基于Taqman-MGB探针的猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法的研究

应用MGB荧光RT-PCR技术对猪瘟病毒野毒株进行实时定量检测,以实现对猪瘟病毒野毒株与疫苗株的鉴别诊断。以猪瘟病毒5’端非编码区为扩增靶区,通过鉴别诊断位点的筛选、引物、探针和反应条件的优化,建立了猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法的检测灵敏度为10拷贝/反应或3.0 TCID50/反应;对猪瘟病毒野毒株的检测结果均为阳性,而对猪瘟病毒疫苗株和其他猪源病毒的检测结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性;对515份临床样品的检测结果表明,该方法与RT-nPCR测序法的检测符合率为98.3%;猪瘟病毒人工感染猪实验结果表明,猪瘟野毒感染猪发病前2-4天即可被检测出阳性,疫苗免疫株检测结果始终为阴性。     

猪高热病综合症流行病学调查与病原分离鉴定

对2006～2007年湖北省部分地区的猪高热病综合症的流行情况进行了实地调查和实验室诊断.共调查7个地市147个养猪场和养猪户,发病猪有67 040头,发病死亡27477头,发病死亡率41%.273份病料PCR检测呈阳性结果,其中猪瘟的阳性率为41%(86/210)、蓝耳痛为83.2%(213/256)、伪狂犬病为33.8%(48/142)、猪圆环病毒为70.5%(189/268).从采集的病料中分别分离到3株蓝耳病病毒、2株猪圆环病Ⅱ型病毒和2株猪流感病毒;分离到25株猪链球菌、36株大肠杆菌、13株副猪嗜血杆菌和29株巴氏杆菌等病原菌.     

禽霍乱·新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅲ)——疫苗对鸭和鹅的安全性及免疫效力试验(英文)

[Objective] The aim of this study is to provide theoretical basis for immunizing waterfowls(duck and goose)with the inactivated oil emulsion binary vaccine against Newcastle Disease(ND)and Fowl Cholera(FC).[Method]Bacterial liquid from solid culture media inoculated avian Pasteurella multocida(APM)type A and allantoic fluid from embryonic eggs infected with Newcastle Disease Virus(NDV)attenuated strain La Sota were mixed and inactivated by formalin to prepare 5 batches of inactivated oil emulsion binary vaccine,which were then used for the safety and immune efficacy test on duck and goose.[Result]Immunized ducks and geese didn’t performed any adverse reactions in the safety test of the 5 batches of vaccine;the immune efficacy test showed that ND-HI antibody titers of ducks and geese were no less than 4 log2 three weeks after inoculation,and the protection rates against NDV and APM were 100% and 66.7%-83.3%,respectively.[Conclusion]The binary vaccine against ND and FC is safe and reliable for duck and goose,and can provide them with sufficient immunity protection against ND and FC.     

新城疫V4耐热弱毒株的研究进展

新城疫是一种严重威胁禽类健康的烈性传染病.本文对鸡新城疫病毒V4耐热弱毒株的分离培育、免疫原性、耐热性、安全性及其相关机制的国内外研究进展进行了综述,以期对新城疫的综合防控研究提供参考.     

光动力学疗法诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡及细胞Caspase-3和Caspase-8活性的变化

本文研究了光动力学疗法(PDT)促进犬乳腺肿瘤细胞凋亡的变化.通过不同剂量的光敏剂(HMME)和不同剂量的氦氖激光照射,用MTT法测定细胞的抑制率,确定抑制细胞生长的光敏感剂和激光照射的最佳剂量.采用最佳剂量组合作用细胞,对照射后不同时间点的细胞通过荧光显微镜(AO/EB染色)及透射电镜观察细胞的形态学变化;采用DNA LADDER法检测细胞凋亡;采用分光光度法测量照射后不同时间点的细胞内Caspase-3,Caspase-8的变化.研究表明光动力学的最佳剂量组为光敏感剂为20μg/mL,激光功率为2.8 J/cm2.光动力学疗法作用细胞后,在荧光显微镜下观察出典型的细胞形态,并且随着光照时间的加长凋亡率逐渐增加,在透射电镜下细胞呈典型的凋亡形态,并且随着光照时间的延长凋亡的程度逐渐增加;细胞内Caspase-3,Caspase-8活性随照射后时间的增加其活性逐渐增强.由此可见光动力学疗法可有效的诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡,Caspase-3参与了细胞的凋亡过程,在细胞凋亡过程中起到一定的作用.     

4株鸭疫里默氏杆菌的PCR快速鉴定及药敏试验

从湖北省武汉郊区和监利市两地的发病雏鸭分离纯化到4株鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA),通过对该菌形态学鉴定、生化试验、细菌16S rRNA的快速鉴别诊断证明了4株细菌均为鸭疫里默氏杆菌.将不同来源的菌株各选一株HBSPX和HBJL,进行了16S rRNA目的片段的扩增并测序,测序结果表明这两株细菌与其他鸭疫里默氏杆菌的16S rRNA同源性高达99.4％和98.9％.药敏试验结果表明,HBSPX株对阿莫西林、先锋Ⅵ高度敏感,但HBJL株对氯洁霉素和红霉素高度敏感.     

用厌氧、好氧污泥培养好氧颗粒污泥的比较

本实验考察两种接种污泥源--活性污泥和厌氧颗粒在培养好氧颗粒污泥过程中的理化特性的差异.实验结果表明,在颗粒化过程中接种污泥MLVSS的增殖率均呈现先为负值然后逐渐上升稳定在一定水平直到颗粒成熟以后基本保持不变的趋势;随着环境条件的改变,ECP含量呈现规律性变化,都经历了先增加后降低最后趋于稳定的趋势,厌氧颗粒ECP含量较少且在培养过程中变化幅度较小,可能与厌氧颗粒含有较多的惰性物质,向好氧颗粒污泥转化过程污泥形态不变种群结构逐渐转化的特征有很大关系;两种成熟的好氧颗粒的异养微生物和硝化菌的活性都没有明显差异.     

紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡和细胞ROS及SOD失衡的研究

为研究紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)凋亡及对氧化还原平衡的影响,本实验以不同浓度的紫杉醇处理细胞,采用台盼蓝排斥试验和MTT法检测细胞活性,并进行丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双荧光染色以及在透射电镜下观察CHMm细胞凋亡和形态学变化,并检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)等反映细胞内氧化还原功能的指标。结果显示:在紫杉醇的作用下,CHMm生长受到不同程度的抑制,引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态;ROS和MDA含量增加,SOD和CAT酶活性降低,细胞内出现氧化还原失衡。表明紫杉醇能够抑制CHMm细胞生长,打破氧化还原平衡,诱导细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性。     

湖北地区鸭疫里氏杆菌体外耐药性测定

采用纸片扩散法对从湖北地区分离鉴定的86株致病性鸭疫里氏杆菌进行了体外药物敏感性测定.结果表明,耐药性高的药物为复方新诺明、青霉素、红霉素、呋喃唑酮和杆菌肽,耐药率分别高达100%、100%、88%、70%、67%;其次为环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星,耐药率分别为40%、35%、35%;敏感度高的药物为氟苯尼考、头孢噻...     

湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对湖北省部分地区鸭疫里氏杆菌(RA)进行分离鉴定.应用胰蛋白大豆琼脂(TSA)培养基的分离培养及染色试验、生化试验、PCR鉴定,得到86株RA.染色观察各地RA分离株的细菌形态一致,符合RA特征;生化试验显示86株RA的生理生化特征相似,基本符合RA特征;应用建立的PCR技术均可从这些菌株扩增到RA的特异性基因片段.通...