乳酸乳球菌工程菌株遗传稳定性的研究

本文研究了乳酸乳球菌工程菌株的遗传稳定性。采用工程菌的遗传稳定性通过目的基因的PCR鉴定、重组质粒的酶切鉴定、SDS-PAGE检测和0、10、20、30、40和50代各代菌种发酵生产大豆异黄酮能力进行检测;通过复制平板计数法计算质粒的丢失率。结果表明:工程菌株传代50次后质粒的丢失率为6%;PCR鉴定、重组质粒的酶切鉴定结果显示,重组载体携带目的基因可以传至50代,而未发生丢失;SDS-PAGE检测表明目的基因表达稳定。工程菌株重组质粒在50代内具有良好的遗传稳定性;50代内菌株发酵生产大豆异黄酮的能力没有显著差异;乳糖的浓度对工程菌株的遗传稳定性有一定的影响,在乳糖使用量达到20g/L以上时,有利于重组质粒的稳定性。     

大豆7S蛋白β亚基基因RNAi表达载体构建

以大豆7S蛋白β亚基基因为靶基因(基因编号:AB030840),利用RT-PCR克隆得到大豆7S蛋白β亚基基因核心序列398 bp,构建了以抗除草剂基因BAR为筛选标记的安全植物RNAi表达载体BAR-7αp-β.分子生物学检测表明7S蛋白β亚基基因的表达载体构建成功.研究结果为应用RNA干扰技术降低大豆过敏原,提高大豆蛋白品质奠定了基础.     

玉米成熟胚愈伤组织诱导的初步研究

试验以H99、综31和郑58三个玉米自交系的成熟胚为外植体,利用正交试验设计L9(34),对影响愈伤组织诱导的基因型、培养基、2,4-D浓度和Ag NO3浓度4个因素进行了研究。结果表明:各因素对初级愈伤诱导率影响大小为基因型培养基2,4-D浓度Ag NO3浓度;对胚性愈伤诱导率影响大小为基因型Ag NO3浓度2,4-D浓度培养基。诱导中最优组合为综31+10 mg/L Ag NO_3+MN+2 mg/L 2,4-D,继代中最优组合为综31+10 mg/L Ag NO3+MN+1 mg/L 2,4-D,其初级愈伤诱导率为87.41%,胚性愈伤诱导率为29.74%。     

大豆C2H2型锌指蛋白基因STF-2的克隆及结构分析

大豆是我国重要的粮油经济作物,是众多行业中必需的原材料。锌指蛋白是一种重要的转录因子,其中双锌指的植物C2H2型锌指蛋白多数与植物的非生物胁迫相关,可以利用生物技术手段提高作物对非生物胁迫的耐受能力。该文利用生物信息学和同源克隆的方法克隆得到了大豆C2H2型锌指蛋白基因STF-2,并且利用软件对其蛋白结构进行了初步分析。     

β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因在粟酒裂殖酵母中的表达及功能分析

【目的】克隆绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因,并在粟酒裂殖酵母细胞中进行表达分析。【方法】利用PCR技术,从绿色木霉中克隆纤维素酶β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,再通过XhoⅠ和NotⅠ2个酶切位点与粟酒裂殖酵母表达载体pREP5N连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后采用DNS法测定表达产物的酶学活性。【结果】PCR扩增得到2 380bp的bglⅠ基因序列,包括完整的CDS序列和信号肽序列,编码序列与已报道的里氏木霉纤维素酶基因序列相似性为100%;对酵母转化子进行诱导培养后,SDS-PAGE电泳检测得到大小为76ku的目的蛋白条带,在SP-Q01细胞中重组酶活性最高达155U/mL,最佳培养时间为72h,产生酶活的最适温度为60℃。【结论】成功克隆出了绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,该基因能在粟酒裂殖酵母细胞中成功表达,为绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的深入研究和应用奠定了基础。     

复合应用型人才培养教学理念、教学模式及应用思考

为了适应农林业发展对人才的需求,国家实施了"卓越农林人才教育培养计划",推动课堂教学改革是卓越人才培养的关键。学习国外高等农业院校课堂先进理念,构建适合中国农业高等教育课堂教学的新模式,即构建以学生为中心,以解决问题和实践需求为核心,依托学生基础知识和课堂讨论,培养学生团队合作能力,创建新知识并解决问题新型课堂教学模式,培养现代农业发展需要的卓越人才,提高课堂教学质量,改善传统课堂教学学生被动学习局面,教师作导演,学生作演员,形成主动教与学的新型课堂。     

植物RNA干扰表达载体构建方法的研究

从传统酶切—连接、同源重组、PCR技术为基础结合酶切—连接等方法,对近年来植物RNA干扰表达载体的最新构建方法进行综述。     

抗菌肽的研究进展及应用前景

抗菌肽是生物界中广泛存在的一类生物活性肽。它具有抗细菌、真菌、病毒和原虫作用,甚至对癌细胞也具有杀伤作用。本文就抗菌肽的来源、作用机理、抗菌肽的基因工程及应用前景做一简要的综述。     

玉米淀粉分支酶基因片段的克隆和植物表达载体的构建

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析,测定了DNA全序列。结果表明：克隆片段全长为935bp。将反义 正义基因片段插入到pB1121 35S启动子下,构建成表达质粒pCJSBE2b。通过花粉管通道法将其导入玉米自交系,获得了转基因植株。     

植物叶绿体遗传转化及研究进展

叶绿体遗传转化与传统的细胞核遗传转化相比具有许多独特的优点：外源基因表达效率高,可同时转化及表达多个基因,由于通过母性遗传,因此没有基因沉默现象及位置效应,也不会造成外源DNA的扩散。目前已经有超过四十多个外源基因整合到烟草等作物的叶绿体基因组中,表现出理想的农艺性状或作为生物反应器表达高水平的生物疫苗。本文对植物叶绿体基因组转化技术的原理和优点,外源基因导入叶绿体基因组的方法,以及目前叶绿体转化研究的最新进展进行了综述,并对其应用进行了展望。