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41.
鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101~108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。 相似文献
42.
43.
禽流行性感冒 ,简称禽流感 (AvianInfluenza ,AI)是由正黏病毒科、流感病毒属、A型流感病毒所引起的禽类的感染和/或疾病综合症 ,被国际兽疫局确定为I类烈性传染病 ,并被列入国际生物武器公约动物传染病名单。OIE根据对家禽所造成的疾病程度 ,将禽流感划分为高致病禽流感HPAI和低致病禽流感LPAI。H9N2亚型禽流感病毒 ,属低致病力禽流感病毒。 1994~ 1999年期间 ,该亚型病毒在全球呈广泛流行趋势 ,且危害日趋严重。中国在 1994年 ,由陈伯伦等[1] 人报道 ,在广东某鸡场的蛋鸡中分离到我国第 1株H9N2亚型禽… 相似文献
44.
禽流感RT-PCR诊断法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右),可从分子水平上对AIV进行早期快速诊断和流行病学调查 相似文献
45.
禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用 总被引:6,自引:0,他引:6
利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原-核蛋白,并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究,并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验,对354份现地可疑血清样品进行了检测,结果表明:该抗原可以特异性地定性检测出所有15个禽流感病毒亚型的抗血清,与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致,但沉淀线更细密、清晰,保存方便;与我国广泛流行的15种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应,表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉,有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。 相似文献
46.
鸡新城疫、传染性支气管炎、病毒性关节炎三联油乳剂来活苗的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用接种新城疫病毒克隆30株、鸡传染性支气管炎病毒F株(或M株)和病毒性关节炎病毒S-1133株的含毒鸡胚尿液制成三联油乳剂来活疫苗,本苗接种于3-4周龄鸡和成鸡后10天产生兔疫力,保护率达90-100%,免疫期达5个月以上,自1988-1991年,本苗在黑龙江省、广东、辽宁、山东、广西、浙江、河北、吉林等16个省免疫接种267万余只鸡,获得满意结果。 相似文献
47.
采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,以自行设计的H7和Н5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因特异的两对引物,分别扩增了禽流感病毒A/AfricanStarling/983/79(H7N1)株和G株(广东鹅体分离株,H5N1)约1.7kb的HA全基因cDNA。将所扩增的两个基因cDNA未端经T4DNA聚合酶修饰后分别插入pUC18和pBluescript质粒中,得到了两个基因的重组质粒。本研究为国内禽流感病毒分子生物学研究奠定了基础 相似文献
48.
H7亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫原性评估 总被引:6,自引:0,他引:6
本研究以细胞感染-转染技术构建了一株表达H7亚型禽流感病毒(AⅣ)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA.以5×105PFU的rFPV-HA经翅下刺种免疫8周龄SPF鸡,免疫后第3周用100 CID5o的HA基因同源AⅣ A/Arfi St/eng-Q/983/79(H7N1)进行人工感染,1周后采集泄殖腔棉拭子进行病毒分离.免疫后第三周及攻毒后第1、2周对所有动物进行静脉采血,检测血凝抑制(HI)抗体和免疫沉淀(AGP)抗体.结果,攻毒前部分rFPV-HA免疫鸡可检测到HI抗体,但检测不到AGP抗体,野生型病毒(F017)接种组和空白对照组HI抗体和AGP抗体均为阴性.攻毒后rFPV-HA免疫组的HI抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组.rFPV-HA免疫组有6/8的鸡为流感病毒分离阴性,野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性.结果表明rFPV-HA可诱导鸡产生有效的免疫保护反应,阻止或降低消化道病毒排泄.rFPV-HA的成功构建为研制开发H7亚型禽流感活载体疫苗奠定了良好的基础. 相似文献
49.
禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因克隆及序列分析 总被引:3,自引:1,他引:2
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)(GD3/96)NA基因,并对其进行了克隆与测序,该苷酸序列测定结果表明:NA基因全长为1410bp,共编码469个氨基酸。其序列与A/Hongkong/156/97(H5N1)、A/Chicken/HongKong/220/97(H5N1)、A/Goose/guangdong/1/96(H5N1)及A/teal/Hongkong/W312/97(H6N1)分离株核苷酸序列的同源性在88.4%-99.0%之间,其相应氨基酸序列的同源性在89.8-99.2%之间。氨基酸序列与香港流感分离株氨基酸序列相比,在茎部没有出现19个氨基酸残基的缺失,表明香港流感毒株由我国大陆禽流感病毒株直接进化而来可能性不大。 相似文献
50.
采用悬浮灭活试验,以鸡胚感染法,研究奇露、卫可、泛福露益选3种消毒剂在一系列浓度下,分别与H5N1和H5N2亚型禽流感病毒作用5,10min,对禽流感病毒的灭活作用。结果表明:1:200、1:280、1:400、1:800、1:1000浓度的卫可,1:320、1:600、1:800、1:1000浓度的泛福露益,1:200、1:400、1:600浓度的奇露对四亚型禽流感病毒可完全灭活31:200、1:280、1:400、1:800浓度的卫可,1:320、1:600、1:800浓度的泛福露益,1:200、1:400浓度的奇露对比亚型禽流感病毒可完全灭活。 相似文献