中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达研究

构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequencetag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因。进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237 nt、可以编码78个氨基酸的ORF。推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽。该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%。将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达。SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的。通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白。     

浅论昆虫产业开发

昆虫是目前地球上最大的尚未被人们充分利用的资源，基于这一认识，本文扼要综述了国内外昆虫产业的产业类别和技术开发近况，并就通向成功与繁荣的道路作了讨论。     

意大利蜜蜂蜂毒透明质酸酶基因的克隆与序列分析

从意蜂毒腺抽提总RNA,用RT-PCR获得蜂毒透明质酸酶(AmHya)基因,其核苷酸序列全长为1 149 bp.将AmHya氨基酸序列与中蜂蜂毒透明质酸酶(AcHya)和其它5种透明质酸酶(Hya)氨基酸序列比较,结果显示,AmHya与 AcHya的同源性最高(91%),同时对7种Hya作了分子结构与分子进化分析.     

半合成饲料的蛋白质含量对家蚕四龄幼虫的影响

用８种脱脂大豆粉和纤维素粉含量不同的半合成饲料饲养４龄蚕，结果表明取食蚕蛋白含量为７．７９＾和１１．６９％饲料的幼虫分别仅存活５．７天和６．８天，取食蛋白质含量大于１５．５９％的有正常蜕皮，随着饲料蛋白 含量从１５．５９％增至３８．９７％。４龄历期从８．７天缩短至６．７天，平均干物食下量和消化量分别从每蚕４８５ｍｇ和１４９ｍｇ降至２２４ｍｇ和１２７ｍｇ，近似消化率则从３２．０４％增至５２．０５％。     

棉铃虫核型多角体病毒分子生物学和基因工程研究进展

棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)是棉铃虫专一性病原物,隶属于杆状病毒科核型多角体病毒属.对其分子生物学和基因工程的研究主要包括以下几个方面:测定了HaSNPV G4株和C1株基因组核苷酸全序列,并与其它病毒进行了同源性比较;研究了HaSNPV部分基因的结构、转录、表达及其功能.构建了HaSNPV Bac to Bac杆状病毒表达系统;重组病毒杀虫剂的研究为HaSNPV大面积防治棉铃虫展示了广阔的前景.随着棉铃虫核型多角体病毒分子生物学和基因工程研究的不断深入,重组病毒杀虫剂将在棉铃虫综合防治中发挥更为重要的作用.     

饲料蛋白质含量对家蚕茧质和饲料效率的影响

<正> 明确饲料蛋白质含量对家蚕茧质的影响以及对饲料转化为茧、茧层和卵的效率的影响,对于选择适宜的饲料蛋白质含量水平,提高人工饲料生产效率和经济效益,具有很大的实用价值,并可为选育桑树新品种提供参考。本文就饲料蛋白质含量对茧质、饲料效率和氮素利用的影响进行探讨。     

海洋双RNA病毒(MABV) VP2和VP3基因在昆虫细胞中的高效表达

海洋双RNA病毒(Marine birnavirus, MABV) 可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABV Y-6株系A片段的cDNA，进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642 bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体，在昆虫细胞中对VP2e 和VP3进行了表达。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明，VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8％和8.2％。用His Tag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Western blot检测，结果表明表达产物具有很好的抗原性。同样，用His Tag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Western blot检测，证明融合蛋白表达正确，并且表达产物可溶，易于纯化。实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础。关键词: 海洋双RNA病毒； VP2e; VP3; 杆状病毒表达系统; 表达纯化     

杆状病毒包涵体蛋白基因的进化

在分析了ＨａＳＮＰＶ和ＥｏＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过ＭＡＬＩＧＮ程序,比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白序列,ＨａＳＮＰＶ与ＨｚＳＮＰＶ亲缘关系十分接近,两ａａ序列同源性达９７．６％,ＥｏＳＮＰＶ与黄极毒蛾核型多角体病毒的同源性为最高,ｎｔ序列的同不原性为８３．０％,ａａ序列达９４．７％与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高,ｎｔ序列同源性为７２．６％－８１．９％,ａ     

西方蜜蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ等位基因频率与经济性状的相关性

研究了西方蜜蜂(Apis mellifera L.)10个蜂种的苹果酸脱氢酶Ⅱ等位基因频率和蜂蜜、蜂王浆、蜂花粉、蜂蜡和蜂毒的产量,并分析了3个等位基因频率与5个经济性状的相关性。等位基因a频率与5个经济性状均呈负相关,其中与蜂蜜产量的相关系数最大,达显著水平(P<0.05);等位基因b频率除与蜂蜜产量呈正相关外,与蜂王浆、蜂花粉、蜂蜡和蜂毒的产量均呈负相关,但相关系数较小,没有达到显著水平。等位基因c频率与5个经济性状均呈正相关,而与蜂王浆产量的相关系数最高,达极显著水平(P<0.01)。因此MDHⅡ等位基因频率有可能用来作为蜜蜂生产性能的生化遗传标记。     

茶尺蠖核型多角体病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据茶尺蠖核型多角体病毒（Ectropis oblique nucleopolyhedrovirus, EoNPV）基因序列设计一对引物,并从感染该病毒的虫体中提取EoNPV基因组DNA,进行PCR扩增,将该基因片段与载体pMD18-T连接,转化入大肠杆菌TG1中,经单克隆菌落筛选及测序鉴定后得到重组质粒,以该质粒为荧光定量PCR标准品模板稀释后建立标准曲线。构建的标准曲线线性关系良好,相关系数为0.989,检测范围为10³~10⁸拷贝/µL,特异性和重复性较好。该方法可以准确地判断出病毒拷贝数,为茶尺蠖核型多角体病毒在虫体内增殖动态的研究和病毒制剂的质量检测提供了方法依据。