禽流感琼脂扩散试验抗原制备方法的研究

禽流感琼脂扩散试验(AGP)是用禽流感病毒的内部抗原(RNP)检查相应的抗体,是特异性血清学诊断方法,它较鉴定亚型特性的血凝抑制试验(HI)方法具有较广泛的应用价值。目前普遍应用它检查禽流感。一些国家制作禽流感的琼扩试验抗原主要是用人工接种鸡胚的尿囊膜,将其制成乳剂,经反复冻融后作为抗原,其中混有尿膜组织及血液成分,因此,在一定程度上干扰试验结果。我们在试验中,用接种的鸡胚尿液制造抗原,获得了良好的结果,现报告如下。     

鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试验方法的研究

研制用于鸡传染性法氏囊病诊断的琼脂扩散试验抗原,我们曾使用过感染鸡的法氏囊,但由于在实践中难以得到可以用于人工感染的健康鸡,所以给生产抗原带来很大的困难;即使将来能得到 SPF 鸡,用法氏囊病变组织制造抗原,产量也会受到一定限制,成本也十分昂贵。为此,我们研究了用     

低温胁迫对水稻苗期根系影响的蛋白质组学研究

为了从蛋白质水平揭示水稻苗期响应低温胁迫的分子机理,以耐冷性强的东乡野生稻和冷敏感品种中嘉早17为材料,于5℃低温处理0,1,2,3 d后分别测定根系活力、过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量等生理指标。随后利用iTRAQ技术对5℃低温处理3 d后水稻幼苗的根系差异蛋白质组进行分析。通过生理指标分析,5℃低温处理影响东乡野生稻和中嘉早17的根系生理指标,且在低温处理第3天,两者已出现明显差异。通过差异蛋白质组学分析,与常温(25℃)相比,东乡野生稻经低温处理后共鉴定到167个差异蛋白,其中,上调表达蛋白61个,下调表达蛋白106个;中嘉早17经低温处理后共鉴定到261个差异表达蛋白,其中,上调表达蛋白122个,下调表达蛋白139个。通过GO功能分析,这些差异蛋白质主要参与代谢、细胞和单机体过程,主要涉及细胞及细胞成分,主要起着结合和催化作用。通过KEGG分析,这些差异蛋白质主要参与代谢、次级代谢产物合成和碳代谢等代谢通路。通过对东乡野生稻和中嘉早17中均发生差异表达的29个蛋白质的进一步分析,了解到两者受低温危害后根系部分蛋白质的表达动态。本研究鉴定到的差异表达蛋白质为进一步阐述水稻耐冷机理及耐冷基因的挖掘提供理论依据。     

表达禽流感病毒核蛋白基因重组禽痘病毒的构建及其免疫保护性研究

 从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1)核蛋白 (NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段 ,将其亚克隆到pSY5 38质粒 ,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5 38质粒 ,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段 ,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY6 81,从而构建出表达核蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体pSY(NP +LacZ)。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S FPV 0 17的鸡胚成纤维细胞 ,在X gal存在的条件下 ,利用蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化以及PCR、Western blot鉴定 ,结果证明 ,获得了能高效表达AIVNP蛋白的重组禽痘病毒rFPV NP。SPF鸡体内的免疫保护试验结果表明 ,它能够诱导机体产生较高水平的NP特异性抗体 ,并对H5N1和H7N1这 2种亚型高致病力禽流感病毒的攻击提供一定的保护。     

禽流感致病的分子基础及强弱毒鉴别诊断

高致病力禽流感(HPAI)被国际兽疫局列为Ⅰ类烈性传染病.我国农业部也将该病列为一类烈性传染病.高致病性禽流感一旦暴发会给养禽业带来毁灭性的危害,1983年美国禽流感和1995年墨西哥禽流感造成相当于现今10多亿美元的经济损失.     

禽流感与大肠杆菌混合感染的综合防制

禽流感(Avian Infuenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病,疾病的严重程度取决于病毒的毒株以及被感染的禽种、日龄、性别、有无并发症等因素.目前,在我国部分地区发现有中等毒力以下H9亚型禽流感的流行,并已对我国养禽业造成了一定的危害,其典型症状包括呼吸道症状、产蛋率、受精率及孵化率的下降,同时,发生禽流感的鸡群除了与鸡传染性法氏囊,传染性支气管炎、减蛋综合症等病毒的混合感染外,几乎无一例外地存在大肠杆菌的感染史[1],禽流感与大肠杆菌的混合感染给诊断和防制工作带来很大困难,并造成了更为严重的经济损失,本文将就禽流感和大肠杆菌的流行及特点、预防、治疗和其他综合防制措施等方面入手,简述禽流感与大肠菌混合感染的综合防制.     

不同病毒血凝素的比较与稳定性研究

血凝素是某些病毒的重要功能蛋白之一,起着重要的生理功能。通过NCBI获得不同病毒血凝素序列,使用Clustal W 1.81软件比较发现不同病毒血凝素氨基酸序列相似性低,二级结构差异显著。在不同温度和pH下,发现病毒血凝素具有温度稳定性,但受pH的影响较大,在pH大于5或者小于2时血凝素较为稳定,在pH为3～5血凝素稳定极差。     

禽流感高免球蛋白的制备及应用研究

应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。     

重新审视禽流感

禽流行性感冒 (简称禽流感， Avian Influenza,AI)是由 A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，被国际兽疫局定为 A类传染病，同时被列为国际生物武器公约动物传染病名单和中国进口动物检疫的严重疾病之一，可表现为急性致死性疾病到轻度呼吸系统疾病到亚临诊等多种形式。在禽流感发现流行以来的一百多年中，世界各地都有特定毒株引起的禽流感暴发和流行，造成了巨大的经济损失，禽流感在我国出现的时间虽短，但已经并正在给我国养禽业造成一定的经济损失，很可能成为威胁养禽业的头号大敌。 　　本文将就禽流感在世界各地及中国范围内的暴…