剑麻ISSR反应体系的建立及其优化

为利用ISSR分子标记进行剑麻遗传多样性分析和种质资源鉴定,分析了剑麻ISSR反应的主要参数对反应体系的影响。结果表明:25μL的反应体系中含150ng的模板DNA、10μLTaq聚合酶MIX、0.5μmol/L引物。优化的反应程序:94℃预变性5min;94℃变性30s,设定温度(51~60.3℃)退火45s,72℃延伸45s,循环35次;然后72℃延伸10min;筛选到16条适合剑麻扩增的ISSR引物。     

柱花草炭疽菌突变体库致病缺陷转化子筛选 及T-DNA插入位点侧翼序列分析

比较了接种病原菌侵染柱花草的几种方法的效果,选定出最佳的初筛和复筛方法,进而对1 230 个转化 子进行筛选,得到致病力缺陷菌23 株,其中致病力减弱的菌株18 株,致病力完全丧失的5 株。利用TAIL-PCR 扩增 致病力丧失突变子t-2430 的T-DNA 插入位点侧翼序列,得到大小为476 bp 的一段序列,BLAST 比对已测序炭疽菌 基因组,发现401nt 和数据库的Contig464的部分序列完全一致,进一步对该段序列的功能进行预测,表明T-DNA 插入 在一预测基因的启动子区域,并且这个预测基因与稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae）的天冬氨酸转氨酶(XP_003719674.1）同 源性为79%。     

柱花草茎段组织培养研究

以‘热研2号’柱花草茎段为外植体,研究不同激素种类及组合对试管苗诱导、增殖和生根的影响。结果表明：将带芽茎段接种在MS＋6-BA 5.0 mg/L＋GA3 0.5 mg/L的培养基中腋芽诱导率最高可达90%;最佳不定芽增殖培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L,其分化率达100%;最佳生根培养基为MS＋IBA 1.0 mg/L＋IAA 1.0 mg/L。综上所述,该研究结果改变了丛生芽的产生途径,缩短了分化时间,提高了增殖速度,是快速繁殖柱花草苗的有效方法。     

2013年中国剑麻产业形势分析及发展趋势

概述世界剑麻作物10年来的产业概况、发展特点等,分析中国剑麻产业2013年生产、经营、加工、市场等情况,阐述剑麻产业发展特点、存在问题和制约因素,预测2014年剑麻产业形势,提出促进中国剑麻产业发展的政策建议。     

土壤中乐果降解菌的筛选及其特性研究

采用室内培养方法,从长年施用乐果的土壤中分离筛选出一株能在高浓度乐果中生长且能以乐果为惟一碳源的细菌菌株L-39。结果表明,该菌株对乐果的平均降解量为1 306.33 mg.L-.160h-1。经鉴定,该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),即绿脓杆菌。该菌株能耐受浓度达10 000 mg.L-1的乐果农药,其最适生长温度为28℃左右,在(18￣42)℃的广泛温度范围内仍生长良好,最适生长pH值为7.0左右,同样具有广泛的pH值生长范围(pH6.0￣9.0)。初步确定菌株L-39具有广谱的降解有机磷农药的能力,因其在基础培养基摇瓶培养中可降解辛硫磷446 mg.L-.15d-1,乙酰甲胺磷31 mg.L-.15d-1。田间小区试验表明,菌株L-d的液体摇瓶发酵菌制剂在土壤中有明显的有机磷农药降解效果(15.0 mg.kg-.17d-1),即乐果去除率为63.6%。     

海南白蚁共附生放线菌的分离鉴定及其抗热带作物病原真菌活性研究

白蚁（Isoptera）的筑巢和觅食活动主要在土壤及腐烂的木材上进行,所以白蚁极易受到来自环境病原微生物的侵害。因此,白蚁需要依赖共附生微生物菌群形成防御体系,放线菌是其中一个重要的类群,且放线菌能产生具有抗菌活性的次级代谢产物。但是白蚁共附生放线菌能否对热带作物的病原真菌有抑制活性有待研究。为了挖掘在热带农业绿色健康发展中具有应用潜力的海南特色农用放线菌资源,以海南白蚁共生放线菌为研究对象,利用平板分离法从采集的健康白蚁体内分离纯化放线菌,利用平板对峙法筛选生防菌株;通过分子生物学确定其分类地位;平板对峙法研究拮抗菌株的抗菌稳定性、持效性和广谱性;滤纸片法研究抑菌物质的热稳定性。结果从海南白蚁体内分离得到1株拮抗活性较好的放线菌菌株W7,系统发育树分析结果表明该放线菌与链霉菌属（Streptomyces）亲缘关系接近。菌株W7的抗菌活性持久性强,平板接种30 d后仍对植物病原真菌具有抑菌活性,抗菌稳定性好;菌株W7抑菌谱广,对16株植物病原真菌有不同程度的抑菌活性,其中对芒果胶孢霉（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）、香蕉炭疽霉（Colletotrichum musae）、辣椒棒孢霉（Corynespora cassiicola）、豇豆瓜果腐霉[Pythium aphanidermatum (Edson) Fitzp]抑制作用较强,对芦笋拟茎点霉（Phomopsis asparagi）、荔枝疫霉（Peronophythora litchi）抑制作用较弱;菌株W7发酵粗提物有较好的热稳定性,但是抑菌率会随着水浴温度的增高而降低。本文首次对海南白蚁共附生放线菌进行了分离鉴定,并从中筛选得到1株具有抑制多种热带作物病原真菌活性的生防菌株,为高效生防菌剂的研发提供新资源。     

西沙海绵共附生放线菌ITBB-ZK-a5的分离鉴定及抗菌活性研究

海洋放线菌因其所处环境特殊，在生理性状和遗传背景方面均具有独特的性质，因此海洋放线菌具有产生特殊代谢产物的巨大潜力。本研究以西沙海绵为研究对象，挖掘其具有抑菌活性的共附生放线菌资源。首先，利用平板分离法从海绵样品中分离纯化出一株活性放线菌菌株ITBB-ZK-a5，对其进行16S rRNA基因测序，结合构建的系统发育树和菌落形态特征，确定该菌株为链霉菌。其次，采用平板对峙法研究菌株ITBB-ZK-a5对植物病原真菌的抑菌广谱性和持效性。结果表明：该菌株对供试的16株病原真菌均有较好的抑菌活性，抑菌谱较广，且对峙14、30 d仍具有活性，抑菌持效性较好；为了进一步验证该菌株平板通过产生活性物质抑制病原菌生长，对菌落边缘的无菌琼脂块进行抑菌活性研究，结果表明抑菌率与菌落距离呈负相关，说明放线菌可能通过向平板中分泌活性物质以抑制病原菌的生长。该菌株连续转接5代后，仍具有较好的世代稳定性。再次，利用大米固体培养基对菌株ITBB-ZK-a5进行发酵，乙酸乙酯萃取浓缩得到提取物，通过滤纸片法对发酵粗提物进行光稳定性和热稳定性研究，结果表明，随着水浴温度升高和紫外照射时间的增加，菌株ITBB-ZK-a...