香菇银染mRNA差异显示体系的建立及条件优化

为建立适用于研究香菇(Lentinula edodes)分化中基因表达差异的银染差异显示方法,以香菇突变株fbd1及其出发菌株98411的菌丝体和子实体为材料,采用Trizol法提取总RNA,优化了反转录和PCR扩增中5项反应参数,再经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和银染显示差异条带.试验结果表明,适宜分析香菇mRNA差异的反转录体系中RNA投入量为0.5～1 μg、dNTP浓度为20 μmol/L,PCR扩增反应MgCl2、dNTP和Taq酶分别为2 mmol/L、200 μmol/L和1.0 U,此条件下,目标条带清晰且重复性好.     

灵芝原生质体诱变筛选富硒高生物量菌株

研究了灵芝(Ganoderma lucidum)CJXN-9802的原生质体形成和影响原生质再生的各因素,其中包括酶,温度,渗透压调节剂和菌龄等.并对灵芝原生质体进行了紫外照射诱变,筛选获得了快速生长的诱变菌株.诱变株之一的灵芝CJXN-980222菌株硒含量有很大的提高,比出发株提高9.4%,生物量比出发株高14.3%.     

双孢蘑菇储藏中的褐变及相关酶活性研究

测定了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)储藏中的色差,总酚含量及多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase, PAL)的活性变化.结果表明,双孢蘑菇储藏期间L值逐渐变小,褐变度不断增加.总酚含量在15 ℃储藏的第1～4天升高,之后逐渐下降,4 ℃储藏时,总酚含量变化不大.PPO在15 ℃储藏时活性水平较4 ℃储藏时高,在15 ℃时,第1天就显著上升,第3天达到最高值后下降,而4 ℃储藏时在第2天急剧上升,而后下降.双孢蘑菇在15 ℃和4 ℃储藏时PAL活性在第1～2天升高,而后的变化无规律.根据实验结果,双孢蘑菇中PPO与PAL可能参与了酶促褐变,其中PPO活性可能是引起双孢蘑菇褐变的主要因素.     

不同覆土基质理化性状分析及其对蘑菇生长影响研究

通过以泥炭、田土、河泥砻糠土3种覆土材料理化性状的测定及对蘑菇产量的影响研究,结果显示,泥炭的持水率最高,达84.5%;河泥砻糠土居中;田土最低,为27.5%。泥炭、河泥砻糠土的空隙率(AFP)都比田土高,其中,河泥砻糠土达22.5%;田土仅2.9%。在1 750 mm水柱的牵力下,泥炭的水分释放量最大为45.9 ml;河泥砻糠土水分释放量居中,为24.1 ml;而田土水分释放量相对较低,为19.2 ml。3种材料EC、pH值的变化试验发现泥炭覆土后覆土层的EC呈上升趋势,而pH值呈下降趋势较其它2种覆土材料明显。在蘑菇菌丝生长期即发现覆土层微生物个数以田土中细菌的增幅最小。3种材料覆土结果,蘑菇产量则以泥炭为最高,达9.5kg/m2;其次是河泥砻糠土,产量达9.0 kg/m2;田土最低,产量为6.9 kg/m2。研究结果为开发优良的覆土材料提供了理论根据。     

草菇噬菌体基因文库的构建

采用CTAB/NaCl法提取草菇基因组DNA,通过限制性内切酶Sau 3AI对纯化的草菇基因组DNA进行部分酶切,获得大小为20kb左右的DNA片段.这些DNA片段再次纯化后,与经Eco R I和Bam H I双酶切消化的Lambda GEM-11噬菌体DNA载体臂相连,以大肠杆菌(E.coli)LE392为寄主细胞,构建了草菇(Volvariella volvacea)基因文库,所构建基因文库效价为1.5×105 pfu/mL.     

根癌农杆菌介导的桃幼胚转化实验参数研究

以桃幼胚作为根癌农杆菌介导转化的受体,通过对GUS基因瞬时表达率的分析,研究此转化体系的最佳实验参数。实验结果表明,预培养时间、感染时间、共培养时间和根癌农杆菌诱导物AS等对转化效率都有一定的影响。预培养1d、感染15min、共培养42h和不添加AS时GUS瞬时表达率最高。     

根癌农杆菌介导的双孢蘑菇转基因体系的建立

构建了 gpd 启动子驱动的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)双元表达载体,研究了受体材料、农杆菌浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度和共培养时间对转化效率的影响.结果表明:不同受体的转化效率有较大的差异;以直径2～4 cm 的菌丝球为受体,当农杆菌菌液D600为0.2,侵染...     

转录因子OPBP1和OsiWRKY基因的超表达提高水稻的耐盐及抗病能力

采用基因枪法将耐盐的OPBP1和抗病相关的OsiWRKY转录因子共转化入水稻材料秀水11,经PCR及分子杂交分析确认目的基因已整合到水稻基因组中并超量表达。抗病性测定表明,与未转基因水稻相比,转基因水稻植株表现出对稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）和白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae）的较好抗性。抗盐能力检测结果表明,在同等盐胁迫条件下转基因株系生长较快,叶绿素含量和生物学产量都显著高于未转基因对照。上述结果表明,OPBP1和OsiWRKY基因在水稻中增强表达可以提高水稻的耐盐及抗病能力。     

高温型双环蘑菇新品种‘夏秀2000’

 摘　要: ‘夏秀2000’为高温型双环蘑菇杂交种, 适宜出菇温度为26～34℃, 成长中的子实体耐36～38℃高温, 适宜夏季高温期栽培; 菌丝爬土能力强, 菇床结实率高, 出菇整齐, 平均产量819 kg/m2 ; 子实体圆整, 质地坚实紧密, 耐机械损伤, 不易褐变, 较耐贮运。     

香菇EST-SSR标记的开发及应用

从NCBI中下载了12 184条香菇(Lentinula edodes)表达序列标签(expressed sequence tag,EST)序列,处理后得到全长3 681 177 bp的4 684个Unigene.在其中共发掘出142个简单重复序列(simple sequence repeat, SSR),分布于120条EST中,分布频率为2.99% (平均分布距离:25.924 kb).其中,单、二、三核苷酸重复是主要的重复类型,A/T,AG/CT,ACG/CTG是单、二、三核苷酸的主要重复基序,分别占所有EST-SSR的23.23%、21.83%和10.56%.利用引物设计软件PrimerPremier5.0设计了40对引物,并利用6%变性聚丙烯酰胺凝胶在18个香菇品种中进行检测.其中,22对引物为多态性引物,多态率为55%.应用NTSYS软件的聚类方法分析表明,18份材料遗传相似系数范围为0.375～0.984,与前人研究结果相符.