05的诱变筛选及其对烟粉虱若虫的毒力测定

对田间分离到的球孢白僵菌进行孢子紫外诱变选育，获得一毒力较高、性能稳定的突变株HFW-05。初步研究结果表明，该菌株在SDAY、PDA、PCA平板培养基上8d内的平均菌落直径生长速度分别为3．13、2．25、2．75mm／d。在感染浓度（1×10^8孢子／m1）下，HFW．05菌株对2龄烟粉虱若虫的6d平均累计致死率为96．4％；对1、2龄烟粉虱若虫的LC50分别为1．87×10^6孢子／ml、2．09×10^6孢子／ml，其毒力分别为出发菌株的2．68和3．2倍。     

双抗夹心ELISA方法检测转cry8Ca基因烟草的杀虫蛋白

为了检测转cry8Ca基因烟草的杀虫蛋白,建立了双抗夹心ELISA检测体系。确定多克隆抗体浓度为1:3200,酶标结合物浓度为1:400,pH 9.6碳酸缓冲液提取,pH7.4磷酸缓冲液包被,0.5%明胶-PBST封闭,TMB底物作用15min为最佳双抗夹心ELISA检测条件。采用这一检测体系,对转cry8Ca基因烟草植株进行检测,S12株系中的植株Cry8C蛋白含量最高,每克鲜重含有12.683-14.461ug,占总蛋白量的0.052%-0.062%。     

不同碳、氮营养对球孢白僵菌HFW-05的生长及胞外蛋白酶产量的影响

在基础培养基中添加14种碳源和11种氮源测定,球孢白僵菌HFW-05菌株的萌发率、生长速率、产孢量及胞外蛋白酶活性.综合各项指标得出,HFW-05菌株生长的最适碳源为蔗糖,产孢量与产酶量最大,分别为16.13×107孢子/cm2和117.38 μg/(min·mL);最适氮源为豆粕粉,其产孢量和酶活远高于对照和无机盐类,分别为15.62×107孢子/cm2和74.01 μg/(min·mL).除硝酸钾外,无机盐类在供试浓度上均对孢子萌发和生长有抑制作用.在各种碳(氮)源培养基中添加1%蛋白胨(葡萄糖)后,菌株的产孢量和产酶量均有所提高.结果表明,HFW-05菌株的产孢量和胞外蛋白酶之间具有一定的相关性.     

对铜绿丽金龟幼虫有活性的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定

为了发掘新的斑资源,从3种不同土壤类型的样品中分离得到了285株苏云金芽孢杆菌菌株。采用杀虫活性测定方法从中获得了13株对铜绿丽金龟幼虫具有高毒力的菌株。利用PCR—RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这13株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况。结果显示,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,而FTL53没有鉴定到已有的基因类型。这13株菌的伴孢晶体都含有分子量为130kDa的蛋白。本研究为不断发现新型的、具有高毒力的cry毒素基因奠定了基础。     

棉铃虫微孢子虫病的田间发生调查及其致病力测定

1998-2003年对棉铃虫的微孢子虫病的发生情况进行了调查,2000年田间棉铃虫为中重发生,微孢子虫病呈现发生流行的趋势,第4代幼虫感染率达到49.0%,2001年之后,微孢子虫的感染率逐渐减少。该微孢子虫只感染棉铃虫、甜菜夜蛾和菜青虫,不感染粘虫、玉米螟和家蚕。室内生测结果表明,该微孢子虫对棉铃虫具有较高的致病力,107孢子/mL的浓度接种2龄棉铃虫幼虫,16 d死亡率达到100%,接种3龄棉铃虫,16 d死亡率为87.8%,可以达到控制当代种群和压低下代种群的目的;105~106孢子/mL的浓度接种2龄棉铃虫幼虫,当代羽化率为32.2%,13.3%,下一代幼虫死亡率为88.9%,100%,可以控制下一代种群。     

一株对金龟子类幼虫具有杀虫活性的苏云金杆菌新分离株

从河北省土壤中分离获得一株苏云金杆菌新分离株ＨＢＦ－１,对其基本生物学特性和知性进行了研究。结果表明,该菌株对黄褐丽金龟幼虫具有特异高杀虫活性,对铜绿丽金电幼虫也表现出较高的杀虫活性。但对棉铃虫和玉米螟等鳞翅目幼虫,以及鞘翅目叶甲科的柳叶甲无杀虫活性。该菌株不产生β－外毒素。其生长对氨基酸需求的测定结果表明,异亮氨酸可抑制缬氨酸和亮氨酸的生物合成代谢,在异亮氨酸的存在下,该菌株对缬氨酸和亮氨酸具有     

不同土壤深度禾谷孢囊线虫的孵化特点

为明确小麦孢囊线虫在不同土壤深度的孵化特点,于2011年6月30日将田间分离的新鲜孢囊分别置于地下10cm、20cm和30cm土壤深度,同时利用自动温度记录仪测量相应土壤深度的温度变化,每周或两周检测1次孢囊孵化数量,连续检测3年。结果表明,在自然环境下孢囊主要在试验第二年的3-4月份孵化。在第2年3月份不同土壤深度中的孢囊孵化率具有显著差异。在3月31日地下10cm、20cm和30cm土壤中的孢囊孵化率依次为83.45%,61.92%和48.64%,三者之间具有显著差异。到4月上旬,地下10cm土壤中的孢囊孵化率高达92.45%,显著高于其他土壤深度中的孢囊孵化率,而地下20cm和30cm土壤中的孢囊孵化率分别为82.54%和81.04%,二者之间无显著差异。在试验第一年结束(6月17日)地下10cm、20cm和30cm土壤中的孢囊孵化率依次为95.22%、92.59%和94.82%,三者之间无显著差异。之后2年,孢囊持续孵化,但孵化数量很少。在试验结束时,孢囊内还有1.66%~2.45%的卵尚未孵化。说明当年形成的孢囊,其孵化主要发生在莅年的3-4月份,而且在早春,孢囊处于土壤深度越深,孵化率越低。     

马铃薯腐烂茎线虫RPA-LFD可视化快速检测方法的建立

 马铃薯腐烂茎线虫是为害我国甘薯和马铃薯的一种重要植物病原线虫,也是我国重要的检疫性有害生物。为实现对该线虫的准确、快速且可视化的检测,本研究以马铃薯腐烂茎线虫rDNA-ITS序列为靶标构建了重组酶聚合酶结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)的可视化快速检测体系。该体系可在39 ℃条件下15 min内特异性地完成对马铃薯腐烂茎线虫的检测,对A型(甘薯种群)和B型(马铃薯种群)单头线虫(J4)的检出底限均为3 125^-1头线虫,可以直接对土壤和甘薯茎中的马铃薯腐烂茎线虫进行检测,灵敏度可达1头(J4)/10 g土壤和1头(J4)/2 g甘薯茎组织。该体系操作简便、成本低廉、结果可视,可为马铃薯腐烂茎线虫的早期预警和口岸检疫提供技术支撑。     

球孢白僵菌HFW-05油悬剂对天敌昆虫的毒力测定

采用不同的生测方法测定了球孢白僵菌HFW-05油悬剂对四种捕食性天敌和一种寄生性天敌各虫态的毒力.结果表明:该油悬剂在常规用药浓度107孢子/mL时,对四种捕食性天敌卵的孵化基本无毒力,对各龄期幼虫的校正死亡率也均在17％以下,基本不会对种群数量造成较大影响,因此白僵菌油悬剂在常规用药剂量下和捕食性天敌是可以搭配使用的...     

棉铃虫微孢子虫的初步观察

1997～1998年,先后在邯郸、保定市郊进行棉铃虫疾病发生流行的田间调查,从采集的棉铃虫(Helicoverpa ormigera)幼虫体内发现了一种能引起寄主感病的原生动物——微孢子虫(Nosema sp.)。作者进行了初步观察和回接试验。 1 感染症状及孢子形态观察将棉田采集的第4代棉铃虫幼虫,经室内无菌饲养,发现